J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y S t u d i e s o n s o m e b i o c h e m i c a l e f f e c t s o f a q u e o u s l e a f E x t r a c t o f l a n d o l p h i a o w e r r i e n c e o n a l b i n o r a t s K e y w o r d s : E t h n o - m e d i c i n e , h e m o g l o b i n , l i v e r e n z y m e s , m e d i c i n a l p l a n t , p e r o x i d a t i o n , p r o t e i n . A B S T R A C T : T h e e f f e c t s o f a q u e o u s l e a f e x t r a c t ( c r u d e ) o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e o n s o m e b i o c h e m i c a l p a r a m e t e r s i n a d u l t m a l e a n d f e m a l e A l b i n o r a t s w e r e i n v e s t i g a t e d . A d m i n i s t r a t i o n o f t h e p l a n t l e a f e x t r a c t w a s b y g a v a g e a t a d o s e l e v e l o f 2 0 m g / k g , 3 0 m g / k g a n d 4 0 m g / k g b o d y w e i g h t i n 0 . 5 m l s a l i n e r e s p e c t i v e l y , d a i l y f o r 2 1 d a y s . T h e c o n c e n t r a t i o n o f A L T a n d A S T w e r e n o n - s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a s t h e d o s e i n c r e a s e d . A l k a l i n e p h o s p h a t a s e ( A L P ) l e v e l a l s o i n c r e a s e d n o n - s i g n i f i c a n t l y , b u t n o t d o s e d e p e n d e n t . P r o t e i n l e v e l a l s o s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n a d o s e d e p e n d e n t f a s h i o n . H e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y , w h i l e l i p i d p e r o x i d a t i o n l e v e l d e c r e a s e d n o n - s i g n i f i c a n t l y a s t h e d o s e i n c r e a s e d . T h e n o n - s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n l i v e r e n z y m e c o n c e n t r a t i o n s i n t h i s s t u d y s h o w e d t h a t t h e L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e l e a f e x t r a c t m a y n o t b e t o x i c t o t h e r a t l i v e r , w h i l e t h e l o w l i p i d p e r o x i d a t i o n l e v e l s s h o w e d t h a t i t m a y h a v e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y . 4 1 0 - 4 1 7 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 5 T h i s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A u t h o r s : F r i d a y O U h e g b u , A m a d i k e E U g b o g u a n d K i n g s l e y C N w o k u . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y , F a c u l t y o f B i o l o g i c a l a n d P h y s i c a l S c i e n c e s A b i a S t a t e U n i v e r s i t y , P M B 2 0 0 0 , U t u r u , N i g e r i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : F r i d a y O U h e g b u . E m a i l : f o u h e g b u @ y a h o o . c o m P h o n e N o : + 2 3 4 ( 0 ) 8 0 3 5 4 2 6 5 0 0 . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / d o c u m e n t s / R A 0 2 3 8 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 2 M a y 2 0 1 2 A c c e p t e d : 1 4 M a y 2 0 1 2 P u b l i s h e d : 1 6 J u n 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : F r i d a y O U h e g b u . A m a d i k e E U g b o g u a n d K i n g s l e y C N w o k u . S t u d i e s o n s o m e b i o c h e m i c a l e f f e c t s o f a q u e o u s l e a f E x t r a c t o f l a n d o l p h i a o w e r r i e n c e o n a l b i n o r a t s . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y O r i g i n a l R e s e a r c h A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l

I N T R O D U C T I O N L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e i s a w i l d p l a n t u s u a l l y f o u n d g r o w i n g w i l d i n A f r i c a a n d M a d a g a s c a r . T h e p l a n t b e l o n g s t o t h e f a m i l y A p o c y n a c e a e a n d i t i s d i s t i n g u i s h e d b y a c o r o l l a t u b e w h i c h i s u s u a l l y t h i c k e n e d a b o v e t h e a n t h e r s . I t p r o d u c e s g l a b r o u s f r u i t s , w h i c h i s c h a r a c t e r i z e d b y d e n s e i n f l o r e s c e n c e ( P e r s o n , 1 9 6 2 ; B u r k i l l , 1 9 9 4 ) . O t h e r s p e c i e s o f t h e g e n u s i n c l u d e L a n d o l p h i a h i r s u t e a n d L a n d o l p h i a k i r k i . T h e w i l d p l a n t i s r i c h i n n u t r i t i o n a l c o n t e n t a s i t s c o m p o s i t i o n p a r a d e s r a r e f o o d n u t r i e n t s e s p e c i a l l y t h e v i t a m i n s , c a r o t e n e a n d m i n e r a l s ( E b i a n d O f o e f u l e , 1 9 9 7 ) . I n S o u t h E a s t o f N i g e r i a , t h e e x t r a c t f r o m L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e i s u s e d i n t h e f o l k l o r e t r e a t m e n t o f v e n e r e a l d i s e a s e , c o l i c d i s e a s e s , t e e t h c l e a n i n g , c u r i n g a n d c o n t r o l o f d i a b e t e s . T h e l a t e x i s d r u n k o r u s e d a s a n e n e m a f o r i n t e s t i n a l w o r m s , a n d i n t r e a t m e n t o f a r r o w p o i s o n . P r e l i m i n a r y p h o t o c h e m i c a l t e s t s o n L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e h a v e s h o w n t h a t i t c o n t a i n s a c t i v e c a r d i o g l y c o s i d e s , s a p o n i n s , t a n n i n s , f l a v o n o i d s a n d s t e r o i d s a n d a l s o s h o w s a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t i e s ( I w u 1 9 9 3 ) . T h e a n t i m i c r o b i a l s c r e e n i n g o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e a m o n g o t h e r p l a n t s h a s s h o