J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y C e l l s u r f a c e p r o p e r t i e s o f P h e n o l - U t i l i z i n g B a c t e r i a I s o l a t e d f r o m p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r K e y w o r d s : P h e n o l - u t i l i z i n g b a c t e r i a , H y d r o p h o b i c i t y , S A T , C o n g o r e d b i n d i n g . A B S T R A C T : C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f s i x p h e n o l - u t i l i z i n g b a c t e r i a i s o l a t e d f r o m P o r t H a r c o u r t P e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r w a s a s s e s s e d v i a b a c t e r i a l a d h e s i o n t o h y d r o c a r b o n ( B A T H ) , s a l t a g g r e g a t i o n t e s t ( S A T ) a n d C o n g o r e d b i n d i n g ( C R B ) a s s a y s . T h e t e s t o r g a n i s m s e x h i b i t e d h i g h t o m o d e r a t e h y d r o p h o b i c i t y w i t h B A T H a s s a y r e s p e c t i v e l y w h e n n - o c t a n e a n d p - x y l e n e w e r e e m p l o y e d . B a c i l l u s s p . R B D , E s c h e r i c h i a c o l i . O P W W , C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P , C i t r o b a c t e r s p . R W a n d P s e u d o m o n a s s p . S D s h o w e d m o d e r a t e h y d r o p h o b i c i t y i n S A T a s s a y . O n t h e o t h e r h a n d , P s e u d o m o n a s s p . R W W s h o w e d h i g h h y d r o p h o b i c i t y i n S A T a s s a y . S i m i l a r r e s u l t s o f m o d e r a t e h y d r o p h o b i c i t y w e r e o b t a i n e d w i t h C R B e x c e p t C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P t h a t e x h i b i t e d h i g h h y d r o p h o b i c i t y v a l u e o f 1 4 . 7 0 ± 1 . 0 0 µ g . T h e r e s u l t s o b t a i n e d i n t h i s s t u d y s h o w e d t h a t t h e i s o l a t e s a r e m a i n l y m o d e r a t e l y h y d r o p h o b i c w h i c h m a k e t h e m g o o d c a n d i d a t e s i n t h e c l e a n u p a c t i v i t y o f o r g a n i c p o l l u t a n t s i n p o l l u t e d s i t e s . 3 8 3 - 3 9 1 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 4 T h i s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A u t h o r s : N w a n y a n w u C E 1 , A l i s i C S 2 , N w e k e C O 1 a n d O r j i J C 1 . I n s t i t u t i o n : 1 . D e p a r t m e n t o f M i c r o b i o l o g y , F e d e r a l U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y , P . M . B . 1 5 2 6 , O w e r r i , N i g e r i a . 2 . D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y , F e d e r a l u n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y , P . M . B . 1 5 2 6 , O w e r r i , N i g e r i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : N w a n y a n w u C E . E m a i l : c n w a n y a n w u 2 0 0 0 @ y a h o o . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / d o c u m e n t s / R A 0 2 3 3 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 3 A p r 2 0 1 2 A c c e p t e d : 2 8 M a y 2 0 1 2 P u b l i s h e d : 0 8 J u n 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : N w a n y a n w u C E , A l i s i C S , N w e k e C O a n d O r j i J C . C e l l S u r f a c e P r o p e r t i e s O f P h e n o l - U t i l i z i n g B a c t e r i a I s o l a t e d F r o m P e t r o l e u m R e f i n e r y W a s t e w a t e r . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y O r i g i n a l R e s e a r c h A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l

I N T R O D U C T I O N L a r g e a m o u n t s o f w a t e r a r e u s e d i n t h e p e t r o l e u m r e f i n e r y a c t i v i t y a n d , c o n s e q u e n t l y , s i g n i f i c a n t v o l u m e s o f w a s t e w a t e r a r e g e n e r a t e d r e a c h i n g a b o u t 0 . 4 - 1 . 6 t i m e s t h e v o l u m e o f p r o c e s s e d o i l ( C o e l h o e t a l . , 2 0 0 6 ) . T h e w a s t e w a t e r g e n e r a t e d b y t h e r e f i n e r y i s c h a r a c t e r i z e d b y t h e p r e s e n c e o f o r g a n i c a n d i n o r g a n i c p o l l u t a n t s t h a t g a v e i t i t s t o x i c n a t u r e . T h e t o x i c e f f e c t s o f r e f i n e r y e f f l u e n t s t o b a c t e r i a h a v e b e e n r e p o r t e d ( N w a n y a n w u a n d A b u , 2 0 1 0 ; K r i s h n a k u m a r e t a l . , 2 0 0 7 ) . B a c t e r i a a r e u n a b l e t o i n s u l a t e t h e m s e l v e s f r o m t h e t o x i c n a t u r e o f t h e i r h a b i t a t b e c a u s e o f t h e i r l a r g e s u r f a c e a r e a t h a t i s e x p o s e d t o t h e s e h a r s h e n v i r o n m e n t s . T h e s e p o l l u t a n t s i n t h e e f f l u e n t e x e r t t h e i r t o x i c e f f e c t s o n t h e b a c t e r i a l s u r f a c e s t h e r e b y i n h i b i t i n g t h e i r a t t a c h m e n t t o s u b s t r a t e s a n d o t h e r s u r f a c e s . T h e m o s t i m p o r t a n t m e c h a n i s m o f t o x i c a c t i o n o f t h e s e p o l l u t a n t s i s t h e d e s t a b i l i z a t i o n o f c e l l m e m b r a n e ( W a l s h e t a l . , 2 0 0 3 ) . T h i s e f f e c t r e s u l t s i n a d a p t a t i o n a n d c h a n g e s i n e f f l u e n t a u t o c h t h o n o u s m i c r o b i a l p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s a n d m o r e s o c a n h a v e s e r i o u s i m p a c t o n t h e c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y a n d b i o d e g r a d a t i o n p r o c e s s e s ( N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 ; K a c z o r e k e t a l . , 2 0 0 8 ; L e u n g e