J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y R a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t s o f 2 - d e o x y - D - g l u c o s e a n d f e r u l i c a c i d o n m o u s e E h r l i c h s A s c i t e s C a r c i n o m a i n S w i s s a l b i n o m i c e K e y w o r d s : E h r l i c h a s c i t e s c a r c i n o m a ; r a d i o s e n s i t i z a t i o n ; a p o p t o s i s ; 2 - d e o x y - D - g l u c o s e ; f e r u l i c a c i d . A B S T R A C T : T h e o b j e c t i v e o f t h e p r e s e n t s t u d y i s t o e v a l u a t e t h e r a d i o s e n s i t i z i n g a c t i v i t y o f c o m b i n a t i o n o f 2 - d e o x y - D - g l u c o s e ( 2 D G ) a n d f e r u l i c a c i d ( F A ) a g a i n s t E h r l i c h s A s c i t e s C a r c i n o m a ( E A C ) i n S w i s s a l b i n o m i c e . E x t e n s i v e D N A d a m a g e h a s b e e n o b s e r v e d i n t h e c e l l s c o l l e c t e d f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t y o f c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) t h a n t h e o t h e r t r e a t m e n t m o d a l i t i e s . T r e a t m e n t o f E A C t u m o r b e a r i n g m i c e w i t h 2 D G a n d F A b e f o r e 8 G y o f h e m i - b o d y γ - r a d i a t i o n h a s r e s u l t e d i n t h e s i g n i f i c a n t d e c r e a s e o f t u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t c o m p a r e d w i t h E A C c o n t r o l g r o u p . F u r t h e r , c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A a l o n g w i t h r a d i a t i o n d e c r e a s e d t h e v i a b i l i t y o f t u m o r c e l l s i n t h e p e r i t o n e a l f l u i d o f E A C b e a r i n g m i c e . I t h a s b e e n a l s o f o u n d t h a t t h e p e r c e n t a g e o f E A C a p o p t o t i c c e l l s i n t h e p e r i t o n e a l f l u i d h a s b e e n s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) c o m p a r e d w i t h o t h e r t r e a t m e n t g r o u p s . C o m b i n e d t r e a t m e n t o f 2 D G a n d F A a c t i v a t e d c a s p a s e - 3 a n d 9 , w h e n c o m p a r e d w i t h t h e t r e a t m e n t g i v e n w i t h r a d i a t i o n a l o n e i n d i c a t e d r a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t o f t h i s c o m b i n a t i o n ( 2 D G + F A ) . T h i s h a s b e e n f u r t h e r e v i d e n c e d b y t h e m a s s i v e d e c r e a s e o f L D H a c t i v i t y i n t h e 2 D G + F A + I R g r o u p . O n o t h e r h a n d , 2 D G a n d F A c o m b i n a t i o n p r o t e c t s t h e h e m a t o l o g i c a l c h a n g e s o c c u r r e d d u r i n g r a d i a t i o n t r e a t m e n t . H i s t o p a t h o l o g i c a l e x a m i n a t i o n s s h o w e d t h a t t h e c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A o f f e r s p r o t e c t i o n t o n o r m a l t i s s u e s d u r i n g r a d i a t i o n t r e a t m e n t . T a k e n t o g e t h e r , t h e r e s u l t s o f t h e s t u d y c l e a r l y s u g g e s t e d 2 D G a n d F A c o m b i n a t i o n s e n s i t i z e s E A C b e a r i n g m i c e t o r a d i a t i o n e f f e c t s a t t h e s a m e t i m e o f f e r s p r o t e c t i o n t o n o r m a l t i s s u e s f r o m r a d i a t i o n - i n d u c e d d a m a g e . 4 9 9 - 5 1 2 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 5 T h i s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A u t h o r s : B a n d u g u l a V e n k a t a R e d d y , N a g a r a j a n R a j e n d r a P r a s a d . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y a n d B i o t e c h n o l o g y , A n n a m a l a i U n i v e r s i t y , A n n a m a l a i n a g a r - 6 0 8 0 0 2 , T a m i l n a d u , I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : N a g a r a j a n R a j e n d r a P r a s a d . E m a i l : d r p r a s a d n r @ g m a i l . c o m P h o n e N o : + 9 1 9 8 4 2 3 0 5 3 8 4 . F a x : + 9 1 4 1 4 4 2 3 9 1 4 1 . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / d o c u m e n t s / R A 0 2 6 1 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 7 J u n 2 0 1 2 A c c e p t e d : 1 2 J u l 2 0 1 2 P u b l i s h e d : 1 4 J u l 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : B a n d u g u l a V e n k a t a R e d d y , N a g a r a j a n R a j e n d r a P r a s a d . R a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t s o f 2 - d e o x y - D - g l u c o s e a n d f e r u l i c a c i d o n m o u s e E h r l i c h s A s c i t e s C a r c i n o m a i n S w i s s a l b i n o m i c e . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y O r i g i n a l R e s e a r c h A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l

I N T R O D U C T I O N R a d i o t h e r a p y i s o n e o f t h e m a j o r t r e a t m e n t o p t i o n s i n c a n c e r m a n a g e m e n t . A b o u t 5 2 % o f c a n c e r p a t i e n t s r e c e i v e r a d i o t h e r a p y a t l e a s t o n c e d u r i n g t h e i r t r e a t m e n t p e r i o d ( D e l a n e y e t a l . , 2 0 0 5 ) . T h e g o a l o f r a d i o t h e r a p y i s t o d e s t r o y o r i n a c t i v a t e c a n c e r c e l l s w h i l e p r e s e r v i n g t h e i n t e g r i t y o f n o r m a l t i s s u e s w i t h i n t h e t r e a t m e n t f i e l d . M a n y t u m o r s d e v e l o p r e s i s t a n c e t o r a d i o t h e r a p y w h e n g i v e n a l o n e f o r p r o l o n g e d p e r i o d s . I n m o s t c a s e s r a d i o t h e r a p y i s g i v e n a l o n g w i t h s u r g e r y o r c h e m o t h e r a p y . N e w e r a p p r o a c h e s i n c o m b i n a t i o n t h e r a p y a r e g a i n i n g m o m e n t u m b e c a u s e o f t h e b e n e f i c i a l e f f e c t s o f f e r e d . T h e m o s t f r e q u e n t l y u s e d c o m b i n a t i o n o f c h e m o t h e r a p e u t i c a g e n t s i n c l u d e s c i s - d i c h l o r o d i a m i n e - p l a t i n u m ( I I ) , p a c l i t a x e l , d o c e t a x e l , g e m c i t a b i n e a n d t o p o t e c a n ( D i m i t r o u l i s e t a l . , 2 0 0 6 ) . T o r e d u c e t h e t o x i c e f f e c t s o f c o m b i n a t i o n r e g i m e n s , n e w c l a s s o f c o m p o u n d s a r e r e q u i r e d w h i c h s h a l l r e d u c e t h e s i d e e f f e c t s a n d g i v e o p t i m u m t h e r a p e u t i c b e n e f i t s . C o m b i n a t i o n r e g i m e n s u s i n g p h y t o c h e m i c a l s a n d m e t a b o l i c a n a l o g s m a y b e s u i t e d t o a l l e v i a t e t h e s i d e e f f e c t s o f r a d i o t h e r a p y a n d c h e m o t h e r a p y a n d i n c r e a s e t h e e f f e c t o f r a d i a t i o n o n n e o p l a s t i c c e l l s , w h i l e p r o t e c t i n g n o r m a l c e l l s f r o m r a d i a t i o n d a m a g e ( R a o e t a l . , 2 0 0 8 ) . 