w n t h a t t h e e x t r a c t i n h i b i t s E s c h e r i c h i a c o l i , B a c i l l u s s u b t i l i s , C a n d i d a a l b i c a n s a n d A s p e r g i l l u s n i g e r a n d t h e a c t i v i t i e s w e r e l i n k e d t o t h e p r e s e n c e o f s t e r o i d s , t a n n i n s a n d g l y c o s i d e s i n t h e p l a n t s ( E b i a n d O f o e f u l e , 1 9 9 7 ; O k e k e e t a l . , 2 0 0 1 ) T h e l i v e r i s t h e c e n t r a l o r g a n t h a t c o - o r d i n a t e a n d m o d u l a t e s m o s t b i o c h e m i c a l a c t i v i t i e s i n t h e b o d y . T h e m e t a b o l i c a c t i v i t i e s o f t h e l i v e r a r e e s s e n t i a l f o r p r o v i d i n g f u e l t o t h e b r a i n , m u s c l e a n d o t h e r p e r i p h e r a l o r g a n s ( C h a n g e t a l . , 2 0 0 4 ) . M o s t c o m p o u n d s a b s o r b e d b y t h e i n t e s t i n e g o t h r o u g h t h e l i v e r , w h i c h e n a b l e s i t t o r e g u l a t e t h e l e v e l o f m e t a b o l i t e s i n t h e b l o o d ( L e h n i n g e r , 2 0 0 5 ) . T h e l i v e r p l a y s a c e n t r a l r o l e i n t h e r e g u l a t i o n o f l i p i d m e t a b o l i s m , d e t o x i f i c a t i o n a n d b i o t r a n s f o r m a t i o n o f f o r e i g n c o m p o u n d s t o m o r e s o l u b l e f o r m s f o r f u r t h e r b r e a k d o w n a n d e x c r e t i o n ( H w a n g e t a l . , 2 0 0 2 ) . A l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e [ A L T ] a c t i v i t y r i s e s i n v i r a l a n d t o x i c h e p a t i t i s a n d t h e d e g r e e a n d t i m e c o u r s e o f i t s e l e v a t i o n p a r a l l e l t o t h o s e o f A s p a r t a t e a m i n o t r a n s f e r a s e [ A S T ] a c t i v i t y . A n e l e v a t e d A L T a n d a l k a l i n e p h o s p h a t a s e [ A L P ] a c t i v i t y a l s o o c c u r s i n c i r r h o s i s , e x t r a h e p a t i c b i l i a r y o b s t r u c t i o n a n d h e p a t i c m e t a s t a s i s , w h i l e i n c o n s i s t e n t e l e v a t i o n s o c c u r i n a c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n a n d s k e l e t a l m u s c l e d i s e a s e ( J e n s e n a n d F r e e s e , 2 0 0 9 ) . D i s e a s e s l i k e s e v e r e b u r n s , s e v e r e r e n a l d i s e a s e a n d c h r o n i c h e p a t i t i s a n d s a r c o i d o s i s c a u s e r a p i d l o s s o f p l a s m a p r o t e i n a n d h e m o g l o b i n . L i p i d p e r o x i d a t i o n p l a y s a r o l e i n c a r c i n o g e n e s i s a n d a r t e r i o s c l e r o s i s a n d b y e x t e n s i o n p r e v e n t s d a m a g e t o c e l l s t h a t r e s u l t i n t o d i s e a s e c o n d i t i o n ( H s i e h e t a l . , 2 0 0 9 ) . S i n c e t h e c r u d e p l a n t l e a f e x t r a c t o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e i s u s e d f o r f o l k l o r e t r e a t m e n t a n d m a n a g e m e n t o f v a r i o u s a i l m e n t s : v e n e r e a l d i s e a s e , c o l i c , d i a b e t e s , w o r m e x p u l s i o n a n d t e e t h c l e a n i n g . T h i s p r e s e n t s t u d y w a s c o n d u c t e d t o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f t h e p l a n t l e a f e x t r a c t o n t h e s t a b i l i t y o f t h e l i v e r , v i s - à - v i s i t s e f f e c t o n l i v e r e n z y m e s [ A L T , A S T a n d A L P ] , s e r u m p r o t e i n l e v e l s , h e m o g l o b i n a n d l i p i d p e r o x i d a t i o n . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S P l a n t M a t e r i a l T h e l e a v e s o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e U n i v e r s i t y c a m p u s w h e r e i t i s g r o w n a s o r n a m e n t a l p l a n t ; i n J a n u a r y 2 0 1 2 . T h e p l a n t w a s a u t h e n t i c a t e d a n d t a x o n o m i c a l l y i d e n t i f i e d a t t h e D e p a r t m e n t o f P l a n t S c i e n c e a n d B i o t e c h n o l o g y , A b i a S t a t e U n i v e r s i t y , U t u r u , N i g e r i a . V o u c h e r s p e c i m e n o f t h e p l a n t w a s d e p o s i t e d a t t h e D e p a r t m e n t a l h e r b a r i u m . T h e p l a n t l e a v e s w e r e w a s h e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r t o r e m o v e d i r t a n d c o n t a m i n a n t s , a n d t h e n s u n d r i e d . P l a n t E x t r a c t T h e d r y l e a f s a m p l e s w e r e m i l l e d i n t o a f i n e p o w d e r u s i n g A r t h u r m i l l i n g m a c h i n e . 2 0 g o f t h e m i l l e d U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 4 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7

