J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y P l a s m a p r o t e i n m a r k e r s f o r e s t i m a t i n g t h e p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e o f A m a z o n t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 ) K e y w o r d s : P o d o c n e m i s e x p a n s a , A m a z o n B a s i n , p l a s m a p r o t e i n s , e l e t r o p h o r e s i s , p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e . A B S T R A C T : T h i s s t u d y a i m s t o t e s t t h e p o t e n t i a l o f a l l e l i c f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s o f p l a s m a p r o t e i n s a n a l y s e d b y s t a r c h g e l e l e c t r o p h o r e s i s f o r i d e n t i f y i n g A m a z o n t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 ) s t o c k s . T h r e e p r o t e i n s : t r a n s f e r r i n ( T f ) , a l b u m i n ( A l b ) a n d g e n e r a l p r o t e i n ( G P ) , a n d f o u r e n z y m e s : e s t e r a s e ( E S T ) , p h o s p h o g l u c o m u t a s e ( P G M ) , m a l a t e d e h y d r o g e n a s e ( M D H ) a n d s u p e r o x i d e d i s m u t a s e ( S O D ) f r o m t h r e e g e o g r a p h i c a l a r e a s i n t h e A m a z o n r e g i o n , t o t a l i z i n g t h r e e p o p u l a t i o n s a m p l e s : 1 ) M a r a c a r a n a , R i o U a t u m ã - A M , 2 ) T r o m b e t a s , R i o T r o m b e t a s - P A a n d 3 ) M o n t e C r i s t o , R i o T a p a j ó s - P A , w e r e t e s t e d . O u t o f 1 1 p r e s u m p t i v e l o c i d e t e c t e d , s e v e n w e r e m o n o m o r p h i c ( G P - 1 , G P - 2 , E S T - 1 , E S T - 2 , P G M - 1 , S O D - 1 a n d S O D - 2 ) a n d f o u r p o l y m o r p h i c ( T f , A l b , M D H a n d P G M - 2 ) . T h e c h i - s q u a r e ( X 2 ) a n a l y s i s f o r t e s t i n g t h e h y p o t h e s i s o f i n d e p e n d e n t s e g r e g a t i o n b e t w e e n p a i r s o f p o l y m o r p h i c l o c i i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s , r e v e a l e d n o s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s . B a s e d o n W r i g h t s F - s t a t i s t i c s ( F I S , F I T a n d F S T ) t h e d e t e c t e d a v e r a g e v a l u e o f F I S = 0 . 1 3 4 7 , i n d i c a t e s a m o d e r a t e i n b r e e d i n g w i t h i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s , w h e r e a s t h e a v e r a g e v a l u e o f F I T = 0 . 1 9 1 2 , i n d i c a t e s a m o d e r a t e l y g r e a t i n b r e e d i n g i n t h e t o t a l p o p u l a t i o n s a m p l e . T h e d e t e c t e d a v e r a g e v a l u e o f F S T = 0 . 0 6 5 2 , i n d i c a t e s a m o d e r a t e g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s . T h e p a i r w i s e c o m p a r i s o n s o f F S T p o i n t t o a m o d e r a t e d i f f e r e n t i a t i o n b e t w e e n a l l c o m p a r i s o n s m a d e w i t h t h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e ( F S T r a n g i n g f r o m 0 . 0 6 1 t o 0 . 0 6 6 ) ; b u t v e r y l i t t l e d i f f e r e n t i a t i o n w a s d e t e c t e d b e t w e e n M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s s a m p l e s ( F S T = 0 . 0 0 3 5 ) . A l i m i t e d g e n e f l o w a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s w a s d e t e c t e d ( N m = 3 . 5 8 ) . T h e U P G M A d e n d r o g r a m s h o w e d t h e l o w e s t g e n e t i c d i s t a n c e b e t w e e n p o p u l a t i o n s a m p l e s o f M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s , w h e r e a s , t h e h i g h e s t g e n e t i c d i s t a n c e s w e r e d e t e c t e d w h e n t h e s e t w o s a m p l e s w e r e c o m p a r e d t o t h a t o f M o n t e C r i s t o . E x a c t t e s t f o r p o p u l a t i o n d i f f e r e n t i a t i o n r e v e a l e d h i g h l e v e l s o f s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s i n a l l p a i r w i s e c o m p a r i s o n s m a d e w i t h t h e M o n t e C r i s t o s a m p l e . T h e d a t a p o i n t o u t a p o s s i b l e e x i s t e n c e o f d i s t i n c t s u b p o p u l a t i o n s s t o c k s o f P . e x p a n s a i n t h e s a m p l e d a r e a , w h e r e M o n t e C r i s t o s a m p l e w a s a l w a y s g e n e t i c a l l y d i f f e r e n t c o m p a r e d t o t h e o t h e r t w o p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d . 