2 - d e o x y - D - g l u c o s e ( 2 D G ) , a n a n a l o g o f g l u c o s e , i s a g l y c o l y t i c i n h i b i t o r . A f t e r t h e f o r m a t i o n o f g l u c o s e 6 - p h o s p h a t e ( v i a h e x o k i n a s e ) t h e m a j o r p a t h w a y s o f g l u c o s e m e t a b o l i s m i n c l u d e g l y c o l y s i s a n d t h e p e n t o s e p h o s p h a t e c y c l e ( S h a r m a e t a l . , 2 0 0 7 ) . G l y c o l y s i s r e s u l t s i n t h e f o r m a t i o n o f p y r u v a t e a n d t h e p e n t o s e p h o s p h a t e p a t h w a y r e s u l t s i n t h e f o r m a t i o n o f N A D P H ( S h a r m a e t a l . , 2 0 0 7 ) . P y r u v a t e , i n a d d i t i o n t o b e i n g a s u b s t r a t e f o r t h e f o r m a t i o n o f a c e t y l - C o A a n d e n e r g y m e t a b o l i s m v i a t h e t r i c a r b o x y l i c a c i d ( T C A ) c y c l e a n d m i t o c h o n d r i a l o x i d a t i v e p h o s p h o r y l a t i o n , h a s b e e n s h o w n t o s c a v e n g e h y d r o g e n p e r o x i d e a n d o t h e r h y d r o p e r o x i d e s ( A h m a d e t a l . , 2 0 0 4 ) . N A D P H , b y v i r t u e o f b e i n g t h e s o u r c e o f r e d u c i n g e q u i v a l e n t s f o r t h e g l u t a t h i o n e / g l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e / g l u t a t h i o n e r e d u c t a s e s y s t e m , h a s a l s o b e e n s h o w n t o p a r t i c i p a t e i n t h e m e t a b o l i c d e c o m p o s i t i o n o f h y d r o g e n p e r o x i d e a n d o r g a n i c h y d r o p e r o x i d e s ( A h m a d e t a l . , 2 0 0 4 ) . T h e r e f o r e , i n a d d i t i o n t o i t s w e l l k n o w n r o l e i n e n e r g y p r o d u c t i o n , g l u c o s e m e t a b o l i s m a p p e a r s t o b e i n t e g r a l l y r e l a t e d t o t h e m e t a b o l i c d e t o x i c a t i o n o f i n t r a c e l l u l a r h y d r o p e r o x i d e s f o r m e d a s b y p r o d u c t s o f o x i d a t i v e m e t a b o l i s m . I t w a s r e p o r t e d t h a t g l u c o s e d e p r i v a t i o n c a u s e s c y t o t o x i c i t y i n t h e M C F - 7 / A D R h u m a n m u l t i d r u g - r e s i s t a n t b r e a s t c a r c i n o m a c e l l l i n e ( L e e e t a l . , 1 9 9 8 ) . 2 D G i n h i b i t s g r o w t h a n d i n d u c e s a p o p t o s i s i n a n u m b e r o f c a n c e r c e l l l i n e s ( L e e e t a l . , 1 9 9 8 ) . 2 D G e x h i b i t s a c y t o t o x i c e f f e c t i n c a n c e r c e l l s , b u t t h e s a m e d o s e s p a r e s n o r m a l c e l l s ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . I n a d d i t i o n , t h e c y t o t o x i c e f f e c t o f 2 D G i s g r e a t e r i n c a n c e r c e l l s t h a t e x h i b i t m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t o r y d e f e c t s ( G o g v a d z e e t a l . , 2 0 0 8 ) . M a n y m e c h a n i s m s a r e p o s t u l a t e d t o c o n t r i b u t e t o t h e a n t i t u m o r e f f e c t o f 2 D G , i n c l u d i n g i n h i b i t i o n o f g l u c o s e t r a n s p o r t a n d h e x o k i n a s e I I a c t i v i t y , d e p l e t i o n o f c e l l u l a r A T P , b l o c k a g e o f c e l l c y c l e p r o g r e s s i o n , i n d u c t i o n o f a p o p t o s i s , i n d u c t i o n o f e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m s t r e s s , a n d / o r i n d u c t i o n o f o x i d a t i v e s t r e s s ( C o l e m a n e t a l . , 2 0 0 8 ) . 2 D G s i g n i f i c a n t l y s e n s i t i z e s h u m a n o s t e o s a r c o m a a n d n o n - s m a l l c e l l l u n g c a n c e r t o a d r i a m y c i n a n d p a c l i t a x e l i n m o u s e m o d e l s ( M a s c h e k e t a l . , 2 0 0 4 ) . P l a n t p h e n o l i c s c o u l d f i t a s p r o m i s i n g a d j u v a n t s f o r r a d i o t h e r a p y b y e n h a n c i n g r a d i o s e n s i t i v i t y o f c a n c e r c e l l s a n d b y d e c r e a s i n g r a d i a t i o n e f f e c t s i n n o r m a l c e l l s ( K i m e t a l . , 2 0 1 1 ) . R a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t s o f m a n y p h y t o c h e m i c a l s a r e t h o u g h t t o i n t e r a c t w i t h s e v e r a l i n t r a c e l l u l a r s i g n a l i n g m o l e c u l e s w h i c h t h e n m e d i a t e s i g n a l i n g c a s c a d e s i n c l u d i n g c e l l c y c l e a r r e s t a n d c e l l d e a t h ( K i m e t a l . , 2 0 1 1 ) . C u r c u m i n , a p o l y p h e n o l , h a s b e e n r e p o r t e d t o c o n f e r r a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t i n r e l a t i v e l y r a d i o - r e s i s t a n t p r o s t a t e c a n c e r c e l l l i n e P C - 3 ( C h e n d i l e t a l . , 2 0 0 4 ) . F e r u l i c a c i d ( F A ) ( 4 - h y d r o x y - 3 - m e t h o x y c i n n a m i c a c i d ) ( C 1 0 H 1 0 O 4 ) i s a R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 0 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2

u b i q u i t o u s p h e n o l i c c o m p o u n d i n p l a n t t i s s u e s ; t h e r e f o r e , i t c o n s t i t u t e s a b i o a c t i v e i n g r e d i e n t o f m a n y f o o d s . P r o o x i d a n t a c t i v i t y o f h y d r o x y c i n n a m i c a c i d s i n d i f f e r e n t e x p e r i m e n t a l m o d e l s h a s b e e n p r e v i o u s l y r e p o r t e d ( Z h e n g e t a l . , 2 0 0 8 ) . I t h a s b e e n r e p o r t e d e a r l i e r f r o m o u r l a b o r a t o r y t h a t F A s e n s i t i z e s h u m a n c e r v i c a l c a r c i n o m a c e l l s t o r a d i a t i o n a n d t h i s p r o p e r t y i s a t t r i b u t e d t o i t s p r o - o x i d a n t n a t u r e ( K a r t h i k e y a n e t a l . , 2 0 1 1 ) . F u r t h e r , F A i n c o m b i n a t i o n w i t h 2 D G e n h a n c e d r a d i a t i o n e f f e c t s i n N C I - H 4 6 0 c e l l s i n v i t r o ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . T h e r e w e r e n u m b e r o f e x p e r i m e n t a l m o d e l s a v a i l a b l e t o s t u d y i n v i v o a n t i c a n c e r e f f e c t o f t e s t c o m p o u n d s . E A C i s o n e o f t h e m o d e l s s t i l l b e s t s u i t a b l e t o s t u d y r a d i o s e n s i t i z i n g m e c h a n i s m s d u e t o i t s r a p i d g r o w t h r a t e a n d u n d i f f e r e n t i a t e d n a t u r e ( O z a s l a n e t a l . , 2 0 1 1 ) . H e n c e , i n t h e p r e s e n t s t u d y , a n a t t e m p t h a s b e e n m a d e t o e v a l u a t e t h e r a d i o s e n s i t i z i n g p o t e n t i a l o f 2 D G a n d F A i n E A C b e a r i n g e x p e r i m e n t a l a n i m a l s . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S C h e m i c a l s 2 - d e o x y - D - g l u c o s e , f e r u l i c a c i d , e t h i d i u m b r o m i d e a n d a c r i d i n e o r a n g e w e r e p u r c h a s e d f r o m S i g m a C h e m i c a l s C o . , S t . L o u i s , U S A . A p o A l e r t c a s p a s e 3 a n d 9 f l u o r e s c e n t a s s a y k i t w a s p u r c h a s e d f r o m C l o n t e c h L a b o r a t o r i e s , I n c . , C a n a d a . A l l o t h e r c h e m i c a l s a n d s o l v e n t s u s e d i n t h e s t u d y w e r e o f t h e h i g h e s t p u r i t y a n d w e r e p u r c h a s e d f r o m H i m e d i a a n d N I C E c h e m i c a l s , M u m b a i , I n d i a . A n i m a l c a r e a n d h a n d l i n g T e n - t o t w e l v e - w e e k - o l d f e m a l e S w i s s a l b i n o m i c e w e i g h i n g 2 5 t o 3 0 g w e r e s e l e c t e d f r o m a n i n b r e d c o l o n y m a i n t a i n e d u n d e r t h e c o n t r o l l e d c o n d i t i o n s o f t e m p e r a t u r e ( 2 3 ± 2 ° C ) , h u m i d i t y ( 5 0 ± 5 % ) a n d l i g h t ( 1 4 a n d 1 0 h o f l i g h t a n d d a r k , r e s p e c t i v e l y ) . T h e a n i m a l s h a d f r e e a c c e s s t o s t e r i l e f o o d a n d w a t e r . T h e a n i m a l s w e r e h o u s e d i n a p o l y p r o p y l e n e c a g e c o n t a i n i n g s t e r i l e p a d d y h u s k ( p r o c u r e d l o c a l l y ) a s b e d d i n g t h r o u g h o u t t h e e x p e r i m e n t . T h e s t u d y w a s a p p r o v e d b y t h e I n s t i t u t i o n a l A n i m a l E t h i c a l C o m m i t t e e o f A n n a m a l a i U n i v e r s i t y , J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 0 1 R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 F i g u r e 2 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) v i a b l e c e l l c o u n t a n d ( b ) n o n v i a b l e c e l l c o u n t i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . F i g u r e 1 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) t u m o r v o l u m e a n d ( b ) t u m o r w e i g h t i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . F i g u r e 3 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n s e r u m L D H a c t i v i t y i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) .