l e a f s a m p l e w a s s o a k e d i n 2 0 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r , a n d t h e m i x t u r e w a s l e f t t o s t a n d f o r 4 8 h r s w i t h o c c a s i o n a l s t i r r i n g . F i l t r a t i o n w a s d o n e w i t h a m u s l i n b a g . T h e c o n c e n t r a t i o n o f t h e e x t r a c t w a s d e t e r m i n e d t o b e 2 7 . 2 m g / m l . A n i m a l s S e x u a l l y m a t u r e d a d u l t a l b i n o r a t s ( 3 2 m a l e s a n d 3 2 f e m a l e s ) o f 6 w e e k s o l d a n d w e i g h i n g b e t w e e n 1 8 5 t o 2 0 0 g w e r e u s e d f o r t h e i n v e s t i g a t i o n . T h e a n i m a l s w e r e k e p t i n t h e l a b o r a t o r y u n d e r c o n s t a n t t e m p e r a t u r e ( 2 4 ± 4 ° C ) f o r a t l e a s t o n e w e e k b e f o r e a n d t h r o u g h o u t t h e e x p e r i m e n t a l w o r k . T h e a n i m a l s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o f o u r g r o u p s o f e i g h t m a l e s a n d e i g h t f e m a l e s e a c h a n d h o u s e d i n s t a n d a r d c a g e s . T h e a n i m a l s w e r e a l l o w e d f o r f o o d a n d w a t e r a d l i b i t u m . A p p r o v a l f o r a n i m a l s t u d i e s w a s o b t a i n e d f r o m t h e A n i m a l E t h i c s C o m m i t t e e o f C o l l e g e o f H e a l t h S c i e n c e s , A b i a S t a t e U n i v e r s i t y , U t u r u . G r o u p o n e a n i m a l s s e r v e d a s c o n t r o l , a n d r e c e i v e d ( 0 . 5 m l ) o f n o r m a l s a l i n e w h i c h i s t h e v e h i c l e f o r t h e e x t r a c t , w h i l e g r o u p s t w o , t h r e e a n d f o u r r e c e i v e d 2 0 m g / k g , 3 0 m g / k g a n d 4 0 m g / k g b o d y w e i g h t o f t h e p l a n t e x t r a c t r e s p e c t i v e l y i n 0 . 5 m l s t e r i l e s a l i n e . T h e e x t r a c t w a s a d m i n i s t e r e d o n c e d a i l y f o r 2 1 d a y s . C o l l e c t i o n o f B l o o d S a m p l e T h e a n i m a l s w e r e s a c r i f i c e d u n d e r l i g h t c h l o r o f o r m a n e s t h e s i a , a n d b l o o d c o l l e c t e d f r o m t h e l i v e r . T h e b l o o d s a m p l e w a s c e n t r i f u g e d f o r 1 0 m i n a t 3 0 0 0 r e v . t o o b t a i n a c l e a r s u p e r n a t a n t ( s e r u m ) w h i c h w a s s t o r e d a t - 2 0 ° C u n t i l a s s a y e d f o r b i o c h e m i c a l p a r a m e t e r s . B i o c h e m i c a l e f f e c t s A L T a n d A S T A s s a y o f A L T a n d A S T w a s d o n e u s i n g R a n d o x d i a g n o s t i c k i t s . D e t e r m i n a t i o n w a s b a s e d o n t h e p r i n c i p l e d e s c r i b e d b y R e i t m a n a n d F r a n k e l , ( 1 9 5 7 ) . T h e m e t h o d i s b a s e d o n t h e d e t e r m i n a t i o n o f p y r u v i c a c i d a s a p r o d u c t o f t h e r e a c t i o n c a t a l y z e d b y a l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e o r a s a p r o d u c t o f d e c a r b o x y l a t i o n o f t h e o x a l o a c e t a t e p r o d u c e d b y a s p a r t a t e a m i n o t r a n s f e r a s e c a t a l y z e d r e a c t i o n . T h e a s s a y p r o c e d u r e f o r A L T a n d A S T a r e t h e s a m e , e x c e p t t h a t f o r A L T , a l a n i n e c i t r a t e i s a d d e d . T h e c o l o r a t i o n p r o d u c e d w i t h 2 , 4 d i n i t r o p h e n y l - h y d r a z i n e i s r e a d a t 5 4 0 n m o n a s p e c t r o p h o t o m e t e r . A L P A l k a l i n e p h o s p h a t a s e w a s d e t e r m i n e d u s i n g R a n d o x d i a g n o s t i c k i t s f o l l o w i n g t h e p r i n c i p l e d e s c r i b e d b y N e u m a n a n d V a n V r e e d e n a l , ( 1 9 6 7 ) . T h e a s s a y i s b a s e d o n t h e a c t i o n o f a l k a l i n e p h o s p h a t a s e ( A L P ) o n p h e n y l p h o s p h a t e t o l i b e r a t e p h e n o l a n d p h o s p h a t e . T h e p h e n o l r e l e a s e d f o r m s a c h r o m o g e n w i t h 4 - a m i n o a n t i p y r e n e i n t h e p r e s e n c e o f p o t a s s i u m f e r r o c y a n i d e t h a t a b s o r b s a t 5 4 0 n m . T o t a l P r o t e i n T o t a l s e r u m p r o t e i n w a s d e t e r m i n e d b y t h e L o w r y m e t h o d ( 1 9 5 1 ) . 1 m l o f e a c h u n k n o w n p r o t e i n s o l u t i o n ( s e r u m ) w a s t a k e n i n t o 3 m l o f B i u r e t r e a g e n t . T h e m i x t u r e w a s w a r m e d f o r 1 5 m i n a t 3 7 o C a n d a l l o w e d t o c o o l . T h e a b s o r b a n c e o f e a c h t e s t t u b e w a s r e a d a t 5 4 0 n m . H e m o g l o b i n H e m o g l o b i n w a s d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d d e s c r i b e d b y D a c i e a n d L e w i s , 1 9 9 0 . L i p i d p e r o x i d a t i o n L i p i d p e r o x i d a t i o n w a s d e t e r m i n e d b y t h e m e t h o d o f W a l l i n e t . a l . , ( 1 9 9 3 ) . B l o o d s a m p l e s ( 0 . 5 m l ) w e r e t r a n s f e r r e d t o a t e s t t u b e a n d 0 . 1 m l o f T r i t o n X - 1 0 0 w a s a d d e d a n d m i x e d p r o p e r l y . N e x t , 3 m l o f 3 0 % T C A a n d 1 m l o f 0 . 6 % T B A w e r e a d d e d . T h e c o n t e n t s w e r e s h a k e n p r o p e r l y a n d t h e s u s p e n s i o n w a s f i l t e r e d . T h e c l e a r f i l t r a t e ( 3 m l ) w a s m i x e d w i t h 2 m l o f 0 . 6 % T B A a n d h e a t e d f o r 1 5 m i n i n a b o i l i n g w a t e r b a t h . T h e m i x t u r e w a s a l l o w e d t o c o o l a n d 2 m l o f c h l o r o f o r m w a s a d d e d . T h e m i x t u r e w a s c e n t r i f u g e d a t 1 0 , 0 0 0 g f o r 1 5 m i n a n d t h e a b s o r b a n c e w a s r e a d a t 5 3 5 n m . L i p i d p e r o x i d a t i o n p r o d u c t s w e r e e x t r a p o l a t e d b y a s t a n d a r d c u r v e . U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 4 1 2