t a l . , 1 9 9 7 ) . T h e h y d r o p h o b i c i t y o f t h e o u t e r m o s t b a c t e r i a l s u r f a c e h a s b e e n c i t e d a s a f a c t o r i n p a r t i t i o n i n g o f m i c r o o r g a n i s m s a t t h e a i r w a t e r i n t e r f a c e a n d i n t h e a d h e r e n c e o f b a c t e r i a t o w i d e v a r i e t y o f s u r f a c e s a s w e l l a s g r o w t h o f c e l l s o n i n s o l u b l e h y d r o p h o b i c s u b s t r a t e s s u c h a s h y d r o c a r b o n s ( R o s e n b e r g , 1 9 8 1 ) . C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y h a s b e e n f o u n d t o b e i n v o l v e d i n i n t e r f a c i a l i n t e r a c t i o n s o f m i c r o b i a l c e l l s w i t h o t h e r m i c r o b i a l c e l l s ( f l o c c u l a t i o n ) a n d w i t h a i r ( f l o t a t i o n ) ( R o s e n b e r g a n d K j e l l e b e r g , 1 9 8 6 ) . T h e h y d r o p h o b i c n a t u r e o f b a c t e r i a l s u r f a c e s h a s l o n g b e e n b l a m e d f o r t h e f o r m a t i o n o f s t a b l e f o a m s i n w a s t e w a t e r t r e a t m e n t p l a n t s . H y d r o p h o b i c i t y a p p e a r s t o b e i m p a r t e d b y d i f f e r e n t c h e m i c a l c o m p o n e n t s o f t h e c e l l w a l l i n d i f f e r e n t b a c t e r i a ; t h e s e c o m p o n e n t s i n c l u d e l i p o t e i c h o i c a c i d s a n d p r o t e i n s . T h e u t i l i z a t i o n o f h y d r o c a r b o n a n d o t h e r a r o m a t i c p o l l u t a n t s f o u n d i n w a s t e w a t e r t r e a t m e n t p l a n t s a r e a i d e d b y c o n t a c t b e t w e e n h y d r o p h o b i c o r g a n i c c o m p o u n d s a n d t h e c e l l s . T h e a b i l i t y t o a d h e r e o n t o h y d r o c a r b o n i s c o r r e l a t e d w i t h c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y . M a n y t y p e s o f m i c r o o r g a n i s m s a r e f o u n d i n w a s t e w a t e r t r e a t m e n t p l a n t s . H y d r o p h o b i c m i c r o o r g a n i s m s , i n p a r t i c u l a r , a r e c a p a b l e o f a d h e r i n g t o t h e o i l - w a t e r i n t e r f a c e t h e r e b y u t i l i z i n g o i l c o m p o n e n t s a s w e l l a s o t h e r o r g a n i c c o m p o u n d s i n w a s t e w a t e r t r e a t m e n t p l a n t s a s a s o u r c e o f e n e r g y f o r g r o w t h a n d m e t a b o l i s m . T h i s p r o c e s s i s o f g r e a t i n t e r e s t f o r t h e p r e s e r v a t i o n o f t h e n a t u r a l e n v i r o n m e n t b y r e d u c i n g t h e a m o u n t o f o i l - r e l a t e d c o n t a m i n a n t s ( P i j a n o w s k a e t a l . , 2 0 0 7 ) . N o t m u c h w o r k h a s b e e n d o n e t o a s s e s s t h e c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f b a c t e r i a s t r a i n s i s o l a t e d f r o m r e f i n e r y e f f l u e n t t r e a t m e n t p l a n t s . T h i s s t u d y i s t h e r e f o r e a i m e d a t i n v e s t i g a t i n g t h e c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f b a c t e r i a s t r a i n s f o u n d i n P o r t H a r c o u r t p e t r o l e u m r e f i n e r y e f f l u e n t t r e a t m e n t p l a n t s a n d w a t e r b o d y r e c e i v i n g p e t r o l e u m r e f i n e r y e f f l u e n t . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S S a m p l e c o l l e c t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n P h y s i c o c h e m i c a l l y t r e a t e d r a w w a s t e w a t e r ( a d d i t i o n o f a d d i t i v e s , f l o c c u l a t i o n , s e d i m e n t a t i o n a n d f i l t r a t i o n ) ( R W W ) , b i o l o g i c a l l y t r e a t e d w a s t e w a t e r ( R o t a r y b i o d i s k ) ( R B D ) , o b s e r v a t i o n p o n d t r e a t e d w a s t e w a t e r ( o x i d a t i o n p o n d ) ( O P W W ) a n d d i s c h a r g e p i p e w a s t e w a t e r ( D P ) s a m p l e s o f P o r t H a r c o u r t p e t r o l e u m r e f i n e r y w e r e c o l l e c t e d i n s t e r i l e p o l y e t h y l e n e c o n t a i n e r s . A l s o r i v e r w a t e r ( R W ) a n d s e d i m e n t ( S D ) s a m p l e s f r o m O k r i k a R i v e r i n P o r t H a r c o u r t N i g e r i a t h a t r e c e i v e s t h e p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r w e r e c o l l e c t e d . T h e c o n t a i n e r s w e r e r i n s e d t w i c e w i t h t h e s a m p l e s a t t h e p o i n t o f c o l l e c t i o n . T o a v o i d d e t e r i o r a t i o n , t h e s a m p l e s w e r e t a k e n t o t h e l a b o r a t o r y i n i c e b o x w i t h i n 6 h o f c o l l e c t i o n f o r a n a l y s e s . p H , b i o l o g i c a l o x y g e n N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 3 8 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1