C h i d a m b a r a m , I n d i a . T r a n s p l a n t a t i o n o f t u m o r a n d t r e a t m e n t s c h e d u l e E A C c e l l s w e r e o b t a i n e d f r o m A m a l a C a n c e r R e s e a r c h I n s t i t u t e , T h r i s s u r , K e r a l a , I n d i a . T h e E A C c e l l s w e r e m a i n t a i n e d i n v i v o i n S w i s s a l b i n o m i c e b y i n t r a p e r i t o n e a l t r a n s p l a n t a t i o n o f 2 x 1 0 6 c e l l s p e r m o u s e e v e r y 1 0 d a y s . A s c i t i c f l u i d w a s d r a w n o u t f r o m E A C t u m o r b e a r i n g m o u s e a t t h e l o g p h a s e ( d a y s 7 - 8 o f t u m o r b e a r i n g ) o f t h e t u m o r c e l l s . E a c h a n i m a l r e c e i v e d 0 . 1 m l o f t u m o r c e l l s u s p e n s i o n c o n t a i n i n g 2 x 1 0 6 t u m o r c e l l s i n t r a p e r i t o n e a l l y . O n t h e 7 t h d a y a f t e r E A C t u m o r i n o c u l a t i o n , w h e n t h e t u m o r s w e r e i n t h e e x p o n e n t i a l g r o w t h p h a s e , t h e a n i m a l s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o n i n e g r o u p s ( e a c h g r o u p = 6 a n i m a l s ) a s f o l l o w s : 5 4 S w i s s a l b i n o m i c e w e r e d i v i d e d i n t o n i n e g r o u p s ( n = 6 ) a n d g i v e n f o o d a n d w a t e r a d l i b i t u m . A l l t h e a n i m a l s i n e a c h g r o u p s e x c e p t G r o u p I r e c e i v e d E A C c e l l s ( 2 x 1 0 6 c e l l s / m o u s e i . p . ) . G r o u p I I I a n d G r o u p V I I r e c e i v e d 0 . 5 g / k g b o d y w e i g h t o f 2 D G t h r o u g h i . p . i n j e c t i o n o n e v e r y a l t e r n a t e d a y f o r 1 4 d a y s . G r o u p I V a n d G r o u p V I I I r e c e i v e d 5 0 m g / k g b o d y w e i g h t o f F A t h r o u g h i . p . i n j e c t i o n o n e v e r y a l t e r n a t e d a y f o r 1 4 d a y s . G r o u p V a n d G r o u p I X r e c e i v e d 0 . 5 g / k g b o d y w e i g h t o f 2 D G a n d 5 0 m g / k g b o d y w e i g h t o f F A t h r o u g h i . p . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 0 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 B C F i g u r e 4 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) D N A d a m a g e ( b ) P e r c e n t a g e t a i l D N A ( c ) t a i l l e n g t h i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . A

i n j e c t i o n o n e v e r y a l t e r n a t e d a y f o r 1 4 d a y s . O n t h e 1 5 t h d a y , a n i m a l s f r o m G r o u p V I t o I X r e c e i v e d 8 G y h e m i - b o d y γ - r a d i a t i o n ( 2 G y / m i n ) . 2 4 h o u r s a f t e r t h e e x p o s u r e o f a n i m a l s t o γ - r a d i a t i o n a n d 1 8 h o f f a s t i n g , t h e a n i m a l s w e r e a n e s t h e t i z e d a n d s a c r i f i c e d b y c e r v i c a l d i s l o c a t i o n . P e r i t o n e a l f l u i d c o n t a i n i n g E A C c e l l s w a s c o l l e c t e d a n d u s e d t o e s t i m a t e D N A d a m a g e a n d a p o p t o t i c m o r p h o l o g i c a l c h a n g e s a n d t u m o r c e l l c o u n t . B l o o d w a s c o l l e c t e d t o a n a l y z e t h e h e m a t o l o g i c a l c h a n g e s . S e r u m w a s c o l l e c t e d t o a n a l y s e t h e L D H a c t i v i t y . T i s s u e s ( L i v e r a n d s p l e e n ) w e r e d i s s e c t e d t o o b s e r v e t h e h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s . T u m o r v o l u m e T h e a s c i t i c f l u i d w a s c o l l e c t e d f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t y o f t h e m o u s e . T h e v o l u m e w a s m e a s u r e d b y t a k i n g i t i n a g r a d u a t e d c e n t r i f u g e t u b e ( B h a t t a c h a r y a e t a l . , 2 0 1 1 ) . T u m o r w e i g h t T h e t u m o r w e i g h t w a s m e a s u r e d b y t a k i n g t h e w e i g h t o f t h e a n i m a l b e f o r e a n d a f t e r t h e c o l l e c t i o n o f R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 0 3 F i g u r e 5 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) a p o p t o t i c m o r p h o l o g y ( b ) p e r c e n t a g e o f a p o p t o s i s i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . A B

t h e a s c e t i c f l u i d f r o m p e r i t o n e a l c a v i t y ( B h a t t a c h a r y a e t a l . , 2 0 1 1 ) . T u m o r c e l l c o u n t T h e a s c i t i c f l u i d w a s t a k e n i n a W B C p i p e t t e a n d d i l u t e d 1 0 0 t i m e s . T h e n a d r o p o f t h e d i l u t e d c e l l s u s p e n s i o n w a s p l a c e d o n t h e N e u b a u e r s c o u n t i n g c h a m b e r a n d t h e n u m b e r s o f c e l l s i n t h e 6 4 s m a l l s q u a r e s w e r e c o u n t e d ( B h a t t a c h a r y a e t a l . , 2 0 1 1 ) . V i a b l e / n o n v i a b l e t u m o r c e l l c o u n t T h e v i a b i l i t y a n d n o n v i a b i l i t y o f t h e c e l l s w e r e c h e c k e d b y t r y p a n b l u e a s s a y . T h e c e l l s w e r e s t a i n e d w i t h t r y p a n b l u e ( 0 . 4 % i n n o r m a l s a l i n e ) d y e . T h e c e l l s t h a t d i d n o t t a k e u p t h e d y e w e r e v i a b l e a n d t h o s e t h a t t o o k t h e d y e w e r e n o n v i a b l e . T h e s e v i a b l e a n d n o n v i a b l e c e l l s w e r e c o u n t e d ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . L a c t a t e d e h y d r o g e n a s e ( L D H ) a s s a y T h e s e r u m s a m p l e w a s a d d e d t o a f r e s h l y p r e p a r e d N A D H s o l u t i o n ( 2 . 5 m g / m l i n 0 . 1 M p h o s p h a t e b u f f e r ; p H 7 . 4 ) , a n d a s o d i u m p y r u v a t e s o l u t i o n ( 2 . 5 m g / m l i n 0 . 1 M p h o s p h a t e b u f f e r , p H 7 . 4 ) w a s a d d e d t o i t a f t e r 2 0 m i n . T h e a b s o r b a n c e o f t h e m i x t u r e w a s n o t e d a t 3 4 0 n m f o r 5 m i n a t r e g u l a r i n t e r v a l s ( W r o b l e w s k i a n d L a D u e , 1 9 5 5 ) . T h e u n i t a c t i v i t y o f L D H w a s e x p r e s s e d a s t h e c h a n g e i n o p t i c a l d e n s i t y / m i n / m g o f p r o t e i n i n s e r u m s a m p l e . T o t a l p r o t e i n c o n t e n t w a s d e t e r m i n e d a t 6 5 0 n m u s i n g f r e s h l y p r e p a r e d s o l u t i o n s o f 2 % a l k a l i n e s o d i u m c a r b o n a t e , 0 . 5 % c o p p e r s u l p h a t e i n 1 % s o d i u m p o t a s s i u m t a r t r a t e a n d F o l i n C i o c a l t e u s p h e n o l r e a g e n t ( L o w r y e t a l . , 1 9 5 1 ) . M e a s u r e m e n t o f D N A d a m a g e D N A d a m a g e w a s e s t i m a t e d b y a l k a l i n e s i n g l e c e l l g e l e l e c t r o p h o r e s i s ( c o m e t a s s a y ) a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d o f S i n g h e t a l . , 1 9 8 8 ( S i n g h e t a l . , 1 9 8 8 ) w i t h s l i g h t m o d i f i c a t i o n ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . T h e e x t e n t o f D N A d a m a g e w a s e s t i m a t e d b y f l u o r e s c e n c e m i c r o s c o p y u s i n g a d i g i t a l c a m e r a a n d a n a l y z e d b y i m a g e a n a l y s i s s o f t w a r e , C A S P . F o r e a c h s a m p l e , 1 0 0 c e l l s w e r e a n a l y z e d a n d c l a s s i f i e d v i s u a l l y i n t o o n e o f f i v e c l a s s e s a c c o r d i n g t o t h e i n t e n s i t y o f f l u o r e s c e n c e ( D N A ) i n t h e c o m e t t a i l . D N A d a m a g e w a s q u a n t i f i e d a s % o f t a i l D N A a n d t a i l l e n g t h . A p o p t o t i c m o r p h o l o g y E A C c e l l s w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t y a n d w a s h e d w i t h P B S a n d f i x e d o n m i c r o s c o p i c s l i d e s w i t h 3 : 1 r a t i o o f m e t h a n o l : a c e t i c a c i d . L a t e r , t h e s e s l i d e s w e r e s t a i n e d w i t h 1 : 1 r a t i o o f e t h i d i u m b r o m i d e a n d a c r i d i n e o r a n g e a s d e s c r i b e d e l s e w h e r e ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . S t a i n e d c e l l s w e r e w a s h e d w i t h P B S a n d v i e w e d u n d e r a f l u o r e s c e n c e m i c r o s c o p e . T h e n u m b e r o f c e l l s s h o w i n g f e a t u r e s o f a p o p t o s i s w a s c o u n t e d a s a f u n c t i o n o f t o t a l n u m b e r o f c e l l s p r e s e n t i n t h e f i e l d . D u r i n g a p o p t o