S t a t i s t i c a l A n a l y s i s D a t a o b t a i n e d w e r e s u b j e c t e d t o t w o - w a y a n a l y s i s o f V a r i a n c e ( A N O V A ) f o l l o w e d b y D e n n e t t s t e s t t o d e t e r m i n e t h e s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e o f t h e v a r i o u s c h a n g e s i n t h e p a r a m e t e r s m e a s u r e d . S P S S s o f t w a r e w a s u s e d t o a n a l y z e d a t a . V a l u e s w e r e c o n s i d e r e d s i g n i f i c a n t w h e n p 0 . 0 1 R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N A L T c o n c e n t r a t i o n s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d ( p 0 . 0 1 ) i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o c o n t r o l . ( T a b l e 1 ) . T h e r e i s a l s o a n o n s i g n i f i c a n t i n c r e a s e ( p 0 . 0 1 ) i n A L T c o n c e n t r a t i o n f o r t h e m a l e a n i m a l s c o m p a r e d t o t h e f e m a l e a n i m a l s a s t h e d o s e o f a d m i n i s t e r e d e x t r a c t i n c r e a s e d . T h e e f f e c t o f t h e p l a n t e x t r a c t s e e m s t o b e d o s e d e p e n d e n t a s t h e e n z y m e c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e d w i t h i n c r e a s e i n d o s e o f p l a n t e x t r a c t a d m i n i s t e r e d . T a b l e 1 a b o v e a l s o s h o w s t h e v a r i a t i o n i n A S T c o n c e n t r a t i o n i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l . A s i g n i f i c a n t i n c r e a s e ( p 0 . 0 1 ) i s o b s e r v e d i n t h e e l e v a t i o n o f A S T i n t e s t a n i m a l s a s t h e d o s e i n c r e a s e d . T h e e f f e c t o f t h e p l a n t e x t r a c t s e e m t o b e d o s e d e p e n d e n t a s t h e r e w a s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n e n z y m e c o n c e n t r a t i o n a s t h e d o s e i n c r e a s e d . T h e r e w e r e n o s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 1 ) d i f f e r e n c e s i n e n z y m e c o n c e n t r a t i o n o b s e r v e d f o r t h e m a l e a n d f e m a l e t e s t a n i m a l s . T h e a l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y i n t h e t e s t a n i m a l s i n c r e a s e d ( p 0 . 0 1 ) n o n - s i g n i f i c a n t l y w i t h i n c r e a s e i n d o s e o f t h e e x t r a c t c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l ( T a b l e 1 ) . T h e m a l e s h a d n o n - s i g n i f i c a n t l y ( p 0 . 0 1 ) h i g h e r a l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y c o m p a r e d t o t h e f e m a l e s . T a b l e 2 s h o w s t h e v a r i a t i o n s i n t o t a l p r o t e i n l e v e l i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o c o n t r o l . P r o t e i n c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y ( p 0 . 0 5 ) c o m p a r e d t o c o n t r o l . T h e r e i s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p 0 . 0 5 ) f o r t h e v a r i a t i o n i n p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n f o r t h e m a l e a n d f e m a l e a l b i n o r a t s . T h e e f f e c t o f t h e p l a n t e x t r a c t s e e m s t o b e d o s e d e p e n d e n t a s i n c r e a s e i n p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n i s o b s e r v e d w i t h i n c r e a s e i n d o s e o f e x t r a c t a d m i n i s t e r e d . H e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e d ( p 0 . 0 1 ) s i g n i f i c a n t l y i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l ( t a b l e 3 ) . T h e i n c r e a s e i s d o s e d e p e n d e n t . T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 1 ) d i f f e r e n c e i n h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n b e t w e e n t h e m a l e a n d f e m a l e t e s t a n i m a l s . L i p i d p e r o x i d a t i o n l e v e l s d e c r e a s e d ( p 0 . 0 1 ) s i g n i f i c a n t l y i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l . ( T a b l e 4 ) . T h e r e a r e n o s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 1 ) d i f f e r e n c e i n v a l u e s f o r t h e m a l e a n d t h e f e m a l e r a t s . A s t h e d o s e o f a d m i n i s t e r e d e x t r a c t i n c r e a s e d t h e r e w e r e s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 1 ) r e d u c t i o n s i n l i p i d p e r o x i d a t i o n v a l u e s . I t i s w e l l k n o w n t h a t t h e l i v e r i s t h e f i r s t t a r g e t o r g a n i n t o x i c o l o g i c a l p r o s p e c t s r e g a r d i n g i t s r o l e i n d e t o x i f i c a t i o n , b i o t r a n s f o r m a t i o n a n d e x c r e t i o n o f x e n o b i o t i c . A f t e r e n t e r i c u p t a k e o f i n j u r i o u s m a t e r i a l s , i t i s t h e f i r s t o r g a n t o b e e x p o s e d t o s u c h h a z a r d s v i a t h e p o r t a l c i r c u l a t i o n ( R o s s a n d K a s u m , 2 0 0 2 ) . T h e m a r k e r e n z y m e s a s s a y e d a r e s p e c i f i c a l l y l o c a t e d i n s o m e c e l l ; U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 A n i m a l ( n = 5 ) G r o u p 1 G r o u p 2 G r o u p 3 G r o u p 4 C o n c . o f e x t r a c t C o n t r o l 2 0 m g / k g 3 0 m g / k g 4 0 m g / k g S e x M F M F M F M F A L T A S T A L P 1 9 . 2 ± 0 . 2 6 1 6 . 3 ± 0 . 0 5 2 3 . 4 ± 0 . 0 6 1 6 . 2 ± 0 . 4 4 1 3 . 3 ± 0 . 2 1 2 0 . 5 ± 0 . 2 9 1 9 . 5 ± 0 . 3 5 1 6 . 4 ± 0 . 2 5 2 3 . 6 ± 0 . 0 2 1 6 . 4 ± 0 . 1 1 1 3 . 5 ± 0 . 1 3 2 0 . 6 ± 0 . 1 6 1 9 . 6 ± 0 . 0 1 1 6 . 5 ± 0 . 0 6 2 3 . 6 ± 0 . 2 4 1 6 . 5 ± 0 . 0 4 1 3 . 5 ± 0 . 7 1 2 0 . 6 ± 0 . 9 3 1 9 . 6 ± 0 . 5 2 1 6 . 5 ± 0 . 0 4 2 3 . 5 ± 0 . 1 6 1 6 . 5 ± 0 . 3 2 1 3 . 6 ± 0 . 4 6 2 0 . 7 ± 0 . 4 6 4 1 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 T a b l e 1 : L i v e r e n z y m e s c o n c . ( U / L ) * V a l u e s a r e m e a n ± S D o f t r i p l i c a t e d e t e r m i n a t i o n s M = M a l e , F = F e m a l e