d e m a n d ( B O D ) , c h e m i c a l o x y g e n d e m a n d ( C O D ) , p h o s p h a t e ( P O 4 ) a n d s u l p h a t e ( S O 4 ) w e r e d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o A P H A ( 1 9 8 5 ) w h e r e a s l e a d ( P b ) , z i n c ( Z n ) , c o p p e r ( C u ) w e r e d e t e r m i n e d b y a t o m i c a b s o r p t i o n s p e c t r o p h o t o m e t e r ( P e r k i n s E l m e r 3 1 1 0 ) r e s p e c t i v e l y . O i l a n d g r e a s e o f t h e s a m p l e s w e r e d e t e r m i n e d u s i n g p a r t i t i o n - g r a v i m e t r i c m e t h o d ( N o w e c o , 1 9 9 7 ) . P h e n o l c o n t e n t w a s d e t e r m i n e d a s d e s c r i b e d b y F o l s o m e t a l . , ( 1 9 9 0 ) . E l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y w a s m e a s u r e d w i t h e l e c t r i c a l c o n d u c t i v i t y m e t e r ( H A C H c o n d u c t i v i t y m e t e r ) . I s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f b a c t e r i a l s t r a i n s P h e n o l - u t i l i z i n g b a c t e r i a w e r e i s o l a t e d f r o m t h e s a m p l e s b y s p r e a d i n g 0 . 1 m l o f d e c i m a l l y d i l u t e d ( 1 0 - 4 ) w a s t e w a t e r s a m p l e s o n m i n e r a l s a l t a g a r p l a t e s a m e n d e d w i t h 2 . 5 m M p h e n o l a s d e s c r i b e d b y H i l l a n d R o b i n s o n ( 1 9 7 5 ) . T h e m e d i u m h a s t h e f o l l o w i n g c o m p o s i t i o n ( m g / l ) o f K H 2 P O 4 , 8 4 0 ; K 2 H P O 4 , 7 5 0 ; ( N H 4 ) 2 S O 4 , 4 0 0 ; M g S O 4 . 7 H 2 O , 6 0 ; N a C l , 6 0 ; C a C l 2 , 6 0 ; F e C l 3 , 6 0 a n d 1 5 g a g a r a d d e d t o s o l i d i f y t h e m e d i u m . K e t o c o n a z o l e a t 5 0 µ g / m l w a s a d d e d t o t h e m e d i u m t o e x c l u d e f u n g i a n d p H a d j u s t e d t o 7 . 2 . T h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d f o r 7 2 h a n d t h e d e v e l o p e d c o l o n i e s w e r e p u r i f i e d o n f r e s h l y p r e p a r e d n u t r i e n t a g a r p l a t e s . T h e p u r i f i e d i s o l a t e s w e r e c h a r a c t e r i z e d b i o c h e m i c a l l y f o l l o w i n g s t a n d a r d m i c r o b i o l o g i c a l m e t h o d s . I d e n t i f i c a t i o n t o t h e g e n u s l e v e l f o l l o w e d t h e s c h e m e s o f H o l t e t a l . , ( 1 9 9 4 ) . T h e i s o l a t e s w e r e m a i n t a i n e d o n n u t r i e n t a g a r s l a n t s . P r e p a r a t i o n o f i n o c u l u m a n d c u l t u r e c o n d i t i o n T h e b a c t e r i a l i s o l a t e s f o r t h e a s s a y w e r e g r o w n i n 1 0 0 m l o f B u s h n e l l H a a s ( B H ) b r o t h c o n s i s t i n g o f ( g / l ) : K H 2 P O 4 , 1 . 0 ; K 2 H P O 4 , 1 . 0 ; N H 4 N O 3 , 1 . 0 ; M g S O 4 · 7 H 2 O , 0 . 2 ; F e C l 3 · 6 H 2 O , 0 . 0 8 5 ; C a C l 2 · 2 H 2 O , 0 . 0 2 a n d p h e n o l , 0 . 0 5 c o n t a i n e d i n 2 5 0 m l E r l e n m e y e r f l a s k s . T h e f l a s k s w e r e i n c u b a t e d o n a r o t a r y s h a k e r ( 1 5 0 r p m ) f o r 2 4 h a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 8 ± 2 o C ) . T h e c e l l s w e r e r e c o v e r e d b y c e n t r i f u g a t i o n ( 6 , 0 0 0 r p m f o r 1 0 m i n ) a n d w a s h e d t w i c e i n p h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e ( P B S , 0 . 0 2 M ; p H 7 . 2 f o r B A T H a s s a y a n d C o n g o r e d a s s a y a n d p H 6 . 8 f o r S A T ) . T h e w a s h e d c e l l s w e r e r e s u s p e n d e d i n t h e b u f f e r m e d i u m a n d t h e t u r b i d i t y a d j u s t e d s p e c t r o p h o t o m e t r i c a l l y t o g i v e a n o p t i c a l d e n s i t y o f 1 . 0 a t 5 4 0 n m . C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y a s s a y s C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f t h e p h e n o l - u t i l i z i n g b a c t e r i a w a s a s s e s s e d u s i n g t h e b a c t e r i a l a d h e r e n c e t o h y d r o c a r b o n ( B A T H ) , m o d i f i e d s a l t a g g r e g a t i o n t e s t ( S A T ) a n d C o n g o r e d b i n d i n g . B a c t e r i a l a d h e r e n c e t o h y d r o c a r b o n B A T H w a s p e r f o r m e d a s d e s c r i b e d b y R o s e n b e r g e t a l . , ( 1 9 8 4 ) . T h e c e l l s u s p e n s i o n s w e r e d i s p e n s e d i n 4 m l a l i q u o t s i n t o s t e r i l e 2 0 m l s c r e w c a p p e d c u l t u r e t u b e s . T h e t u b e s r e c e i v e d d i f f e r e n t v o l u m e s v i z 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 3 , 0 . 4 a n d 0 . 5 m l o f e i t h e r n - o c t a n e o r p - x y l e n e ( S i g m a C h e m i c a l C o . , S t . L o u i s , M o . , U S A ) . T h e m i x t u r e s w e r e v o r t e x e d f o r 2 m i n a n d a l l o w e d t o s t a n d f o r 1 5 m i n f o r t h e c o m p l e t i o n o f b i p h a s i c f o r m a t i o n . A f t e r p h a s e s e p a r a t i o n , t h e a q u e o u s p h a s e w a s c a r e f u l l y r e c o v e r e d a n d t h e O D 5 4 0 w a s d e t e r m i n e d ( A 1 ) . V a l u e s w e r e t h e n e x p r e s s e d a s t h e p e r c e n t a g e o f b a c t e r i a a d h e r i n g t o t h e h y d r o c a r b o n s ( A ) c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l s u s p e n s i o n ( A 0 ) a s f o l l o w s : T h e r e f e r e n c e v a l u e f o r t h e B A T H a s s a y i s t h e p e r c e n t a g e o f b a c t e r i a f r o m 4 m l o f s u s p e n s i o n t h a t p a r t i t i o n i n t o 0 . 5 m l o f n - o c t a n e o r p - x y l e n e . S t r a i n s w e r e c o n s i d e r e d s t r o n g l y h y d r o p h o b i c w h e n v a l u e s w e r e > 6 0 % , m o d e r a t e l y h y d r o p h o b i c w h e n v a l u e s w e r e i n t h e r a n g e o f 4 0 - 6 0 % a n d h y d r o p h i l i c w h e n v a l u e s w e r e < 4 0 % ( B a s s o n e t a l . , 2 0 0 8 ) . S a l t a g g r e g a t i o n t e s t T h e S A T a s s a y w a s c a r r i e d o u t a s d e s c r i b e d b y L i n d a h l e t a l . , ( 1 9 8 1 ) w i t h l i t t l e m o d i f i c a t i o n s . T h e a s s a y i s b a s e d o n b a c t e r i a l p r e c i p i t a t i o n i n t h e p r e s e n c e o f s a l t s . I s o l a t e s w e r e s a l t e d o u t ( a g g r e g a t e d ) b y c o m b i n i n g 2 5 µ l v o l u m e s o f t h e c e l l s u s p e n s i o n w i t h e q u a l ( 2 5 µ l ) N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 3 8 5 A ( % ) = ( A 0 - A 1 ) × 1 0 0 A 0