s i s D N A b e c o m e s c o n d e n s e d a n d f r a g m e n t e d . T h i s c o u l d b e o b s e r v e d w h e n s e v e r a l s m a l l s p o t s o f D N A a r e v i s i b l e i n t h e n u c l e u s s t a i n e d b y a c r i d i n e o r a n g e . L a t e r , t h e c e l l m e m b r a n e b e c o m e s p e r m e a b l e t o d y e s l i k e e t h i d i u m b r o m i d e . T h e D N A s p o t s t u r n o r a n g e r e d a f t e r i n t e r c a l a t i o n o f e t h i d i u m b r o m i d e w i t h D N A . C a s p a s e 3 a n d 9 a c t i v i t y a s s a y s A p o A l e r t c a s p a s e - 3 a n d 9 a s s a y s w e r e p e r f o r m e d a c c o r d i n g t o t h e m a n u f a c t u r e r s i n s t r u c t i o n s u s i n g D E V D - A F C a n d L E H D - A M C a s s u b s t r a t e s , R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 0 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 F i g u r e 6 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) c a s p a s e 3 a n d ( b ) c a s p a s e 9 e x p r e s s i o n s i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . A B N u m b e r o f c e l l s X D i l u t i o n f a c t o r C e l l c o u n t = - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - A r e a X T h i c k n e s s o f l i q u i d f i l m

r e s p e c t i v e l y . F l u o r o m e t r i c d e t e c t i o n f o r c a s p a s e 3 i s p e r f o r m e d u s i n g a 4 0 0 n m e x c i t a t i o n f i l t e r a n d 5 0 5 n m e m i s s i o n f i l t e r . F l u o r o m e t r i c d e t e c t i o n f o r c a s p a s e 9 i s p e r f o r m e d u s i n g 3 8 0 n m e x c i t a t i o n f i l t e r a n d 4 6 0 n m e m i s s i o n f i l t e r . E m i s s i o n s o f s a m p l e s w e r e c o m p a r e d w i t h u n i n d u c e d c o n t r o l c e l l s t o d e t e r m i n e t h e i n c r e a s e i n c a s p a s e a c t i v i t i e s . H e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s A t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t a l p e r i o d , t h e n e x t d a y a f t e r a n o v e r n i g h t f a s t i n g b l o o d w a s c o l l e c t e d f r o m f r e e l y f l o w i n g t a i l v e i n a n d u s e d f o r t h e e s t i m a t i o n o f h e m o g l o b i n ( H b ) c o n t e n t , r e d b l o o d c e l l ( R B C ) c o u n t , w h i t e b l o o d c e l l ( W B C ) c o u n t a n d l y m p h o c y t e c o u n t b y s t a n d a r d p r o c e d u r e s u s i n g c e l l d i l u t i o n f l u i d s a n d h a e m o c y t o m e t e r ( M u k h e r j e e , 1 9 8 8 ) . H i s t o p a t h o l o g i c a l s t u d i e s L i v e r a n d s p l e e n o f s a c r i f i c e d m i c e w e r e f i x e d i n f o r m a l d e h y d e - s a l i n e a n d p r o c e s s e d t o p r e p a r e s l i d e s o f t h e t i s s u e s s t a i n e d w i t h h e m a t o x y l i n - e o s i n f o r m i c r o s c o p i c o b s e r v a t i o n o f t h e i r h i s t o p a t h o l o g i c a l s t a t u s . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s S t a t i s t i c a l a n a l y s i s t o e v a l u a t e t h e s i g n i f i c a n c e o f a n y d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e d a t a o f t w o c h o s e n g r o u p s w a s d o n e b y u s i n g o n e - w a y A N O V A f o l l o w e d b y D M R T ( D u n c a n M u l t i p l e R a n g e T e s t ) t a k i n g p < 0 . 0 5 t o t e s t t h e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 0 5 C D B F i g u r e 7 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n ( a ) R B C c o u n t ( b ) h e m o g l o b i n c o n t e n t ( c ) W B C c o u n t ( d ) P e r c e n t a g e o f l y m p h o c y t e s i n E A C b e a r i n g m i c e . V a l u e s a r e g i v e n a s m e a n s ± S . D . o f s i x e x p e r i m e n t s i n e a c h g r o u p . V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c e t c ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 ( D M R T ) . A

V a l u e s n o t s h a r i n g a c o m m o n m a r k i n g ( a , b , c . . e t c . ) d i f f e r s i g n i f i c a n t l y a t p < 0 . 0 5 . R E S U L T S T u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t F i g u r e 1 s h o w s t h e c h a n g e s i n t u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t i n u n t r e a t e d a n d t r e a t e d E A C b e a r i n g m i c e . E A C c o n t r o l a n i m a l s s h o w e d s i g n i f i c a n t t u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t ( 3 . 9 m l a n d 4 . 1 g , r e s p e c t i v e l y ) . T u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t h a s b e e n r e d u c e d s i g n i f i c a n t l y u p o n t h e t r e a t m e n t w i t h 2 D G ( 2 m l a n d 3 . 4 g , r e s p e c t i v e l y ) , F A ( 2 . 1 m l a n d 3 . 6 g . r e s p e c t i v e l y ) a n d I R ( 1 . 5 m l a n d 2 . 4 g , r e s p e c t i v e l y ) a l o n e w h e n c o m p a r e d w i t h E A C c o n t r o l m i c e . C o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A ( 2 D G + F A ) ( 1 . 4 m l a n d 2 . 1 g , r e s p e c t i v e l y ) s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d t h e t u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t c o m p a r e d w i t h 2 D G o r F A a l o n e t r e a t e d g r o u p s . C o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) ( 0 . 5 m l a n d 0 . 5 g , r e s p e c t i v e l y ) h a s s h o w e d a f u r t h e r d e c r e a s e i n t u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t w h e n c o m p a r e d w i t h a l l o t h e r t r e a t m e n t m o d a l i t i e s . T u m o r c e l l v i a b i l i t y F i g u r e 2 s h o w s t h e e f f e c t o f 2 D G a n d F A p r e t r e a t m e n t o n t u m o r c e l l v i a b i l i t y i n γ - r a d i a t i o n t r e a t e d E A C b e a r i n g m i c e . C o m p a r e d w i t h c o n t r o l g r o u p , t h e v i a b l e c e l l c o u n t h a s b e e n d e c r e a s e d i n 2 D G , F A a n d I R t r e a t m e n t g r o u p s . C o m b i n e d t r e a t m e n t o f 2 D G a n d F A h a s r e s u l t e d i n t h e s i g n i f i c a n t d e c r e a s e i n v i a b l e c e l l c o u n t c o m p a r e d w i t h 2 D G o r F A a l o n e t r e a t e d g r o u p s . C o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) h a s s h o w e d a f u r t h e r d e c r e a s e i n v i a b l e c e l l c o u n t c o m p a r e d w i t h 2 D G a n d F A t r e a t m e n t g r o u p . L a c t a t e d e h y d r o g e n a s e a c t i v i t y F i g u r e 3 s h o w s t h e e f f e c t o f 2 D G a n d F A p r e t r e a t m e n t o n L D H a c t i v i t y i n γ - r a d i a t i o n t r e a t e d E A C b e a r i n g m i c e . C o m p a r e d w i t h n o r m a l g r o u p , E A C c o n t r o l m i c e h a v e s h o w n h i g h L D H a c t i v i t y . L D H a c t i v i t y h a s d e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y i n 2 D G , F A a n d 2 D G + F A t r e a t e d g r o u p s c o m p a r e d t o E A C c o n t r o l . 2 D G + F A + I R t r e a t m e n t g r o u p h a s s h o w e d d e c r e a s e d a c t i v i t y o f L D H c o m p a r e d t o I R a l o n e t r e a t e d g r o u p . T h e L D H a c t i v i t y i s n e a r t o n o r m a l i n 2 D G + F A + I R t r e a t m e n t g r o u p . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 0 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 F i g u r e 8 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n t h e l i v e r o f E A C b e a r i n g m i c e . ( A ) m i g r a t i o n o f t u m o r c e l l s c l o s e t o t h e c a p s u l e ( B ) a p p e a r a n c e o f t u m o r c e l l s n e a r c a p s u l e s m i n i m i z e d , n u c l e a r d i s i n t e g r a t i o n o b s e r v e d ( C ) p r e s e n c e o f t u m o r c e l l s n e a r t h e l i n i n g o f t h e c a p s u l e m i n i m i z e d ( D ) t u m o r c e l l s s h o w e d n e c r o s i s , n u c l e a r d i s i n t e g r a t i o n o b s e r v e d ( E ) t u m o r c e l l s a p p e a r e d a d h e r e n t t o t h e l i n i n g o f t h e c a p s u l e ( F ) n e c r o s i s o f t h e t u m o r c e l l s a n d b l a s t f o r m a t i o n o f t h e l i v e r c e l l s o b s e r v e d ( G ) t u m o r c e l l n e u r o s i s a n d b l a s t f o r m a t i o n o f t h e l i v e r c e l l s o b s e r v e d ( H ) V i a b l e t u m o r c e l l s n o t s e e n o n t h e l i n i n g o f t h e c a p s u l e .