h o w e v e r , t h e y c a n l e a k i n t o t h e s e r u m o r o t h e r p a r t s a s a r e s u l t o f i n j u r y t o t h e c e l l w h e r e t h e y a r e l o c a t e d ( A d e s o k a n a n d A k a n j i , 2 0 0 3 ) . T h e m e a s u r e m e n t o f t h e v a r i o u s e n z y m e a c t i v i t i e s i n t h e t i s s u e s a n d b o d y f l u i d s p l a y a s i g n i f i c a n t r o l e i n d i s e a s e i n v e s t i g a t i o n , d i a g n o s i s a n d d e t e c t i o n o f t i s s u e c e l l u l a r d a m a g e ( M a l o m o , 2 0 0 0 ) . T h e A L T c o n c e n t r a t i o n w a s e l e v a t e d i n a l l t h e t e s t a n i m a l s ( T a b l e 1 ) . T h e i n c r e a s e i n A L T c o n c e n t r a t i o n w e r e n o n - s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 5 ) c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l . T h e e f f e c t o f t h e p l a n t e x t r a c t a l s o s e e m s t o b e d o s e d e p e n d e n t , a s t h e i n c r e a s e i n p l a n t e x t r a c t c o n c e n t r a t i o n r e s u l t e d i n s l i g h t i n c r e a s e i n e n z y m e c o n c e n t r a t i o n . T h e r e w e r e s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 5 ) d i f f e r e n c e s i n A L T v a r i a t i o n f o r t h e m a l e a n d f e m a l e a n i m a l s , a s d o s e o f t h e p l a n t e x t r a c t i n c r e a s e d . A n e l e v a t e d A L T l e v e l o c c u r s i n c i r r h o s i s , e x t r a h e p a t i c b i l i a r y o b s t r u c t i o n a n d h e p a t i c m e t a s e s ( E f f r a i m e t a l . , 2 0 0 3 ) . I n c o n s i s t e n t e l e v a t i o n s a l s o o c c u r i n a c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n s a n d s k e l e t a l m u s c u l e d i s e a s e . N o r m a l a c t i v i t y o f A L T i s 1 - 2 0 u / l , b u t i n t h i s s t u d y v a l u e s r a n g e d f r o m 1 9 . 5 ± 0 . 3 5 u / l t o 1 9 . 6 ± 0 . 5 2 f o r m a l e s a n d 1 6 . 4 ± 0 . 1 1 u / l t o 1 6 . 5 ± 0 . 0 3 u / l f o r f e m a l e s A S T c o n c e n t r a t i o n w a s a l s o n o n - s i g n i f i c a n t l y ( p 0 . 0 5 ) e l e v a t e d f r o m 1 6 . 3 ± 0 . 0 5 u / l a n d 1 3 . 3 ± 0 . 0 1 u / l f o r t h e m a l e a n d f e m a l e c o n t r o l a n i m a l s r e s p e c t i v e l y , b e t w e e n 1 6 . 4 ± 0 . 2 5 u / l a n d 1 6 . 5 ± 0 . 0 4 u / l f o r t h e m a l e s a n d b e t w e e n 1 3 . 5 ± 0 . 1 3 a n d 1 3 . 6 ± 0 . 4 f o r f e m a l e s ( T a b l e 1 ) . T h e s l i g h t i n c r e a s e i n A S T c o n c e n t r a t i o n s s e e m s t o b e d o s e d e p e n d e n t , a s e l e v a t i o n s o c c u r r e d a s t h e p l a n t e x t r a c t d o s e i n c r e a s e d . N o r m a l a c t i v i t y o f A S T i s 1 - 1 5 u / l , b u t i n t h i s s t u d y A S T e l e v a t i o n w a s o b s e r v e d t o b e f r o m 1 6 . 3 ± 0 . 0 5 u / l a n d 1 3 . 3 ± 0 . 0 1 u / l f o r m a l e a n d f e m a l e a n i m a l s r e s p e c t i v e l y b e t w e e n 1 6 . 4 . 0 ± 0 . 2 5 a n d 1 6 . 5 ± 0 . 0 4 f o r m a l e s a n d b e t w e e n 1 3 . 5 ± 0 . 1 3 a n d 1 3 . 6 ± 0 . 0 4 f o r f e m a l e s a d m i n i s t e r e d t h e v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n o f t h e p l a n t e x t r a c t . A L P s h o w e d n o n - s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 5 ) i n c r e a s e c o m p a r e d t o c o n t r o l . E l e v a t i o n o f A L P i s f o u n d i n l a r g e n u m b e r o f d i s o r d e r s s u c h a s b i l i a r y c i r r h o s i s . A l t h o u g h i t i s f o u n d b o t h i n t h e l i v e r a n d t h e b i l e , i t l e a k s i n t o t h e b l o o d s t r e a m i n a m a n n e r s i m i l a r t o t h a t o f A L T a n d A S T . A L P i s f o u n d i n o t h e r o r g a n s s u c h a s b o n e , p l a c e n t a a n d i n t e s t i n e ( R a n j n a , 1 9 9 6 ) . T h e p l a n t l e a f e x t r a c t d i d n o t c h a n g e s i g n i f i c a n t l y a n y o f t h e l i v e r e n z y m e s i n c l u d i n g A L T , A S T a n d A L P . T h i s r e s u l t s h o w e d t h a t t h e l e a f e x t r a c t o f L . o w e r r i e n c e d o e s n o t h a v e a n y a p p a r e n t t o x i c i t y o n t h e l i v e r o f r a t s . G r e e n l e a f y p l a n t s a r e u s u a l l y a s s o c i a t e d w i t h h e p a t o p r o t e c t i v e p r o p e r t i e s ( W e b e r e t a l . , 2 0 0 3 ; O b o h , 2 0 0 5 ; R o y e t a l . , 2 0 0 6 , I w e a l a a n d O b i d o a , 2 0 1 0 ) . U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 A n i m a l ( n = 5 ) G r o u p 1 G r o u p 2 G r o u p 3 G r o u p 4 C o n c . o f e x t r a c t C o n t r o l 2 0 m g / k g 3 0 m g / k g 4 0 m g / k g S e x M F M F M F M F Σ 1 0 . 2 5 ± 0 . 2 9 . 6 ± 0 . 7 1 4 . 5 ± 0 . 4 1 3 . 5 ± 0 . 1 1 5 . 0 ± 0 . 0 5 1 4 . 7 ± 0 . 5 1 6 . 4 ± 0 . 3 1 5 . 7 ± 0 . 6 T a b l e 2 : T o t a l P r o t e i n c o n c . ( m g / d l ) * V a l u e s a r e m e a n ± S D o f t r i p l i c a t e d e t e r m i n a t i o n s M = M a l e , F = F e m a l e J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 4 1 4 A n i m a l ( n = 5 ) G r o u p 1 G r o u p 2 G r o u p 3 G r o u p 4 C o n c . o f e x t r a c t C o n t r o l 2 0 m g / k g 3 0 m g / k g 4 0 m g / k g S e x M F M F M F M F Σ 9 . 8 ± 0 . 5 0 9 . 5 ± 0 . 4 1 1 1 . 7 ± 0 . 5 4 1 1 . 0 ± 0 . 3 1 1 2 . 1 ± 1 . 0 5 1 2 . 4 ± 1 . 1 2 1 2 . 8 ± 0 . 7 3 1 2 . 5 ± 0 . 6 5 T a b l e 3 : H e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n ( g / d l ) * V a l u e s a r e m e a n ± S D o f t r i p l i c a t e d e t e r m i n a t i o n s M = M a l e , F = F e m a l e