v o l u m e s o f a s e r i e s o f v a r y i n g m o l a r i t i e s ( M ) o f ( N H 4 ) 2 S O 4 s o l u t i o n ( 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6 , 0 . 8 , 1 . 0 , 1 . 2 , 1 . 4 , 1 . 6 , 1 . 8 , 2 . 0 , 2 . 2 , 2 . 4 , 2 . 6 , 2 . 8 , 3 . 0 a n d 4 . 0 M ) i n d i f f e r e n t w e l l s i n a m i c r o p l a t e . A d d i t i o n o f 4 0 0 µ l o f 0 . 1 % w / v m e t h y l e n e b l u e s o l u t i o n t o 1 0 m l v o l u m e s o f ( N H 4 ) 2 S O 4 s o l u t i o n f a c i l i t a t e s b e t t e r v i s u a l i z a t i o n o f a g g r e g a t i o n ( R o z g o n y i e t a l . , 1 9 8 5 ) . T h e p l a t e w a s r o c k e d f o r 4 m i n a f t e r w h i c h i t w a s v i s u a l l y e x a m i n e d a n d s c o r e d a g a i n s t a w h i t e b a c k g r o u n d f o r c e l l a g g r e g a t i o n . C o n c e n t r a t i o n o f ( N H 4 ) 2 S O 4 s o l u t i o n c a u s i n g a g g r e g a t i o n w a s c o n s i d e r e d p o s i t i v e w h e r e a s t h e a b s e n c e o f a g g r e g a t i o n w a s c o n s i d e r e d a s n e g a t i v e . H y d r o p h o b i c i t y w a s e x p r e s s e d a s t h e l o w e s t s a l t c o n c e n t r a t i o n i n t h e m i x t u r e t h a t p r o d u c e d v i s u a l c l u m p i n g . C l a s s i f i c a t i o n w a s e x p r e s s e d a s : < 1 . 0 M = s t r o n g l y h y d r o p h o b i c , 1 . 0 - 2 . 0 M = H y d r o p h o b i c , > 2 . 0 M = H y d r o p h i l i c . C o n g o r e d b i n d i n g a s s a y T h i s a s s a y i s u s e d t o s t u d y t h e p i g m e n t b i n d i n g a b i l i t y o f t h e s t r a i n s a s w e l l a s a m a r k e r o f h y d r o p h o b i c i t y . T h e e x p e r i m e n t w a s p e r f o r m e d a s d e s c r i b e d b y Q a d r i e t a l . , ( 1 9 8 8 ) . A l i q u o t ( 1 . 0 m l ) o f b a c t e r i a l s u s p e n s i o n w e r e t r a n s f e r r e d i n t o s c r e w c a p p e d t e s t t u b e s c o n t a i n i n g 4 m l o f P B S a m e n d e d w i t h 2 5 µ g / m l o f c o n g o r e d d y e a n d w e r e i n c u b a t e d a t r o o m t e m p e r a t u r e f o r 1 5 m i n . T h e r e a f t e r , t h e C o n g o r e d b o u n d t o c e l l s a r e r e m o v e d b y c e n t r i f u g a t i o n a t 6 , 0 0 0 r p m f o r 1 0 m i n . T h e s u p e r n a t a n t ( c e l l f r e e C o n g o r e d s o l u t i o n ) w a s c o l l e c t e d i n s e p a r a t e t u b e s a n d i t s a b s o r b a n c e d e t e r m i n e d s p e c t r o p h o t o m e t r i c a l l y a t 4 8 0 n m a g a i n s t a P B S b l a n k . T h e a m o u n t o f c o n g o r e d d y e t h a t b i n d t o t h e c e l l s w e r e c a l c u l a t e d f r o m a s t a n d a r d c u r v e a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e a m o u n t a d d e d t o t h e m i x t u r e a n d t h e a m o u n t r e m a i n i n g i n t h e c e l l f r e e C o n g o r e d s o l u t i o n . U p t a k e o f C o n g o r e d g r e a t e r t h a n 1 0 µ g w a s s c o r e d a s s t r o n g l y h y d r o p h o b i c ( P a y n e a n d F i n k e l s t e i n , 1 9 7 7 ) . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N T h e p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s o f t h e p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r s a n d O k r i k a r i v e r w a t e r a n d s e d i m e n t a r e s h o w n i n T a b l e 1 . T h e l e v e l o f o i l a n d g r e a s e , B i o l o g i c a l O x y g e n D e m a n d ( B O D ) , C h e m i c a l O x y g e n D e m a n d ( C O D ) a n d p h e n o l c o n t e n t o f t h e p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r s a m p l e s a r e i n d i c a t i o n t h a t t h e s a m p l e s a r e p o l l u t e d w i t h o r g a n i c c o m p o u n d s . T h i s a l s o s h o w e d t h a t a u t o c h t h o n o u s m i c r o o r g a n i s m s i s o l a t e d f r o m t h e s e s a m p l e s a r e s u b j e c t e d t o p o l l u t a n t s t r e s s ( S a r a l a a n d S a b i t h a , 2 0 1 2 ) . T h e o r g a n i s m s i s o l a t e d f r o m t h e r e f i n e r y w a s t e w a t e r s a m p l e s i n c l u d e P s e u d o m o n a s s p . R W W , B a c i l l u s s p . R B D , E s c h e r i c h i a c o l i O P W W a n d C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P w h i l e C i t r o b a c t e r s p . R W a n d P s e u d o m o n a s s p . S D w e r e i s o l a t e d f r o m O k r i k a r i v e r w a t e r a n d s e d i m e n t s a m p l e s N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 3 8 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 P a r a m e t e r / u n i t S a m p l e s o u r c e R W W R B D O P W W D P R W S D p H 7 . 6 4 8 . 1 8 7 . 4 5 8 . 8 7 8 . 9 7 6 . 8 0 T e m p e r a t u r e ( o c ) 2 6 . 4 2 6 . 1 2 6 . 8 2 6 . 7 - - E l e c t r i c a l C o n d u c t i v i t y . ( µ s / c m ) 8 4 5 4 4 3 9 2 6 6 4 3 3 6 4 6 1 5 O i l a n d g r e a s e ( m g / l ) 1 7 . 5 1 5 . 0 2 1 . 0 1 6 . 0 1 6 . 0 1 0 0 B O D ( m g / l ) 3 2 . 0 8 . 0 1 2 . 8 1 2 . 8 - - C O D ( m g / l ) 1 1 2 . 0 7 6 . 0 1 1 4 . 0 8 4 . 0 - - P O 4 ( m g / l ) 0 . 2 2 0 . 1 4 0 . 1 3 0 . 1 2 0 . 1 2 0 . 0 7 S O 4 ( m g / l ) 3 7 . 6 3 1 3 . 5 2 3 5 . 3 1 1 . 8 1 1 7 1 1 5 P h e n o l ( m g / l ) 7 1 . 2 1 3 . 6 1 0 . 1 9 . 4 8 . 6 1 5 . 5 P b ( m g / l ) < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 Z n ( m g / l ) 0 . 1 3 0 . 0 2 0 . 0 6 0 . 0 8 0 . 0 5 3 8 . 6 C u ( m g / l ) < 0 . 0 1 < 0 . 0 1 0 . 0 1 0 . 0 1 < 0 . 0 1 0 . 0 6 1 T a b l e 1 C h a r a c t e r i s t i c s o f t h e p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r a n d o k r i k a r i v e r K e y : R W W = R a w w a s t e w a t e r , R B D = R o t a r y b i o d i s k O P W W = O b s e r v a t i o n p o n d w a s t e w a t e r , D P = D i s c h a r g e p i p e R W = R i v e r w a t e r , S D = S e d i m e n t