D N A d a m a g e F i g u r e 4 a s h o w s p h o t o m i c r o g r a p h s o f D N A d a m a g e ( c o m e t a s s a y ) i n 2 D G , F A a n d I R t r e a t m e n t g r o u p s . T h e c o n t r o l c e l l s h o w e d l a r g e l y n o n - f r a g m e n t e d D N A . W e o b s e r v e d f r a g m e n t e d D N A i n 2 D G , F A a n d r a d i a t i o n t r e a t e d m i c e w h i c h a p p e a r a s a c o m e t d u r i n g s i n g l e c e l l g e l e l e c t r o p h o r e s i s . F i g u r e 4 b & 4 c s h o w s t h e c h a n g e s i n t h e l e v e l s o f % D N A i n t h e t a i l a n d t a i l l e n g t h o f d i f f e r e n t t r e a t m e n t g r o u p s i n E A C b e a r i n g m i c e . T h e r e w e r e n o c h a n g e s i n l e v e l s o f D N A d a m a g e i n t h e u n t r e a t e d c o n t r o l c e l l s . T r e a t m e n t w i t h 2 D G , F A a n d I R a l o n e i n c r e a s e d D N A d a m a g e c o m p a r e d t o u n t r e a t e d c o n t r o l c e l l s . 2 D G + F A + I R t r e a t m e n t g r o u p s h o w s i n c r e a s e d % o f D N A i n t h e t a i l a n d t a i l l e n g t h c o m p a r e d t o a n y o t h e r t r e a t m e n t g r o u p . A p o p t o t i c m o r p h o l o g y C e l l s w i t h c o n d e n s e d o r f r a g m e n t e d c h r o m a t i n , i n d i c a t i v e o f a p o p t o s i s , w e r e o b s e r v e d i n d i f f e r e n t t r e a t m e n t g r o u p s a s c o m p a r e d t o c o n t r o l c e l l s w h i c h s h o w e d e v e n l y d i s t r i b u t e d g r e e n f l u o r e s c e n t c h r o m a t i n ( F i g u r e 5 a ) . F i g u r e 5 b s h o w s t h e q u a n t i t a t i v e r e s u l t o f a p o p t o s i s i n t h e d i f f e r e n t t r e a t m e n t g r o u p s . P e r c e n t a g e o f a p o p t o t i c c e l l s h a s i n c r e a s e d i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t o f 2 D G a n d F A c o m p a r e d w i t h 2 D G a n d F A a l o n e t r e a t m e n t g r o u p s . C o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) h a s s h o w e d 7 9 % o f a p o p t o t i c c e l l s . C a s p a s e - 3 a n d 9 e x p r e s s i o n F i g u r e 6 a a n d b s h o w s t h e s p e c t r o f l u o r o m e t r i c r e a d i n g s f o r t h e a n a l y s i s o f c a s p a s e 3 a n d 9 i n 2 D G , F A a n d I R t r e a t m e n t g r o u p s . T h e a c t i v i t y o f a p o p t o t i c e n z y m e s c a s p a s e - 3 a n d 9 w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n 2 D G , F A a n d 2 D G + F A t r e a t m e n t g r o u p s . T h e g r o u p w i t h t h e t r e a t m e n t o f r a d i a t i o n a l o n e h a s a l s o s h o w e d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n t h e a c t i v i t y o f c a s p a s e - 3 a n d 9 c o m p a r e d w i t h E A C c o n t r o l g r o u p . T r e a t m e n t w i t h 2 D G a n d F A b e f o r e i r r a d i a t i o n h a s r e s u l t e d i n t h e i n c r e a s e d e x p r e s s i o n o f c a s p a s e 3 a n d 9 , c o m p a r e d w i t h t h e g r o u p t r e a t e d w i t h r a d i a t i o n a l o n e . H e m a t o l o g i c a l c h a n g e s F i g u r e 7 s h o w s t h e e f f e c t o f 2 D G , F A a n d I R o n h e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s i n E A C b e a r i n g m i c e . R B C c o u n t a n d h e m o g l o b i n c o n t e n t h a v e b e e n i n c r e a s e d i n t h e R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 0 7 F i g u r e 9 E f f e c t o f 2 D G , F A a n d / o r I R o n h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n t h e s p l e e n o f E A C b e a r i n g m i c e . ( A ) t u m o r c e l l s s e e n p e r i p h e r a l t o t h e s p l e e n i c c a p s u l e ( B ) s p l e e n s h o w s n e c r o s i s a n d f i b r o s i s a r o u n d t h e c a p s u l e s ( C ) v i a b l e t u m o r c e l l s w e r e s e e n a r o u n d t h e l i n i n g o f t h e s p l e e n i c c a p s u l e ( D ) t u m o r c e l l s s e e n d e c r e a s e d a r o u n d t h e c a p s u l e a n d f i b r o s i s o b s e r v e d ( E ) t u m o r c e l l s p r e s e n t a r o u n d t h e s p l e e n i c c a p s u l e s h o w s n e c r o s i s ( F ) l e s s n u m b e r o f t u m o r c e l l s a r o u n d t h e c a p s u l e o b s e r v e d ( G ) t u m o r c e l l s s h o w s n e c r o s i s a n d f i b r i n o l y t i c c h a n g e s o b s e r v e d ( H ) v i a b l e t u m o r c e l l s n o t s e e n o n t h e l i n i n g o f t h e s p l e e n i c c a p s u l e .

2 D G a n d F A t r e a t m e n t g r o u p c o m p a r e d w i t h 2 D G a n d F A a l o n e t r e a t e d g r o u p s . W B C c o u n t a n d % o f l y m p h o c y t e s h a v e b e e n d e c r e a s e d i n t h e 2 D G a n d F A t r e a t m e n t g r o u p . I n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) , R B C c o u n t a n d h e m o g l o b i n c o n t e n t h a d s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a n d W B C c o u n t h a d d e c r e a s e d c o m p a r e d w i t h I R t r e a t m e n t g r o u p a l o n e . H i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s F i g u r e 8 s h o w s t h e h i s t o p a t h o l o g i c a l r e s u l t s o f t h e l i v e r o f t r e a t e d a n d u n t r e a t e d E A C b e a r i n g m i c e . I n E A C c o n t r o l m i c e , c l u m p s o f E A C c e l l s w e r e o b s e r v e d c l o s e t o t h e c a p s u l e o f l i v e r . I n r a d i a t i o n a l o n e t r e a t e d m i c e , f e w c e l l s w e r e s e e n a d h e r e n t t o t h e c a p s u l e a n d a p p e a r e d v i a b l e . B u t t h e r e w e r e n o t u m o r c e l l s o u t s i d e t h e c a p s u l e a n d t h e r e s t o f t h e h e p a t o c y t e s e x h i b i t e d n u c l e a r d i s i n t e g r a t i o n . I n 2 D G a n d F A t r e a t e d g r o u p , t h e t u m o r c e l l s w e r e n o t s e e n b o t h i n s i d e t h e c a p s u l e a n d o u t s i d e t h e c a p s u l e a n d t h e n u c l e a r d i s i n t e g r a t i o n o f t h e h e p a t o c y t e s w a s a l s o o b s e r v e d . T h e h i s t o p a t h o l o g i c a l r e s u l t s o f t h e s p l e e n o f t r e a t e d a n d u n t r e a t e d E A C b e a r i n g m i c e i s s h o w n i n t h e f i g u r e 9 . T h e t u m o r c e l l s w e r e s e e n p e r i p h e r a l t o s p l e e n i c c a p s u l e a n d t h e a n a p h y l a t i c c e l l s w e r e o b s e r v e d d e e p e r t o t h e c a p s u l e , b u t i n t h e r a d i a t i o n g r o u p , t h e t u m o r c e l l s w e r e s e e n p e r i p h e r a l t o t h e c a p s u l e w i t h n e c r o s i s . A n i m a l s r e c e i v e d 2 D G a n d F A t o g e t h e r s h o w e d t h a t , 2 D G a n d F A i n c r e a s e d t h e r a d i a t i o n e f f e c t s o n t u m o r c e l l s b y i n c r e a s i n g t h e t u m o r c e l l n e c r o s i s . D I S C U S S I O N I n t h e p r e s e n t s t u d y , w e o b s e r v e d t h e r a d i o s e n s i t i z i n g p o t e n t i a l o f 2 D G a n d F A i n E A C b e a r i n g S w i s s a l b i n o m i c e . T u m o r v o l u m e a n d t u m o r w e i g h t h a s b e e n r e d u c e d s i g n i f i c a n t l y u p o n t h e t r e a t m e n t w i t h 2 D G ( 2 m l a n d 3 . 4 g , r e s p e c t i v e l y ) , F A ( 2 . 1 m l a n d 3 . 6 g . r e s p e c t i v e l y ) a n d I R ( 1 . 5 m l a n d 2 . 4 g , r e s p e c t i v e l y ) w h e n c o m p a r e d w i t h E A C c o n t r o l m i c e ( 3 . 9 m l a n d 4 . 1 g , r e s p e c t i v e l y ) . I n c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) , a d m i n i s t r a t i o n o f 2 D G a n d F A b e f o r e 8 G y h e m i - b o d y γ - r a d i a t i o n c a u s e d r e t a r d a t i o n i n t h e t u m o r v o l u m e ( 0 . 5 m l ) a n d t u m o r w e i g h t ( 0 . 