T o t a l p r o t e i n l e v e l s w e r e a l s o s i g n i f i c a n t l y e l e v a t e d ( p 0 . 0 5 ) ( T a b l e 2 ) f r o m 1 0 . 2 5 ± 0 . 2 m g / l a n d 9 . 6 ± 0 . 7 m g / l f o r t h e m a l e a n d f e m a l e a n i m a l s r e s p e c t i v e l y b e t w e e n 1 4 . 5 ± 0 . 4 m g / l a n d 1 6 . 4 ± 0 . 3 m g / l f o r t h e m a l e s a n d b e t w e e n 1 3 . 5 ± 0 . 1 m g / l a n d 1 6 . 7 ± 0 . 6 m g / l f o r t h e f e m a l e s . T h e e f f e c t o f t h e p l a n t e x t r a c t i s a l s o d o s e d e p e n d e n t , a n d t h e i n c r e a s e i n p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n w i t h i n c r e a s e i n d o s e i s s i g n i f i c a n t ( p 0 . 0 5 ) . E s s e n t i a l l y , a l l t h e a l b u m i n a n d f i b r i n o g e n o f t h e p l a s m a p r o t e i n a n d a b o u t 5 0 t o 8 0 % o f t h e g l o b u l i n s a r e f o r m e d i n t h e l i v e r . T h e l e a v e s o f L . o w e r r i e n c e p l a n t a r e r i c h i n p r o t e i n , e s s e n t i a l a m i n o a c i d s a n d m i n e r a l e l e m e n t s ( E b i a n d O f o e f u l e , 1 9 9 7 ) . T h e s e r u m p r o t e i n o f t h e e x p e r i m e n t a l r a t s w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d w h i c h i s a r e f l e c t i o n o f t h e d i g e s t i b i l i t y a n d h e n c e a v a i l a b i l i t y o f p r o t e i n c o n s t i t u e n t s o f l e a v e s o f L . o w e r r i e n c e ( R o s s a n d K a s u m , 2 0 0 2 ) . T h e e l e v a t i o n o f s e r u m p r o t e i n c o u l d e n h a n c e t h e o v e r a l l p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n o f t h e a n i m a l s ( I w e a l a a n d O b i d o a , 2 0 1 0 ) . H e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d ( p 0 . 0 5 ) i n t h e a n i m a l s ( T a b l e 3 ) . T h e p l a n t e x t r a c t m o s t p r o b a b l y h a d n o a d v e r s e e f f e c t o n t h e r e d b l o o d c e l l s . T h e p h y t o c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s o f L . o w e r r i e n c e w h i c h i n c l u d e f l a v o n o i d s a n d p h y t o s t e r o l ( I w u , 1 9 9 3 ) a r e p o s s i b l e c a n d i d a t e s t h a t i n c r e a s e w h i t e b l o o d c e l l s . T h e m i n e r a l a n d v i t a m i n c o n t e n t s o f L . o w e r r i e n c e ( E b i a n d O f o e f u l e , 1 9 9 7 ) i n c l u d e h a e m a t i n i c f a c t o r s s u c h a s i r o n w h i c h p l a y a m a j o r r o l e i n t h e s y n t h e s i s o f h a e m o g l o b i n ( A l a d a , 2 0 0 0 ; T i n d a l , 1 9 6 5 ) . T h i s c o u l d e x p l a i n t h e i n c r e a s e i n h a e m o g l o b i n s e e n i n t h e e x p e r i m e n t a l r a t s . L i p i d p e r o x i d a t i o n l e v e l s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d ( p 0 . 0 1 ) i n t h e t e s t a n i m a l s c o m p a r e d t o c o n t r o l . ( T a b l e 4 ) . T h e b i o l o g i c a l c o n s e q u e n c e s o f l i p i d p e r o x i d a t i o n i n c l u d e s t r u c t u r a l d a m a g e t o m e m b r a n e s a n d e s s e n t i a l b i o m o l e c u l e s . I t i s a n u n d e r l y i n g c a u s e o f d e g e n e r a t i v e d i s e a s e s ( K o b a e t a l . , 2 0 0 2 ) . I n t h i s s t u d y t h e p l a n t e x t r a c t h a d s i g n i f i c a n t e f f e c t o n l i p i d p e r o x i d a t i o n a n d m a y n o t a l t e r e s s e n t i a l f u n c t i o n s o f c e l l s t h a t m a y l e a d t o d e a t h ( H s i e h e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e r e d u c t i o n i n l i p i d p e r o x i d a t i o n c o u l d b e a t t r i b u t e d t o t h e p r e s e n c e o f a n t i o x i d a n t p h y t o c h e m i c a l s i n c l u d i n g f l a v o n o i d s a n d a n t h o c y a n i d i n s i n t h e L . o w e r r i e n c e w h o s e p h e n o l i c s t r u c t u r e f a v o u r t h e i r r e a c t i o n w i t h f r e e r a d i c a l s a n d r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s ( R O S ) ( M i l l e r a n d R u i z - L a r r e a , 2 0 0 2 ) . T h i s r e a c t i o n w i t h R O S p r o t e c t s l i p i d s f r o m p e r o x i d a t i o n a n d b y e x t e n s i o n p r e v e n t s d a m a g e t o c e l l s . T h e r e d u c t i o n o f l i p i d p e r o x i d a t i o n b y f l a v o n o i d p r e v e n t s D N A d a m a g e , a c r i t i c a l e v e n t i n m o s t d i s e a s e . ( C a i e t a l . , 1 9 9 7 ; S u b a s h r e e e t a l . , 2 0 0 9 ; M o h d - E s a e t a l . , 2 0 1 0 ; M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1 ) . E t h n o - m e d i c i n e p r a c t i t i o n e r s c l a i m s t h a t i t i s e f f e c t i v e t o u s e t h e p l a n t e x t r a c t s e i t h e r c r u d e a q u e o u s e x t r a c t o r t h e a l c o h o l i c e x t r a c t f o r t h e t r e a t m e n t a n d m a n a g e m e n t o f v a r i o u s d i s e a s e s . T h e y c l a i m i t a s e f f e c t i v e i n t r e a t i n g a n d m a n a g i n g v e n e r e a l d i s e a s e , c o l i c d i s e a s e , a n d c o n t r o l o f d i a b e t e s a n d a s e n e m a f o r i n t e s t i n a l w o r m s . T h e s t r o n g a c t i v i t y o f t h e e t h a n o l i c e x t r a c t s a g a i n s t k n o w n e t i o l o g i c a g e n t s o f d i s e a s e s t r a d i t i o n a l l y t r e a t e d w i t h L . o w e r r i e n c e r o o t o f s i m i l a r p r e p a r a t i o n s p r o v i d e s s c i e n t i f i c j u s t i f i c a t i o n f o r t h e u s e o f t h e h e r b i n e t h n o m e d i c a l p r a c t i c e i n N i g e r i a . U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 4 1 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 A n i m a l ( n = 5 ) G r o u p 1 G r o u p 2 G r o u p 3 G r o u p 4 C o n c . o f e x t r a c t C o n t r o l 2 0 m g / k g 3 0 m g / k g 4 0 m g / k g S e x M F M F M F M F Σ 5 . 