r e s p e c t i v e l y . T h e b a c t e r i a l s t r a i n s r e p r e s e n t t h e p r e p o n d e r a n t m o r p h o t y p e s i n t h e i r r e s p e c t i v e s o u r c e s . T h e s e b a c t e r i a h a v e b e e n r e p o r t e d t o g r o w o n h y d r o c a r b o n a n d a r o m a t i c c o m p o u n d s a s w e l l a s o t h e r o r g a n i c p o l l u t a n t s i n t h e e n v i r o n m e n t ( A k p o v e t a e t a l . , 2 0 1 1 ; O k e r e n t u g b a a n d E z e r o n y e , 2 0 0 3 ; M o e t a l . , 2 0 0 0 ; Z h a n g a n d M i l l e r , 1 9 9 4 ) D i f f e r e n t r e s u l t s w e r e o b t a i n e d , d e p e n d i n g o n t h e m e t h o d a d o p t e d t o e s t i m a t e c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f t h e o r g a n i s m s . C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y u s i n g B A T H w a s e v a l u a t e d i n t e r m s o f c h a n g e i n a b s o r b a n c e a t 5 4 0 n m . F i g u r e 1 s h o w e d a p r o g r e s s i v e i n c r e a s e i n t h e a d h e s i o n t o h y d r o c a r b o n w i t h i n c r e a s i n g v o l u m e o f n - o c t a n e a n d p - x y l e n e . T h i s i n d i c a t e d t h a t t h e c e l l s w e r e p a r t i t i o n e d i n t o t h e h y d r o c a r b o n p h a s e a n d t h e c e l l s e x h i b i t e d r e l a t i v e h i g h s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y i n t h e B A T H a s s a y . T h e l o s s o f b a c t e r i a f r o m t h e a q u e o u s p h a s e w a s a p p r o x i m a t e l y p r o p o r t i o n a l t o t h e v o l u m e o f n - o c t a n e a n d p - x y l e n e a d d e d t o t h e c e l l s u s p e n s i o n . T h e v a l u e s f r o m t h e B A T H a s s a y r e c o r d e d f o r t h e p a r t i t i o n i n g o f t h e o r g a n i s m s i s t h e p e r c e n t a g e o f b a c t e r i a s u s p e n s i o n t h a t p a r t i t i o n e d i n t o 0 . 5 m l o f n - o c t a n e a n d p - x y l e n e a s i n d i c a t e d i n T a b l e 2 . S o r o n g o n e t a l . , ( 1 9 9 1 ) a n d L a c h i c a a n d Z i n k ( 1 9 8 4 ) r e p o r t e d t h a t l o s s o f b a c t e r i a f r o m a q u e o u s p h a s e w a s a f u n c t i o n o f h y d r o c a r b o n c o n c e n t r a t i o n e m p l o y e d . T h e o r g a n i s m s p a r t i t i o n e d m o r e i n n - o c t a n e t h a n i n p - x y l e n e a s s h o w n i n T a b l e 2 . T h i s m a y b e a s a r e s u l t o f d e v a s t a t i n g e f f e c t o f p - x y l e n e o n t h e s u r f a c e o f t h e o r g a n i s m s t h a n n - o c t a n e . T h e a d h e r e n c e o f t h e o r g a n i s m s c o r r e l a t e d w i t h v o l u m e o f h y d r o c a r b o n s w i t h R 2 v a l u e s g r e a t e r t h a n 0 . 9 0 ( 0 . 9 0 4 4 R 2 0 . 9 9 2 2 ) f o r n - o c t a n e a n d g r e a t e r t h a n 0 . 9 4 ( 0 . 9 4 5 5 R 2 0 . 9 7 9 5 ) f o r p - x y l e n e i n a l l t h e b a c t e r i a l s t r a i n s ( F i g u r e 2 ) . T h e h i g h R 2 v a l u e s o b s e r v e d i n a l l t h e b a c t e r i a l s t r a i n s i n d i c a t e d t h a t v o l u m e o f h y d r o c a r b o n w a s a s t r o n g d e t e r m i n a n t o f t h e a d h e r e n c e . U s i n g n - o c t a n e i n B A T H a s s a y , P s e u d o m o n a s s p . R W W , B a c i l l u s s p . R B D a n d E s c h e r i c h i a s p . O P W W a r e c l a s s i f i e d a s s t r o n g l y h y d r o p h o b i c w h i l e C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P , C i t r o b a c t e r s p . R W a n d P s e u d o m o n a s s p . S D a r e m o d e r a t e l y h y d r o p h o b i c . S i m i l a r l y , p - x y l e n e i n d i c a t e d t h a t a l l t h e o r g a n i s m s a r e m o d e r a t e l y h y d r o p h o b i c . C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b o c i t y e s t i m a t e d b y s a l t a g g r e g a t i o n t e s t ( S A T ) a s s a y s h o w e d t h a t m a j o r i t y o f t h e t e s t i s o l a t e s a g g r e g a t e d a t 1 . 0 M ( N H 4 ) 2 S O 4 ( T a b l e 2 ) . T h i s i n d i c a t e d t h a t t h e b a c t e r i a l s t r a i n s f o u n d i n P o r t H a r c o u r t r e f i n e r y e f f l u e n t a r e m o d e r a t e l y h y d r o p h o b i c . T h e d i f f e r e n c e s i n S A T v a l u e s b e t w e e n P s e u d o m o n a s s p . R W W t h a t s h o w e d h y d r o p h o b i c a n d o t h e r t e s t o r g a n i s m s t h a t s h o w e d m o d e r a t e S A T v a l u e s m a y b e a s a r e s u l t o f d i f f e r e n c e s o n c e l l s u r f a c e c h a r g e s . T h i s i n d i c a t e s t h a t S A T v a l u e s m a y b e d e p e n d e n t o n t h e c h a r g e o n m i c r o b i a l s u r f a c e a s w e l l a s t h e a g e o f t h e c u l t u r e . T h i s i s i n a g r e e m e n t w i t h t h e r e s u l t s o b t a i n e d b y Q a d r i e t a l . , ( 1 9 8 8 ) i n w h i c h t h e y f o u n d t h a t a g g r e g a t i o n o f b a c t e r i a l s t r a i n s i n c r e a s e w i t h o l d c u l t u r e s a s c h a r g e s o n m i c r o b i a l s u r f a c e s i n c r e a s e s . N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 3 8 7 A d h e r e n c e ( % ) F i g u r e 1 : E f f e c t o f h y d r o c a r b o n a n d a q u e o u s p h a s e r a t i o s o n h y d r o p h o b i c i t y o f b a c t e r i a H y d r o c a r b o n ( m l )