5 g ) . T h e d e c r e a s e d t u m o r v o l u m e m i g h t b e b e c a u s e o f t h e i n h i b i t i o n o f E A C c e l l p r o l i f e r a t i o n b y t h e c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A . R e d u c t i o n i n v i a b l e c e l l c o u n t i n t h e p e r i t o n e a l f l u i d o f t u m o r h o s t s u g g e s t s t h e r a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t o f c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A i n E A C b e a r i n g m i c e . I t h a s b e e n r e p o r t e d e a r l i e r t h a t t h e c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A d e c r e a s e s t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n o f N C I - H 4 6 0 c e l l s i n v i t r o ( R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 1 ) . T h e i n d u c t i o n o f a p o p t o t i c p a t h w a y i s c r u c i a l f o r t h e a n t i - p r o l i f e r a t i v e p o t e n t i a l o f t r e a t m e n t c o m p o u n d s a d m i n i s t e r e d d u r i n g c a n c e r t h e r a p y ( E s s a c k e t a l . , 2 0 1 1 ) . I n t h i s s t u d y , w e o b s e r v e d a n i n c r e a s e i n t h e p e r c e n t a g e o f E A C a p o p t o t i c c e l l s i n t h e r a d i a t i o n t r e a t e d E A C m i c e . A d m i n i s t r a t i o n o f 2 D G + F A b e f o r e i r r a d i a t i o n h a s r e s u l t e d i n t h e m a x i m a l i n c r e a s e o f a p o p t o t i c c e l l s i n t h e p e r i t o n e a l f l u i d . R e c e n t l y , s p e c i f i c i n t r a c e l l u l a r p r o t e a s e s b e l o n g i n g t o t h e p r o t e a s e f a m i l y h a v e e m e r g e d a s c r u c i a l e f f e c t o r s o f a p o p t o s i s ( E r i k s s o n e t a l . , 2 0 0 9 ) . I t i s w e l l e s t a b l i s h e d t h a t a c t i v a t e d c a s p a s e 9 t r i g g e r s a c a s c a d e t h a t c u l m i n a t e s i n t h e a c t i v a t i o n o f c a s p a s e 3 r e s u l t i n g i n c h r o m o s o m a l D N A f r a g m e n t a t i o n a n d c e l l u l a r m o r p h o l o g i c c h a n g e s c h a r a c t e r i s t i c o f a p o p t o s i s ( T h o r n b e r r y a n d L a z e b n i k , 1 9 9 8 ) . T h e p r e s e n t s t u d y r e s u l t s d e m o n s t r a t e d t h a t i n i t i a t o r c a s p a s e 9 f r o m i n t r i n s i c p a t h w a y a n d e f f e c t o r c a s p a s e 3 p a r t i c i p a t e d i n t h e a p o p t o t i c p r o c e s s f o l l o w i n g r a d i a t i o n ; t h e s e r e s u l t s a r e w e l l c o r r e l a t e d w i t h t h e e a r l i e r f i n d i n g s ( E r i k s s o n e t a l . , 2 0 0 9 ) . I t w a s d e m o n s t r a t e d t h a t g l u c o s e d e p r i v a t i o n p r o m o t e d t h e a c t i v a t i o n o f m i t o c h o n d r i a - d e p e n d e n t p a t h w a y s l e a d i n g t o a p o p t o s i s ( M u n o z - P i n e d o e t a l . , 2 0 0 3 ) . I t h a s b e e n r e p o r t e d e a r l i e r t h a t p h y t o c h e m i c a l s i n d u c e r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s , w h i c h m e d i a t e a p o p t o s i s i n h u m a n c e r v i c a l c a n c e r c e l l s ( J a v v a d i e t a l . , 2 0 0 8 ) . T h e i n d u c t i o n o f D N A s t r a n d b r e a k s i s o f t e n u s e d t o p r e d i c t t h e r a d i o s e n s i t i v i t y o f t u m o r c e l l s . I n c r e a s e d D N A d a m a g e o b s e r v e d d u r i n g R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 0 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2

r a d i a t i o n t r e a t m e n t i n t h e c e l l s i s o l a t e d f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t y o f E A C m i c e . I n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p ( 2 D G + F A + I R ) , t h e e x t e n t o f D N A d a m a g e w a s m o r e , a s i s e v i d e n t b y t h e i n c r e a s e d t a i l l e n g t h a n d % o f D N A i n t a i l . 2 D G i n h i b i t s D N A r e p a i r p a t h w a y s i n c a n c e r c e l l s a f t e r e x p o s u r e t o i o n i z i n g r a d i a t i o n ( S i n t h u p i b u l y a k i t e t a l . , 2 0 0 9 ) . D a m a g e t o D N A b y R O S a n d R N S i s r e p o r t e d t o i n i t i a t e s i g n a l i n g c a s c a d e s a n d r e s u l t s i n a c t i v a t i o n o f t r a n s c r i p t i o n o f s p e c i f i c g r o u p s o f g e n e s w h i c h m a y l e a d t o a p o p t o s i s ( V a l k o e t a l . , 2 0 0 7 ) . P h e n o l i c a c i d s a r e r e p o r t e d t o c a u s e D N A d a m a g e b y i n c r e a s i n g t h e R O S p r o d u c t i o n i n c a n c e r c e l l s ( K i m e t a l . , 2 0 1 1 ; C h e n d i l e t a l . , 2 0 0 4 ) . T h e i n c l u s i o n o f p h y t o c h e m i c a l s i n r a d i o t h e r a p y r e g i m e n s w i l l i m p r o v e t h e t h e r a p e u t i c i n d e x b y k i l l i n g n e o p l a s t i c c e l l s a n d r e d u c i n g r a d i a t i o n t o x i c i t y t o n o r m a l t i s s u e s . T h e m a j o r p r o b l e m t h a t a r i s e s w i t h r a d i a t i o n t r e a t m e n t i s a n e m i a d u e t o r e d u c t i o n i n R B C . I n t h i s s t u d y , e l e v a t e d W B C c o u n t , r e d u c e d h e m o g l o b i n a n d R B C c o u n t w e r e o b s e r v e d i n E A C b e a r i n g m i c e . I t w a s o b s e r v e d t h e r e w a s a d e c r e a s e i n t h e R B C c o u n t , h e m o g l o b i n c o n t e n t a n d W B C c o u n t i n t h e r a d i a t i o n a l o n e t r e a t e d E A C m i c e . M y e l o s u p p r e s s i o n a n d a n e m i a ( r e d u c e d h e m o g l o b i n ) h a v e b e e n f r e q u e n t l y o b s e r v e d i n a s c i t e s c a r c i n o m a ( P r i c e e t a l . , 1 9 5 0 ) . A n e m i a e n c o u n t e r e d i n a s c i t e s c a r c i n o m a m a i n l y d u e t o i r o n d e f i c i e n c y , e i t h e r b y h a e m o l y t i c o r m y e l o p a t h i c c o n d i t i o n s w h i c h f i n a l l y l e a d t o r e d u c e d R B C n u m b e r ( F e n n i n g e r e t a l . , 1 9 5 4 ) . T r e a t m e n t w i t h 2 D G a n d F A b e f o r e i r r a d i a t i o n r e s t o r e d t h e R B C c o u n t a n d h e m o g l o b i n c o n t e n t t o n e a r n o r m a l l e v e l s , w h i c h i n d i c a t e s t h e p r o t e c t i v e a c t i o n o f 2 D G a n d F A a g a i n s t t h e r a d i a t i o n i n d u c e d d a m a g e . I t h a s b e e n r e p o r t e d e a r l i e r t h a t f e r u l i c a c i d o f f e r s p r o t e c t i o n a g a i n s t γ - r a d i a t i o n i n d u c e d d a m a g e i n S w i s s a l b i n o m i c e ( M a u r y a a n d N a i r , 2 0 0 6 ) . I n t r a p e r i t o n e a l a d m i n i s t r a t i o n o f 2 D G a n d F A b e f o r e i r r a d i a t i o n r e s t o r e d t h e W B C c o u n t t o n e a r n o r m a l l e v e l s . T h e o b s e r v e d c h a n g e i n h e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s s u p p o r t s t h e h e m a t o p o i e t i c p r o t e c t i n g a c t i v i t y o f 2 D G a n d F A . I t h a s b e e n a l s o o b s e r v e d t h a t t h e c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A a l s o o f f e r s p r o t e c t i o n a g a i n s t m y e l o t o x i c i t y , t h e m o s t c o m m o n s i d e e f f e c t o f c a n c e r r a d i o t h e r a p y . I t w a s r e p o r t e d e a r l i e r t h a t 2 D G o f f e r s p r o t e c t i o n a g a i n s t p e r c h l o r o e t h y l e n e i n d u c e d a l t e r a t i o n s i n h e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s ( E b r a h i m e t a l . , 2 0 0 1 ) . E a r l i e r r e p o r t s a l s o h i g h l i g h t e d t h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f F A o n h e m a t o p o i e t i c c e l l r e c o v e r y i n γ - i r r a d i a t e d m i c e ( M a e t a l . , 2 0 1 1 ) . T h e m u l t i t u d e o f p a t h o l o g i c a l c h a n g e s c a u s e d b y t h e p r o g r e s s i o n o f t u m o r a s w e l l a s i t s i n h i b i t i o n t h r