0 2 ± 0 . 2 5 4 . 5 0 ± 0 . 2 1 4 . 5 2 ± 1 . 0 1 4 . 1 7 ± 0 . 1 4 3 . 8 3 ± 0 . 2 1 3 . 6 2 ± 0 . 1 5 3 . 3 8 ± 0 . 3 5 3 . 2 4 ± 0 . 0 2 * V a l u e s a r e m e a n ± S D o f t r i p l i c a t e d e t e r m i n a t i o n s M = M a l e , F = F e m a l e T a b l e 4 : L i p i d p e r o x i d a t i o n l e v e l [ T B A R S ] ( m g / m l )

A C K N O W L E D G E M E N T I w i s h t o t h a n k M r . U c h e A r u k w e a n d M r . C l e m e n t A s u m u g h a o f t h e B i o c h e m i s t r y L a b o r a t o r i e s , D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y , A b i a S t a t e U n i v e r s i t y , U t u r u , N i g e r i a , w h o h e l p e d i n s o m e o f t h e a n a l y s i s . R E F E R E N C E S A d e s o k a n A A a n d A k a n j i M A . 2 0 0 3 . E f f e c t o f a d m i n i s t r a t i o n o f a q u e o u s e x t r a c t o f E n a n t i a c h l o r a n t h a o n t h e a c t i v i t i e s o f s o m e e n z y m e s i n t h e s m a l l i n t e s t i n e o f r a t s . N i g e r i a J . B i o c h e m . M o l e c . B i o l . , 1 8 ( 2 ) : 1 0 3 - 1 0 5 . A l a d a A R A . 2 0 0 0 . T h e h a e m a t o l o g i c a l e f f e c t o f T e l f a i r i a o c c i d e n t a l i s d i e t p r e p a r a t i o n . A f r . J . B i o m e d . R e s : 1 8 5 - 1 8 6 . B u r k i l l H M . 1 9 9 4 . T h e u s e f u l p l a n t s o f t r o p i c a l W e s t A f r i c a . ( 2 n d e d i t i o n ) . R o y a l B o t a n i c G a r d e n s , K e w , I S B N : 0 9 4 7 6 4 3 5 6 7 C a i Q , R a h a n R O a n d Z a n g R . 1 9 9 7 . D i e t a r y f l a v o n o i d s , q u e r c e t i n , l u t e o l i n a n d g e n i s t e i n , r e d u c e D N A d a m a g e a n d l i p i d p e r o x i d a t i o n a n d q u e n c h f r e e r a d i c a l s . C a n c e r L e t t . 1 1 9 : 9 9 - 1 0 8 C h a n g J S , C h i a n g L C , H s u F F a n d L i n C C . 2 0 0 4 . C h e m o p r e v e n t i o n a g a i n s t h e p a t o c e l l u l a r C a r c i n o m a o f C o m u s o f f i c i n a l i s - i n v i t r o . A m . J . C h i n . M e d . , 3 2 ( 5 ) : 7 1 7 - 7 2 5 D a c i e J V a n d L e w i s S M . 1 9 9 0 . P r a c t i c a l H e m a t o l o g y . C h u r c h i l l L i v i n g s t o n e N e w Y o r k 3 4 . E b i G C a n d O f o e f u l e S I . 1 9 9 7 . I n v e s t i g a t i o n i n t o t h e f o l k l o r i c a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t i e s o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e . P h y t . R e s . , 1 1 : 1 4 9 - 1 5 1 . E f f r a i m K D , J a c k s T W a n d S o d i p o O A . 2 0 0 3 . H i s t o p a t h o l o g i c a l s t u d i e s o n t h e t o x i c i t y o f O c i m u m g r a t i s s i m u m o n s o m e o r g a n s o f R a b b i t s : A f r i c a n J . B i o m e d . , R e s . 6 : 2 1 - 2 5 . H s i e h Y S , K u o W H , L i n T W , C h a n g H R , L i n T H , C h e n P N a n d C h u S C . 2 0 0 9 . P r o t e c t i v e e f f e c t s o f B e r b e r i n e a g a i n s t L o w - D e n s i t y L i p o p r o t e i n ( L D L ) o x i d a t i o n a n d o x i d i z e d L D L - I n d u c e d c y t o t o x i c i t y o n e n d o t h e l i a l c e l l s . J A g r i c F o o d C h e m . , 5 5 : 1 0 4 3 7 - 1 0 4 4 H w a n g J M , W a n g C J , C h o u F P , T s e n g T H , H s i e h Y S , L i n W L a n d C h u C Y . 2 0 0 2 . I n h i b i t o r y e f f e c t o f b e r b e r i n e o n t e r t - b u t y l h y d r o p e r o x i d e - i n d u c e d o x i d a t i v e d a m a g e i n r a t l i v e r . A r c h T o x i c o l . , 7 6 : 6 6 4 - 6 7 0 . I w e a l a E E J a n d O b i d o a O . 2 0 1 0 . S t u d i e s o n S o m e B i o c h e m i c a l a n d H i s t o l o g i c a l C h a n g e s A s s o c i a t e d w i t h L o n g T e r m C o n s u m p t i o n o f L e a v e s o f O c i m u m g r a t i s s i m u m L . i n M a l e R a t s . A m . J . F o o d T e c h n o l . , 5 : 3 7 6 - 3 8 4 I w u M M . 1 9 9 3 . H a n d b o o k o f A f r i c a n M e d i c i n a l P l a n t s . C R C P r e s s , B o c a R a t o n , A n n . A r b o r a n d L o n d o n , T o k y o . J e n s e n J E a n d F r e e s e D . 2 0 0 9 . L i v e r F u n c t i o n T e s t s . C o l o r a d o C e n t e r f o r D i g e s t i v e d i s o r d e r s 2 0 5 s . S u i t e A L o n g m o n t C o . 8 0 5 0 1 . 1 5 1 - 1 6 3 . K o b a K , A k a h o s h i A , Y a m a s a k i M , T a n a k a K , Y a m a d a K , I w a t a T , K a m e g a i T , T s u t s u m i K a n d S u g a n o M . 2 0 0 2 . D i e t a r y c o n j u g a t e d l i n o l e n i c a c i d i n r e l a t i o n t o C L A d i f f e r e n t l y m o d i f i e s b o d y f a t m a s s a n d s e r u m a n d l i v e r l i p i d l e v e l s i n r a t s . L i p i d s , 3 7 : 3 4 3 - 3 5 0 . L e h n i n g e r A L , N e l s o n O L a n d C o x M M . 2 0 0 5 . T e x t B o o k o f B i o c h e m i s t r y . ( 6 t h e d i t i o n ) W o r t h P u b l i s h e r s . N Y U S A 4 5 0 . L o w r y O H , R o s e b r o u g h N J , F a r r A L a n d R a n d a l l R J . 1 9 5 1 . P r o t e i n m e a s u r e m e n t w i t h t h e f o l i n p h e n o l r e a g e n t . J . B i o l . C h e m . , 1 9 3 : 2 6 5 - 2 7 5 M a l o m o S O . 2 0 0 0 . T o x i c o l o g i c a l i m p l i c a t i o n o f C e f t r i a x o m e a d m i n i s t r a t i o n i n r a t s . N i g . J . B i o c h e m . M o l . B i o l . , 1 5 ( 1 ) : 3 3 - 3 5 U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 4 1 6