T h e C o n g o r e d b i n d i n g , c o m m o n l y u s e d a s a m a r k e r o f h y d r o p h o b i c i t y ( M a j t a n a n d M a j t a n o v a , 2 0 0 1 ) w a s e m p l o y e d i n t h i s t e s t a n d t h e t e s t o r g a n i s m s e x h i b i t e d d i s t i n c t u p t a k e o f c o n g o r e d i n s o l u t i o n ( T a b l e 2 ) . P r e v i o u s s t u d i e s ( H a i d e r e t a l . , 1 9 9 0 ; Q a d r i e t a l . , 1 9 8 8 ) h a v e s h o w n t h a t c o n g o r e d b i n d i n g m a y r e f l e c t a n a r r a n g e m e n t o f c e l l s u r f a c e c o m p o n e n t s . C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P s h o w e d h i g h e s t C o n g o r e d u p t a k e o f 1 4 µ g w h i l e t h e l e a s t C o n g o r e d u p t a k e o f 1 0 . 5 µ g w a s r e c o r d e d f o r E s c h e r i c h i a c o l i . O P W W . C o n g o r e d b i n d i n g t e s t i n d i c a t e d t h a t a l l t h e t e s t o r g a n i s m s a r e s t r o n g l y h y d r o p h o b i c . B A T H a n d S A T h y d r o p h o b i c i t y t e s t s s o m e t i m e s f a i l t o c o r r e l a t e a n d t h i s h a s a l s o b e e n o b s e r v e d i n t h e N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 3 8 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 F i g u r e 2 : C o r r e l a t i o n o f h y d r o c a r b o n ( o c t a n e / x y l e n e ) v o l u m e w i t h p e r c e n t a g e o f a d h e r e n c e i n c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f T h e b a c t e r i a . T h e s o l i d l i n e ( n - o c t a n e ) a n d d o t t e d l i n e ( p - x y l e n e ) a r e p r e d i c t e d a d h e r e n c e v a l u e s . T h e c l o s e d a n d o p e n s q u a r e s r e p r e s e n t d a t a o b t a i n e d f r o m n - O c t a n e a n d p - X y l e n e r e s p e c t i v e l y H y d r o c a r b o n ( m l ) A d h e r e n c e ( % )

p r e s e n t s t u d y . L a c k o f c o r r e l a t i o n b e t w e e n S A T a n d B A T H t e s t r e s u l t s h a d b e e n o b s e r v e d b y S o t o - R o d r i g u e z e t a l . , ( 2 0 0 3 ) a n d L e e a n d Y i i ( 1 9 9 6 ) . A l s o t h e B A T H a n d C R B , S A T a n d C R B s o m e t i m e s f a i l t o c o r r e l a t e w i t h o n e a n o t h e r . E v e n w i t h i n B A T H a s s a y u s i n g d i f f e r e n t h y d r o c a r b o n s n - o c t a n e a n d p - x y l e n e t h e h y d r o p h o b i c i t y d i d n o t c o r r e l a t e a s s h o w n i n T a b l e 2 . P s e u d o m o n a s s p . R W W , B a c i l l u s s p . R B D a n d E s c h e r i c h i a c o l i . O P W W h a v e r e l a t i v e l y h i g h e r a d h e r e n c e t o n - O c t a n e t h a n p - X y l e n e . T h e f a i l u r e o f B A T H a n d S A T t o c o r r e l a t e m i g h t b e e x p l a i n e d b y t h e S A T a s s a y m e a s u r i n g t h e h y d r o p h o b i c i t y o f t h e o u t e r s u r f a c e a s a w h o l e w h i l e t h e B A T H a s s a y m e a s u r e d i t i n t e r m s o f a d h e s i o n ( M a t t o s - G u a r a l d i e t a l . , 1 9 9 9 ) . I n a d d i t i o n , h y d r o p h i b i c i t y a n d s u r f a c e c h a r g e o f b a c t e r i a m a y d i f f e r b e t w e e n s p e c i e s , s t r a i n s , a n d c h a n g e s w i t h v a r i a t i o n i n p h y s i o l o g i c a l s t a t e o f c e l l s a n d c o m p o s i t i o n o f s u s p e n s i o n m e d i a o r m i g h t i n v o l v e v a r i a b l e e x p r e s s i o n o f s u r f a c e - a s s o c i a t e d p r o t e i n s b e t w e e n s t r a i n s . C o l l e c t i v e l y , t h i s m i g h t a c c o u n t f o r t h e d i v e r s i t y o f B A T H , S A T a n d C R B i n d i c e s o b t a i n e d i n t h i s w o r k . A c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y i n f l u e n c e s t h e d i r e c t c o n t a c t o f c e l l w i t h h y d r o c a r b o n s a n d i s h e n c e , o n e o f t h e m a j o r f a c t o r s a f f e c t i n g t h e d e g r a d a t i o n o f o r g a n i c c o m p o u n d s . B i o a v a i l a b i l i t y o f o r g a n i c c o m p o u n d s , a p h y s i c o c h e m i c a l p a r a m e t e r c r i t i c a l i n t h e o v e r a l l r a t e o f d e g r a d a t i o n , i s a f u n c t i o n o f p h a s e s o l u b i l i t y a n d s o l u t i o n t r a n s p o r t p r o c e s s e s , h e n c e , p h e n o l i s t h e r e f o r e , e a s i l y b i o d e g r a d e d . T h e r e f o r e , p h e n o l d e g r a d i n g b a c t e r i a w i t h h y d r o p h o b i c c e l l s u r f a c e p r o p e r t i e s c o u l d b e p o t e n t i a l l y a p p l i c a b l e i n t h e t r e a t m e n t o f p h e n o l i c w a s t e w a t e r c o n t a m i n a t e d w i t h h y d r o c a r b o n s . R E F E R E N C E S A k p o v e t a O V , E g h a r e v b a F , M e d j o r W O , O s a r o K I , E n y e m i k e D E . 2 0 1 1 . M i c r o b i a l d e g r a d a t i o n a n d i t s K i n e t i c s o n C r u d e O i l P o l l u t e d S o i l . R e s . J . C h e m . S c i . , 1 ( 6 ) : 8 - 1 4 . A . P . H . A . 1 9 8 5 . S t a n d a r d M e t h o d s f o r t h e e x a m i n a t i o n o f W a t e r a n d W a s t e w a t e r , 1 6 t h e d i t i o n . A m e r i c a n P u b l i c H e a l t h A s s o c i a t i o n , A m e r i c a n w a t e r w o r k s A s s o c i a t i o n a n d W a t e r P o l l u t i o n c o n t r o l F e d e r a t i o n , W a s h i n g t o n , D . C . B a s s o n A , F l e m i n g L A , C h e n i a H Y . 