o u g h t r e a t m e n t c o m p o u n d s a r e e x p e c t e d t o b e r e f l e c t e d i n t h e b i o c h e m i c a l p a r a m e t e r s o f t h e h o s t s y s t e m , p a r t i c u l a r l y p e r t a i n i n g t o t h e l i v e r . I n t h e p r e s e n t s t u d y , i n c r e a s e d L D H a c t i v i t y i n E A C b e a r i n g m i c e m i g h t b e b e c a u s e o f t w o r e a s o n s ; 1 ) p r o g r e s s i o n o f t u m o r 2 ) h i g h r a t e o f g l y c o l y s i s o b s e r v e d i n m a l i g n a n t c o n d i t i o n s ( H a z r a e t a l . , 2 0 0 5 ) . A d m i n i s t r a t i o n o f 2 D G + F A b e f o r e i r r a d i a t i o n h e l p s i n r e s t o r i n g t h e a c t i v i t y o f L D H t o n e a r n o r m a l . T a k e n t o g e t h e r w i t h t h e d e c r e a s e d v i a b l e c e l l c o u n t i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t ( 2 D G + F A + I R ) , t h e r e a s o n f o r r e s t o r a t i o n o f L D H a c t i v i t y c o u l d p a r t l y b e e x p l a i n e d . I n t h e p r e s e n t s t u d y , e x p e r i m e n t a l a n i m a l s e x p o s e d t o γ - r a d i a t i o n a l o n e h a v e s h o w e d c o m p a r a t i v e l y e l e v a t e d l e v e l s o f L D H i n s e r u m . I n a l i g n m e n t w i t h e a r l i e r r e p o r t s , i t i s a s s u m e d t h a t t h e r a d i o s e n s i t i v e o r g a n s t h y m u s a n d s p l e e n m i g h t b e t h e p o s s i b l e s o u r c e s o f i n c r e a s e d a m o u n t s o f s e r u m L D H a f t e r γ - r a d i a t i o n e x p o s u r e ( H o r i e t a l . , 1 9 7 0 ) . I t w a s r e p o r t e d e a r l i e r t h a t t h e l e v e l o f L D H r e l e a s e w a s r e d u c e d s i g n i f i c a n t l y b y a t r e a t m e n t w i t h 2 D G i n n e u r a l p r o g e n i t o r c e l l s ( P a r k e t a l . , 2 0 0 9 ) . M i c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n o f t i s s u e s f r o m E A C c o n t r o l m i c e s h o w e d m a r k e d a l t e r a t i o n s i n t h e s t r u c t u r e o f l i v e r a n d s p l e e n . P r e s e n c e o f t u m o r c e l l s a l o n g t h e l i n i n g o f t h e c a p s u l e s o f l i v e r a n d s p l e e n a r e s e e n i n E A C b e a r i n g m i c e . T r e a t m e n t w i t h 2 D G a n d F A d e c r e a s e d t h e v i a b l e t u m o r c e l l s a l o n g t h e l i n i n g o f t h e c a p s u l e s a n d s h o w e d n e a r t o n o r m a l p a t h o l o g i c a l s t a t u s d e s p i t e b e i n g c h a l l e n g e d b y t h e t u m o r c e l l s . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 0 9

C O N C L U S I O N I n c o n c l u s i o n , t h e p r e s e n t s t u d y f i n d i n g s i n d i c a t e d t h e r a d i o s e n s i t i z i n g p o t e n t i a l o f c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A , b y d e c r e a s i n g t h e t u m o r w e i g h t , t u m o r v o l u m e , t u m o r c e l l c o u n t a n d i n c r e a s i n g t h e e x p r e s s i o n o f c a s p a s e f a m i l y p r o t e a s e s . I t h a s a l s o b e e n u n d e r s t o o d t h a t t h e c o m b i n a t i o n o f 2 D G a n d F A r e s t o r e d t h e h e m a t o l o g i c a l a n d h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s t o n e a r n o r m a l c y . F u r t h e r s t u d i e s h i g h l i g h t i n g t h e m o l e c u l a r m e c h a n i s m s i n v o l v e d i n t h e r a d i o s e n s i t i z i n g a c t i v i t y o f 2 D G a n d F A a r e w a r r a n t e d . A C K N O W L E D G E M E N T T h e f i n a n c i a l a s s i s t a n c e i n t h e f o r m o f S e n i o r R e s e a r c h F e l l o w s h i p t o M r . B a n d u g u l a V e n k a t a R e d d y , b y t h e I n d i a n C o u n c i l o f M e d i c a l R e s e a r c h ( I C M R ) , G o v e r n m e n t o f I n d i a , N e w D e l h i , i s g r a t e f u l l y a c k n o w l e d g e d . W e g r e a t l y a c k n o w l e d g e D r G . P r a b a v a t h i , R a d i a t i o n s a f e t y o f f i c e r , G V N c a n c e r h o s p i t a l , T i r u c h i r a p a l l i , I n d i a , f o r g i v i n g u s t e c h n i c a l a s s i s t a n c e i n h a n d l i n g i r r a d i a t i o n f a c i l i t y . R E F E R E N C E S A h m a d I M , A y k i n - B u r n s N , S i m J E , W a l s h S A , H i g a s h i k u b o R , B u e t t n e r G R . 2 0 0 4 . M i t o c h o n d r i a l O 2 * - a n d H 2 O 2 m e d i a t e g l u c o s e d e p r i v a t i o n - i n d u c e d s t r e s s i n h u m a n c a n c e r c e l l s . J B i o l C h e m . , 2 8 0 : 4 2 5 4 - 4 2 6 3 . B h a t t a c h a r y a S , P r a s a n n a A , M a j u m d a r P , K u m a r R B , H a l d a r P K . 2 0 1 1 . A n t i t u m o r e f f i c a c y a n d a m e l i o r a t i o n o f o x i d a t i v e s t r e s s b y T r i c h o s a n t h e s d i o i c a r o o t a g a i n s t E h r l i c h a s c i t e s c a r c i n o m a i n m i c e . P h a r m B i o l . , 4 9 : 9 2 7 - 9 3 5 . C h e n d i l D , R a n g a R S , M e i g o o n i D , S a t h i s h k u m a r S , A h m e d M M . 2 0 0 4 . C u r c u m i n c o n f e r s r a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t i n p r o s t a t e c a n c e r c e l l l i n e P C - 3 . O n c o g e n e 2 3 : 1 5 9 9 - 1 6 0 7 . C o l e m a n M C , A s b u r y C R , D a n i e l s D , D u J , A y k i n - B u r n s N , S m i t h B J . 2 0 0 8 . 2 - d e o x y - D - g l u c o s e c a u s e s c y t o t o x i c i t y , o x i d a t i v e s t r e s s , a n d r a d i o s e n s i t i z a t i o n i n p a n c r e a t i c c a n c e r . F r e e R a d i c B i o l M e d . , 4 4 : 3 2 2 - 3 3 1 . D e l a n e y G , J a c o b S , F e a t h e r s t o n e C , B a r t o n M . 2 0 0 5 . T h e r o l e o f r a d i o t h e r a p y i n c a n c e r t r e a t m e n t : e s t i m a t i n g o p t i m a l u t i l i z a t i o n f r o m a r e v i e w o f e v i d e n c e - b a s e d c l i n i c a l g u i d e l i n e s . C a n c e r 1 0 4 : 1 1 2 9 - 1 1 3 7 . D i m i t r o u l i s J , T o u b i s M , A n t o n i o u D , M a r o s i s C , A r m e n a k i U , S t a t h o p o u l o s G P . 2 0 0 6 . A l t e r n a t e p a c l i t a x e l - g e m c i t a b i n e a n d p a c l i t a x e l - v i n o r e l b i n e b i w e e k l y a d m i n i s t r a t i o n i n n o n - s m a l l c e l l l u n g c a n c e r p a t i e n t s : a p h a s e I I s t u d y . A n t i c a n c e r R e s . , 2 6 : 1 3 9 7 - 1 4 0 2 . E b r a h i m A S , B a b u E , T h i r u n a v u k k a r a s u C , S a k t h i s e k a r a n D . 2 0 0 1 . P r o t e c t i v e r o l e o f v i t a m i n E , 2 - d e o x y - D - g l u c o s e , a n d t a u r i n e o n p e r c h l o r o e t h y l e n e i n d u c e d a l t e r a t i o n s i n A T P a s e s . D r u g C h e m T o x i c o l . 2 4 : 4 2 9 - 4 3 7 . E r i k s s o n D , L ö f r o t h P O , J o h a n s s o n L , R i k l u n d K , S t i g b r a n d T . 2 0 0 9 . A p o p t o t i c s i g n a l l i n g i n H e L a H e p 2 c e l l s f o l l o w i n g 5 G y o f c o b a l t - 6 0 g a m m a r a d i a t i o n . A n t i c a n c e r R e s . 2 9 : 4 3 6 1 - 4 3 6 6 . E s s a c k M , B a j i c V B , A r c h e r J A . 2 0 1 1 . R e c e n t l y c o n f i r m e d a p o p t o s i s - i n d u c i n g l e a d c o m p o u n d s i s o l a t e d f r o m m a r i n e s p o n g e o f p o t e n t i a l r e l e v a n c e i n c a n c e r t r e a t m e n t . M a r D r u g s 9 : 1 5 8 0 - 1 6 0 6 . F e n n i n g e r L D , M i d e r G B . 1 9 5 4 . I n : G r e e n s t e i n J P , H a d d o w A ( e d ) A d v a n c e s i n c a n c e r r e s e a r c h . A c a d e m i c P r e s s , N e w Y o r k . 2 4 4 . G o g v a d z e V , O r r e n i u s S , Z h i v o t o v s k y B . 2 0 0 8 . M i t o c h o n d r i a i n c a n c e r c e l l s : w h a t i s s o s p e c i a l a b o u t t h e m ? T r e n d s C e l l B i o l . , 1 8 : 1 6 5 - 1 7 3 . H a z r a B , K u m a r B , B i s w a s S , P a n d e y B N , M i s h r a K P . 2 0 0 5 . E n h a n c e m e n t o f t h e t u m o u r i n h i b i t o r y R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 1 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2