M i l l e r N J a n d R u i z - L a r r e a M B . 2 0 0 2 . F l a v o n o i d a n d o t h e r p l a n t p h e n o l s i n d i e t : T h e i r s i g n i f i c a n c e a s a n t i o x i d a n t s . J . N u t r . E n v i r o n . M e d . , 1 2 : 3 9 - 5 1 . M o h a n a S u n d a r a m , S i v a k u m a r K a r t h i k e y a n , M a g e s h G o p i n a t h , S h e e l a d e v i T h i r u m a l a i , a n d P e n n a r a s i P r a s a n n a . 2 0 1 1 . S t u d i e s o n p h y t o c h e m i c a l s , a n t i b a c t e r i a l a n d A n t i o x i d a n t e f f e c t s o f l e a f e x t r a c t s o f l a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m . . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y 4 : 2 7 9 - 2 8 4 . M o h d - E s a N , H e r n F S , I s m a i l A a n d Y e e C L . 2 0 1 0 . A n t i o x i d a n t a c t i v i t y i n d i f f e r e n t p a r t s o f r o s e l l e ( H i b i s c u s s a b d a r i f f a ) e x t r a c t s a n d p o t e n t i a l e x p l o i t a t i o n o f t h e i r s e e d s . F o o d C h e m . , 1 2 2 : 1 0 5 5 - 1 0 6 0 . N e u m a n H V a n d V r e e d e n a l M . 1 9 6 7 . A n i m p r o v e d a l k a l i n e p h o s p h a t a s e d e t e r m i n a t i o n w i t h p - n i t r o p h e n o l p h o s p h a t e . C l i n i c a C h i m i c a A c t a . 1 7 ( 2 ) : 1 8 3 - 1 8 7 . O b o h G . 2 0 0 5 . H e p a t o p r o t e c t i v e p r o p e r t y o f e t h a n o l i c a n d a q u e o u s e x t r a c t s o f T e l f a i r i a o c c i d e n t a l i s ( F l u t e d p u m p k i n ) l e a v e s a g a i n s t g a r l i c - i n d u c e d o x i d a t i v e s t r e s s . J . M e d . F o o d 8 : 5 6 0 - 5 6 3 O k e k e M I , I r o e g b u C U , E z e E N , O k o l i A S a n d E s i m o n e C O . 2 0 0 1 . E v a l u a t i o n o f e x t r a c t s o f t h e r o o t o f L a n d o l p h i a o w e r r i e n c e f o r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y . J . E t h n o p h a r m a c o l . , 7 8 ( 2 - 3 ) : 1 1 9 - 2 7 P e r s o n J G M , D i l s t F J H , K u i j p e r s R P , L e e n w e r b e r g A J M , V o n k G J A a n d V a n - D i l s t F J H . 1 9 6 2 . T h e A f r i c a n s p e c i e s o f L a n d o l p h i a . P . B e a u x S e r i e s o f R e v i s i o n s o f A p o c y n a c e a e . X x x i v W a g e n i n g e n A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y P a p e r N o . 9 2 . 3 2 3 . R a n j n a O . 1 9 9 6 . P r a c t i c a l C l i n i c a l B i o c h e m i s t r y , M e t h o d s a n d I n t e r p r e t a t i o n s ( 2 n d e d i t i o n ) J a y p e e B r o t h e r s M e d i c a l P u b l i s h e r s . I n d i a 1 0 0 - 1 0 9 R e i t m a n S a n d F r a n k e l S L . 1 9 5 7 . D e t e r m i n a t i o n o f A L T a n d A S T c o n c e n t r a t i o n s i n s e r u m . A m . J . C h e m P a t h . , 2 8 : 5 6 R o s s J A a n d K a s u m C M . 2 0 0 2 . D i e t a r y f l a v o n o i d s : B i o a v a i l a b i l i t y , m e t a b o l i c e f f e c t s a n d s a f e t y . A n n . R e v . N u t r . , 2 2 : 1 9 - 3 4 R o y C K , K a m a t h J V a n d A s a d M . 2 0 0 6 . H e p a t o p r o t e c t i v e a c t i v i t y o f P s i d i u m g u a j a v a L i n n l e a f e x t r a c t . I n d . J . E x p . B i o l . , 4 4 : 3 0 5 - 3 1 1 S u b a s h r e e B , B a s k a r R , L a x m i K R , L i j i n a S R a n d R a j a s e k a r a n P . 2 0 0 9 . E v a l u a t i o n o f a n t i o x i d a n t p o t e n t i a l i n s e l e c t e d g r e e n l e a f y v e g e t a b l e s . F o o d C h e m . , 1 1 5 : 1 2 1 3 - 1 2 2 0 . T i n d a l H D . 1 9 6 5 . F r u i t s a n d v e g e t a b l e s o f W e s t A f r i c a . ( 1 s t E d i t i o n ) . F o o d a n d A g r i c u l t u r e O r g a n i z a t i o n , U S A W a l l i n B , R o s e n g r e n B , S h e r t z e r H G a n d C a m e j o G . 1 9 9 3 . L i p o p r o t e i n o x i d a t i o n a n d m e a s u r e m e n t o f t h i o b a r b i t u r i c a c i d r e a c t i n g s u b s t a n c e s f o r m a t i o n i n a s i n g l e m i c r o t i t e r p l a t e : i t s u s e f o r e v a l u a t i o n o f a n t i o x i d a n t s A n a l . B i o c h e m . , 2 0 8 : 1 0 - 1 5 . W e b e r L W , B o l l M a n d S t a m p f l A . 2 0 0 3 . H e p a t o t o x i c i t y a n d m e c h a n i s m o f a c t i o n o f h a l o a l k a n e s : c a r b o n t e t r a c h l o r i d e a s a t o x i c o l o g i c a l m o d e l . C r i t . R e v . T o x i c o l . , 2 3 : 1 0 5 - 1 3 6 . U h e g b u e t a l . , 2 0 1 2 4 1 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 5 ) : 4 1 0 - 4 1 7 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g Y o u r e t a i n y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / S u b m i t . p h p .