2 0 0 8 . E v a l u a t i o n o f a d h e r e n c e , h y d r o p h o b i c i t y , a g g r e g a t i o n a n d b i o f i l m d e v e l o p m e n t o f F l a v o b a c t e r i u m j o h n s o n i a e - l i k e i s o l a t e s . M i c r o b . E c o l . , 3 7 : 1 - 1 4 . C o e l h o A , C a s t r o A V , D e z o t t i M , S a n t A n n a G L . 2 0 0 6 . T r e a t m e n t o f p e t r o l e u m r e f i n e r y s o u r w a t e r b y a d v a n c e d o x i d a t i o n p r o c e s s e s . J . H a z a r d . M a t . , B 1 3 7 : 1 7 8 - 1 8 4 . F o l s o m B R , C h a p m a n P J , P r i t c h a r d P M . 1 9 9 0 . P h e n o l a n d t r i c h l o r o e t h y l e n e d e g r a d a t i o n b y P s e u d o m o n a s c e p c i a G A : K i n e t i c s a n d i n t e r a c t i o n b e t w e e n s u b s t r a t e s . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 3 8 9 B a c t e r i a % A d h e r e n c e S A T M ( N H 4 ) 2 S O 4 C o n g o r e d b i n d i n g ( µ g ) n - o c t a n e p - x y l e n e P s e u d o m o n a s s p . R W W 6 0 . 3 3 ± 2 . 5 9 5 6 . 7 8 ± 5 . 0 3 0 . 4 0 ± 0 . 0 0 1 1 . 8 0 ± 1 . 0 0 B a c i l l u s s p . R B D 6 1 . 3 3 ± 1 . 9 2 5 4 . 8 3 ± 2 . 0 0 1 . 4 0 ± 0 . 0 0 1 0 . 9 0 ± 0 . 0 0 E s c h e r i c h i a c o l i . O P W W 6 0 . 0 6 ± 2 . 3 4 4 6 . 2 7 ± 2 . 8 7 2 . 0 0 ± 0 . 0 0 1 0 . 5 0 ± 5 . 0 0 C o r y n e b a c t e r i u m s p . D P 5 1 . 2 2 ± 1 . 0 2 5 1 . 9 4 ± 2 . 1 7 1 . 6 0 ± 0 . 0 0 1 4 . 7 0 ± 1 . 0 0 C i t r o b a c t e r s p . R W 5 3 . 4 4 ± 1 . 9 5 5 3 . 4 4 ± 1 . 0 5 1 . 2 0 ± 0 . 0 0 1 2 . 1 0 ± 2 . 0 0 P s e u d o m o n a s s p . S D 4 5 . 2 2 ± 3 . 0 4 4 5 . 2 2 ± 3 . 0 7 1 . 0 0 ± 0 . 0 0 1 2 . 4 0 ± 3 . 0 0 T a b l e 2 H y d r o p h o b i c i t y c h a r a c t e r i s t i c s o f p h e n o l - u t i l i z i n g b a c t e r i a l s t r a i n s B A T H e x p r e s s e d a s t h e p e r c e n t a g e o f b a c t e r i a f r o m 4 m l o f c e l l s u s p e n s i o n t h a t p a r t i t i o n i n t o 0 . 5 m l o f n - o c t a n e o r P - x v l e n e . S A T e x p r e s s e d a s t h e l o w e s t M ( N H 4 ) 2 S O 4 c o n c e n t r a t i o n i n t h e r e a c t i o n m i x t u r e t h a t p r o d u c e d v i s u a l c l u m p i n g U p t a k e o f C o n g o r e d d y e g r e a t e r t h a n 1 0 µ g w a s s c o r e d a s s t r o n g l y h y d r o p h o b i c

5 6 : 1 2 7 9 - 1 2 8 5 . H a i d e r K , A z a d A K , Q a d r i F , N a h a r S , C i z n a r I . 1 9 9 0 . R o l e o f p l a s m i d s i n v i r u l e n c e - a s s o c i a t e d a t t r i b u t e s a n d i n O - a n t i g e n e x p r e s s i o n i n S h i g e l l a d y s e n t r i a e t y p e 1 s t r a i n . J . M e d . M i c r o b i o l . , 3 3 : 1 - 9 . H i l l G A , R o b i n s o n C W . 1 9 7 5 . S u b s t r a t e i n h i b i t i o n k i n e t i c s : P h e n o l d e g r a d a t i o n b y P s e u d o m o n a s p u t i d a . B i o t e c h . B i o e n g . , 1 7 : 1 5 9 9 - 1 6 1 5 . H o l t J G , K r i e g N R , S n e a t h P H A , S t a l e y J T , W i l l i a m s S T . 1 9 9 4 . B e r g e y s M a n u a l o f D e t e r m i n a t i v e B a c t e r i o l o g y , 9 t h e d . W i l l i a m s , W i l k i n s . B a l t i m o r e . K a c z o r e k E , C h r z a n o w s k i Ł , P i j a n o w s k a A , O l s z a n o w s k i A . 2 0 0 8 . Y e a s t a n d b a c t e r i a c e l l h y d r o p h o b i c i t y a n d h y d r o c a r b o n b i o d e g r a d a t i o n i n t h e p r e s e n c e o f n a t u r a l s u r f a c t a n t s : r h a m n o l i p i d e s a n d s a p o n i n s . B i o r e s . T e c h n o l . , 9 9 : 4 2 8 5 - 4 2 9 1 . K r i s h n a k u m a r P K , D i n e s h b a b u A P , S a s i k u m m a r G , B h a t G S . 2 0 0 7 . T o x i c i t y o f t r e a t e d r e f i n e r y e f f l u e n t t u s i n g b r i n e S h r i m p ( A r t e m i a s a l i n a ) e g g a n d l a r v a l b i o a s s a y . F i s h e r y T e c h n o l . , 4 4 : 8 5 - 9 2 . L a c h i c a R V , Z i n k D L . 1 9 8 4 . P l a s m i d - a s s o c i a t e d c e l l s u r f a c e c h a r g e a n d h y d r o p h o b i c i t y o f Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a . I n f e c t . I m m u n . , 4 4 : 5 4 0 - 5 4 3 . L e e K K , Y i i K C . 1 9 9 6 . A c o m p a r i s o n o f t h r e e m e t h o d s f o r a s s a y i n g h y d r o p h o b i c i t y o f p a t h o g e n i c V i b r i o s . L e t t . A p p l . M i c r o b i o l . , 2 3 : 3 4 3 - 3 4 6 . L e u n g Y M , O u Y J , K w a n C Y , L o h T T . 1 9 9 7 . S p e c i f i c i n t e r a c t i o n b e t w e e n t e t r a n d r i n e a n d Q u i l l a j a s a p o n i n s i n p r o m o t i n g p e r m e a b i l i z a t i o n o f p l a s m a m e m b r a n e i n h u m a n l e u k e m i c H L - 6 0 c e l l . B i o c h i m i c a e t B i o p h y s i c a A c t a . , 1 3 2 5 : 3 1 8 - 3 2 8 . L i n d a h l M , F a r i s A , W a d s t r o m T , H j e r t e n S . 1 9 8 1 . A n e w t e s t b a s e d o n s a l t i n g o u t t o m e a s u r e r e l a t i v e s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f b a c t e r i a l c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 6 7 7 : 4 7 1 - 4 7 6 . M a j t a n V , M a j t a n o v a L . 2 0 0 1 . I n v i t r o e f f e c t o f f l u o r o q u i n o l o n e s a n d a m i n o g l y c o s i d e s o n t h e s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y a n d m o t i l i t y o f S a l m o n e l l a e n t e r i c a s e r o t y p e T y p h i m u r i u m D T 1 0 4 . B i o l o g i a B r a t i s l a v a . 