a c t i v i t y , i n v i v o , o f d i o s p y r i n , a p l a n t - d e r i v e d q u i n o n o i d , t h r o u g h l i p o s o m a l e n c a p s u l a t i o n . T o x i c o l L e t t . , 1 5 7 : 1 0 9 - 1 1 7 . H o r i Y , T a k a m o r i Y , N i s h i o K . 1 9 7 0 . T h e E f f e c t s o f X - I r r a d i a t i o n o n L a c t a t e D e h y d r o g e n a s e I s o z y m e s i n P l a s m a a n d i n V a r i o u s O r g a n s o f M i c e . R a d i a t R e s . 4 3 : 1 4 3 - 1 5 1 . J a v v a d i P , S e g a n A T , T u t t l e S W , K o u m e n i s C . 2 0 0 8 . T h e c h e m o p r e v e n t i v e a g e n t c u r c u m i n i s a p o t e n t r a d i o s e n s i t i z e r o f h u m a n c e r v i c a l t u m o r c e l l s v i a i n c r e a s e d r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s p r o d u c t i o n a n d o v e r a c t i v a t i o n o f t h e m i t o g e n - a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e p a t h w a y . M o l P h a r m a c o l . 7 3 : 1 4 9 1 - 1 5 0 1 . K a r t h i k e y a n S , K a n i m o z h i G , P r a s a d N R , M a h a l a k s h m i R . 2 0 1 1 . R a d i o s e n s i t i z i n g e f f e c t o f f e r u l i c a c i d o n h u m a n c e r v i c a l c a r c i n o m a c e l l s i n v i t r o . T o x i c o l I n V i t r o . , 2 5 : 1 3 6 6 - 1 3 7 5 . K i m W , S e o n g K M , B u H y u n Y o u n . 2 0 1 1 . P h e n y l p r o p a n o i d s i n r a d i o r e g u l a t i o n : d o u b l e e d g e d s w o r d . E x p M o l M e d . 4 3 : 3 2 3 - 3 3 3 . L e e Y J , G a l o f o r o S S , B e r n s C M , C h e n J C , D a v i s B H , S i m J E . 1 9 9 8 . G l u c o s e d e p r i v a t i o n - i n d u c e d c y t o t o x i c i t y a n d a l t e r a t i o n s i n m i t o g e n - a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e a c t i v a t i o n a r e m e d i a t e d b y o x i d a t i v e s t r e s s i n m u l t i d r u g - r e s i s t a n t h u m a n b r e a s t c a r c i n o m a c e l l s . J B i o l C h e m . , 2 7 3 : 5 2 9 4 - 5 2 9 9 . L o w r y O H , R o s e n b r o u g h N J , F a r r A L , R a n d a l l R J . 1 9 5 1 . P r o t e i n m e a s u r e m e n t w i t h t h e F o l i n p h e n o l r e a g e n t . J B i o l C h e m . 1 9 3 : 2 6 5 - 2 7 5 . M a Z C , H o n g Q , W a n g Y G , T a n H L , X i a o C R , L i a n g Q D . 2 0 1 1 . E f f e c t s o f f e r u l i c a c i d o n h e m a t o p o i e t i c c e l l r e c o v e r y i n w h o l e - b o d y g a m m a i r r a d i a t e d m i c e . I n t J R a d i a t B i o l . 8 7 : 4 9 9 - 5 0 5 . M a s c h e k G , S a v a r a j N , P r i e b e W , B r a u n s c h w e i g e r P , H a m i l t o n K , T i d m a r s h G F . 2 0 0 4 . 2 - d e o x y - D - g l u c o s e i n c r e a s e s t h e e f f i c a c y o f a d r i a m y c i n a n d p a c l i t a x e l i n h u m a n o s t e o s a r c o m a a n d n o n - s m a l l c e l l l u n g c a n c e r s i n v i v o . C a n c e r R e s . , 6 4 : 3 1 - 3 4 . M a u r y a D K , N a i r C K K . 2 0 0 6 . P r e f e r e n t i a l r a d i o p r o t e c t i o n t o D N A o f n o r m a l t i s s u e s b y f e r u l i c a c i d u n d e r e x v i v o a n d i n v i v o c o n d i t i o n s i n t u m o r b e a r i n g m i c e . M o l C e l l B i o c h e m . 2 8 5 : 1 8 1 - 1 9 0 . M u k h e r j e e K L . 1 9 8 8 . M e d i c a l l a b o r a t o r y t e c h n o l o g y . a p r o c e d u r e m a n u a l f o r r o u t i n e d i a g n o s t i c t e s t s . T a t a M c G r a w H i l l , N e w D e l h i . M u n o z - P i n e d o C , R u i z - R u i z C , R u i z D A , P a l a c i o s C , L o p e z - R i v a s A . 2 0 0 3 . I n h i b i t i o n o f g l u c o s e m e t a b o l i s m s e n s i t i z e s t u m o r c e l l s t o d e a t h r e c e p t o r - t r i g g e r e d a p o p t o s i s t h r o u g h e n h a n c e m e n t o f d e a t h - i n d u c i n g s i g n a l i n g c o m p l e x f o r m a t i o n a n d a p i c a l p r o c a s p a s e - 8 p r o c e s s i n g . J B i o l C h e m . , 2 7 8 : 1 2 7 5 9 - 1 2 7 6 8 . O z a s l a n M , K a r a g o z I D , K i l i c I H , G u l d u r M E . 2 0 1 1 . E h r l i c h a s c i t e s c a r c i n o m a . A f r J B i o t e c h n o l . , 1 0 : 2 3 7 5 - 2 3 7 8 . P a r k M , S o n g K S , K i m H K , P a r k Y J , K i m H S , B a e M I , L e e J . 2 0 0 9 . 2 - D e o x y - d - g l u c o s e p r o t e c t s n e u r a l p r o g e n i t o r c e l l s a g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s s t h r o u g h t h e a c t i v a t i o n o f A M P - a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e . N e u r o s c i L e t t . , 4 4 9 : 2 0 1 - 2 0 6 . P r i c e V E , G r e e n f i e l d R E . A n e m i a i n c a n c e r . I n : G r e e n s t e i n J P , H a d d o w A ( e d ) 1 9 5 0 . A d v a n c e s i n c a n c e r r e s e a r c h . A c a d e m i c P r e s s , N e w Y o r k . 1 9 9 - 2 0 0 . R a o S K , R a o P S , R a o B N . 2 0 0 8 . P r e l i m i n a r y i n v e s t i g a t i o n o f t h e r a d i o s e n s i t i z i n g a c t i v i t y o f g u d u c h i ( T i n o s p o r a c o r d i f o l i a ) i n t u m o r - b e a r i n g m i c e . P h y t o t h e r R e s . , 2 2 : 1 4 8 2 - 1 4 8 9 . R e d d y B V , P r a s a d N R . 2 0 1 1 . 2 - d e o x y - D - g l u c o s e c o m b i n e d w i t h f e r u l i c a c i d e n h a n c e s r a d i a t i o n r e s p o n s e i n n o n - s m a l l c e l l l u n g c a r c i n o m a c e l l s . C e n t E u r J B i o l . , 6 : 7 4 3 - 7 5 5 . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 5 1 1

S h a r m a S , G u t h r i e P H , C h a n S S , H a q S , T a e g t m e y e r H . 2 0 0 7 . G l u c o s e p h o s p h o r y l a t i o n i s r e q u i r e d f o r i n s u l i n - d e p e n d e n t m T O R s i g n a l l i n g i n t h e h e a r t . C a r d i o v a s c R e s . , 7 6 : 7 1 - 8 0 . S i n g h N P , M c C o y M T , T i c e R R , S c h n e i d e r E L . 1 9 8 8 . A s i m p l e t e c h n i q u e f o r q u a n t i f i c a t i o n o f l o w l e v e l s o f D N A d a m a g e i n i n d i v i d u a l c e l l s . E x p C e l l R e s . , 1 7 5 : 1 8 4 - 1 9 1 . S i n t h u p i b u l y a k i t C , G r i m e s K R , D o m a n n F E , X u Y , F a n g F , I t t a r a t W . 2 0 0 9 . p 5 3 i s a n i m p o r t a n t f a c t o r f o r t h e r a d i o s e n s i t i z a t i o n e f f e c t o f 2 - d e o x y - D - g l u c o s e . I n t J O n c o l . 3 5 : 6 0 9 - 6 1 5 . T h o r n b e r r y N A , L a z e b n i k Y . 1 9 9 8 . C a s p a s e s : E n e m i e s w i t h i n . S c i e n c e 2 8 1 : 1 3 1 2 - 1 3 1 6 . V a l k o M , L e i b f r i t z D , M o n c o l J , C r o n i n M T , M a z u r M , T e l s e r J . 2 0 0 7 . F r e e r a d i c a l s a n d a n t i o x i d a n t s i n n o r m a l p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s a n d h u m a n d i s e a s e . I n t J B i o c h e m C e l l B i o l . , 3 9 : 4 4 - 8 4 . W r o b l e w s k i F , L a D u e J S . 1 9 5 5 . L a c t i c d e h y d r o g e n a s e a c t i v i t y i n b l o o d . P r o c S o c E x p B i o l M e d . , 9 0 : 2 1 0 - 2 1 3 . Z h e n g L F , D a i F , Z h o u B , Y a n g L , L i u Z L . 2 0 0 8 . P r o o x i d a n t a c t i v i t y o f h y d r o x y c i n n a m i c a c i d s o n D N A d a m a g e i n t h e p r e s e n c e o f C u ( I I ) i o n s : m e c h a n i s m a n d s t r u c t u r e - a c t i v i t y r e l a t i o n s h i p . F o o d C h e m T o x i c o l . , 4 6 : 1 4 9 - 1 5 6 . R e d d y a n d P r a s a d , 2 0 1 2 5 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 9 9 - 5 1 2 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g Y o u r e t a i n y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / S u b m i t . p h p .