5 6 ( 6 ) : 6 2 5 - 6 3 1 . M a t t o s - G u a r a l d i A L , F o r m i g a L C D , A n d r a d e A F B . 1 9 9 9 . C e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y o f s u c r o s e f e r m e n t i n g a n d n o n f e r m e n t i n g C o r y n e b a c t e r i u m d i p h t h e r i a e s t r a i n s e v a l u a t e d b y d i f f e r e n t m e t h o d s . C u r r . M i c r o b i o l . , 3 8 : 3 7 - 4 2 . M o Z L , W a n g X H , Y u Y , L i H R , J i W S , X u H S . 2 0 0 0 . S e l e c t i o n o f o r g a n i c p o l l u t a n t s d e g r a d i n g b a c t e r i a i n s h r i m p p o n d s . J . F i s h . C h i n . , 2 4 : 3 3 4 - 3 3 8 . N o w e c o L a b o r a t o r y . 1 9 9 7 . N o r w a l k W a s t e w a t e r E q u i p m e n t C o m p a n y , I n c . 2 2 0 R e p u b l i c S t r e e t N o r w a l k , O h i o U . S . A . 4 4 8 5 7 - 1 1 5 6 . h t t p : / / w w w . n o r w e c o . c o m / h t m L / l a b / W h a t T e s t s . h t m . N w a n y a n w u C E , A b u G O . 2 0 1 0 . I n v i t r o e f f e c t s o f p e t r o l e u m r e f i n e r y w a s t e w a t e r o n d e h y d r o g e n a s e a c t i v i t y i n m a r i n e b a c t e r i a l s t r a i n s . A m b i . A g u a 5 : 2 1 - 2 9 . O k e r e n t u g b a P O , E z e r o n y e O U . 2 0 0 3 . P e t r o l e u m d e g r a d i n g p o t e n t i a l s o f s i n g l e a n d m i x e d m i c r o b i a l c u l t u r e s i s o l a t e d f r o m r i v e r s a n d r e f i n e r y e f f l u e n t i n N i g e r i a . A f r . J . B i o t e c h n o l . 2 ( 9 ) : 2 8 8 - 2 9 2 . P a y n e S M , F i n k e l s t e i n R A . 1 9 7 7 . D e t e c t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f i r o n - r e s p o n s i v e a v i r u l e n t m u t a n t s o n c o n g o r e d a g a r . I n f e c t . I m m u n . , 1 8 : 9 4 - 9 8 . P i j a n o w s k a A , K a c z o r e k E , C h r z a n o w s k i L , O l s z a n o w s k i A . 2 0 0 7 . C e l l h y d r o p h o b i c i t y o f P s e u d o m o n a s s p . a n d B a c i l l u s s p . b a c t e r i a a n d h y d r o c a r b o n b i o d e g r a d a t i o n i n t h e p r e s e n c e o f Q u i l l a y a s a p o n i n . W o r l d J M i c r o b i o l B i o t e c h n o l . 2 3 : 6 7 7 - 6 8 2 . N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 3 9 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 8 3 - 3 9 1 3 9 1 Q a d r i F , H o s s a n S A , C i z n a r I , H a i d e r K , L j u n g h A , W a d s t r o m T , S a c k D A . 1 9 8 8 . C o n g o r e d b i n d i n g a n d s a l t a g g r e g a t i o n a s i n d i c a t o r o f v i r u l e n c e i n S h i g e l l a s p e c i e s . J . C l i n . M i c r o b i o l . , 2 6 : 1 3 4 3 - 1 3 4 8 . R o s e n b e r g M . 1 9 8 1 . B a c t e r i a l a d h e r e n c e t o p o l y s t y r e n e : a r e p l i c a m e t h o d o f s c r e e n i n g f o r b a c t e r i a l h y d r o p h o b i c i t y . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , 4 2 : 3 7 5 - 3 7 7 . R o s e n b e r g M . 1 9 8 4 . B a c t e r i a l a d h e r e n c e t o h y d r o c a r b o n s : a u s e f u l t e c h n i q u e f o r s t u d y i n g c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y . F E M S M i c r o b i o l . L e t t . , 2 2 : 2 8 9 - 2 9 5 . R o s e n b e r g M , K j e l l e b e r g S . 1 9 8 6 . H y d r o p h o b i c i n t e r a c t i o n s : R o l e i n b a c t e r i a l a d h e s i o n . A d v . M i c r o b i o l . E c o l . , 9 : 3 5 3 - 3 9 3 . R o z g o n y i F , S z i t h a K R , L j u n g h A , B a l o d a S B , H j e r t e n S , W a d s t r o m T . 1 9 8 5 . I m p r o v e m e n t o f t h e s a l t a g g r e g a t i o n t e s t t o s t u d y b a c t e r i a l c e l l s u r f a c e h y d r o p h o b i c i t y . F E M S M i c r o b i o l . L e t t . 3 0 : 1 3 1 - 1 3 8 . S a r a l a T D , S a b i t h a M A . 2 0 1 2 . W a t e r q u a l i t y a n d e n v i r o n m e n t a l a s s e s s m e n t o f s u g a r m i l l e f f l u e n t . J . R e s . B i o l o . , 2 : 1 2 5 - 1 3 5 . S o r o n g o n M L , B l o o d g o o d R A , B u r c h a r d R P . 1 9 9 1 . H y d r o p h o b i c i t y , a d h e s i o n a n d s u r f a c e - e x p o s e d p r o t e i n s o f g l i d i n g b a c t e r i a . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , 5 7 : 3 1 9 3 - 3 1 9 9 . S o t o - R o d r i g u e z S A , R o q u e A , L i z a r r a g a - P a r t i d a M L , G u e r r a - F l o r e s A L , G o m e z - G i l B . 2 0 0 3 . V i r u l e n c e o f l u m i n o u s v i b r i o s t o A r t e m i a f r a n c i s c a n a n a u p l i i . D i s A q u a t O r g . , 5 3 : 2 3 1 - 2 4 0 W a l s h S E , M a i l l a r d J Y , R u s e l l A D , C a t r e n i c h C E , C h a r o n n e a u D L , B a r t o l o R G . 2 0 0 3 . A c t i v i t y a n d m e c h a n i s m o f a c t i o n o f s e l e c t e d b i o c i d a l a g e n t s o n g r a m p o s i t i v e a n d g r a m n e g a t i v e b a c t e r i a . J . A p p l . M i c r o b i o l . , 9 4 : 2 4 0 - 2 4 7 . Z h a n g Y , M i l l e r R M . 1 9 9 4 . E f f e c t o f P s e u d o m o n a s r h a m n o l i p i d b i o s u r f a c t a n t o n c e l l h y d r o p h o b i c i t y a n d b i o d e g r a d a t i o n o f o c t a d e c a n e . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , 6 0 : 2 1 0 1 - 2 1 0 6 . N w a n y a n w u e t a l . , 2 0 1 2 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g Y o u r e t a i n y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / S u b m i t . p h p .