3 1 5 - 3 3 7 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 4 T h i s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A u t h o r s : T e i x e i r a A S 1 a n d M o u r a A S 2 . I n s t i t u t i o n : 1 . I n s t i t u t o N a c i o n a l d e P e s q u i s a s d a A m a z ô n i a ( I N P A ) , A v e n i d a A n d r é A r a ú j o , 2 9 3 6 , A l e i x o , C E P 6 9 0 6 0 - 0 0 1 , M a n a u s , A M , B r a s i l . 2 . U n i n o r t e L a u r e a t e - C e n t r o U n i v e r s i t á r i o d o N o r t e - L a u r e a t e I n t e r n a t i o n a l U n i v e r s i t i e s , A v e n i d a J o a q u i m N a b u c o , 1 2 3 2 , C e n t r o , C E P 6 9 0 2 0 - 0 3 0 , M a n a u s - A M , B r a s i l . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : T e i x e i r a A S . E m a i l : a y l t o n 1 9 5 0 @ y a h o o . c o m . b r W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / d o c u m e n t s / R A 0 2 2 6 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 3 A p r 2 0 1 2 A c c e p t e d : 1 9 A p r 2 0 1 2 P u b l i s h e d : 2 6 M a y 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : T e i x e i r a A S a n d M o u r a A S . P l a s m a p r o t e i n m a r k e r s f o r e s t i m a t i n g t h e p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e o f A m a z o n t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 ) . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y O r i g i n a l R e s e a r c h J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l

I N T R O D U C T I O N P o d o c n e m i s e x p a n s a ( S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 ) , p o p u l a r l y k n o w n a s g i a n t A m a z o n r i v e r t u r t l e o r a l s o a s A m a z o n t u r t l e i n t h e B r a z i l i a n A m a z o n B a s i n , b e l o n g s t o t h e o r d e r T e s t u d i n e s , s u b o r d e r P l e u r o d i r a , f a m i l y P o d o c n e m i d i d a e ( B i c k h a m e t a l . , 2 0 0 7 ) . A m o n g t h e 1 4 s p e c i e s o f t u r t l e s e x i s t i n g i n t h e A m a z o n r e g i o n , P . e x p a n s a i s r e c o g n i z e d t o b e t h e l a r g e s t f r e s h w a t e r t u r t l e o f t h e g e n u s P o d o c n e m i s i n S o u t h A m e r i c a , b e i n g q u i t e e x p l o i t e d c o m m e r c i a l l y b y m a n ( A l h o , 1 9 8 5 , V o g t , 2 0 0 8 ) . F e m a l e s o f t h i s s p e c i e s c a n m e a s u r e 5 0 t o 8 9 c m l o n g , 6 0 c m w i d e ( A l f i n i t o , 1 9 7 5 ; P r i t c h a r d a n d T r e b b a u , 1 9 8 4 ; I B A M A , 1 9 8 9 ) a n d w e i g h 1 5 t o 8 0 k g ( M i t t e r m e i e r , 1 9 7 8 ; A l h o a n d P á d u a , 1 9 8 2 ; P r i t c h a r d a n d T r e b b a u , 1 9 8 4 ; I B A M A , 1 9 8 9 ) . T h e A m a z o n t u r t l e i s w i d e l y d i s t r i b u t e d a n d i t c a n b e f o u n d i n t h e R i o s A r a g u a i a a n d T o c a n t i n s ( M i t t e r m e i e r e t a l . , 1 9 8 0 ; F e r r e i r a J ú n i o r a n d C a s t r o , 2 0 0 3 ) , m o u t h o f t h e R i o A m a z o n a s , a n d a t l e a s t u p t o R i o s M a r a ñ ó n a n d M o r o n a , i n P e r u . T h e g e o g r a p h i c a l d i s t r i b u t i o n o f t h i s s p e c i e s a l s o c o v e r s t h e R i o s O r i n o c o a n d E s s e q u i b o , b o t h i n V e n e z u e l a ( M i t t e r m e i e r e t a l . , 1 9 8 0 ; P r i t c h a r d a n d T r e b b a u , 1 9 8 4 ; I v e r s o n , 1 9 9 2 ) , a l s o i n c l u d i n g R i o s i n B o l i v i a , C o l o m b i a a n d G u y a n a . I n E c u a d o r , t h e r e h a s b e e n a d e c r e a s e i n t h e n u m b e r o f P . e x p a n s a a t t h e R i o T i p u t i n i ( C i s n e r o s - H e r e d i a , 2 0 0 6 ) . A c c o r d i n g t o G i l m o r e ( 1 9 8 6 ) , t h e c a p t u r e o f A m a z o n t u r t l e c a n b e c o n s i d e r e d t h e m o s t i m p o r t a n t e t h n o z o o l o g i c a l a c t i v i t y t h r o u g h o u t t h e A m a z o n r e g i o n , b a c k f r o m t h e p r e - C o l u m b i a n t i m e s u p t o t o d a y . M a n y a d v e n t u r e r s a n d t r a v e l e r s w h o r o a m e d S o u t h A m e r i c a i n t h e c e n t u r i e s t h a t f o l l o w e d i t s d i s c o v e r y h i g h l i g h t e d s e v e r a l n a t u r a l s p e c t a c l e s o f t h e A m a z o n , a m o n g w h i c h t h e m o s t i m p r e s s i v e w e r e t h e m a j o r a g g l o m e r a t i o n s o f t h e A m a z o n t u r t l e i n l a r g e b e a c h e s o f t h e A m a z o n a n d O r i n o c o R i v e r b a s i n s . T h e s p a w n o f A m a z o n t u r t l e i n l a r g e g r o u p s , w i t h t e n s o f t h o u s a n d s o f f e m a l e s c r a w l i n g u p t o t h e b e a c h e s w a s a t t h e s a m e t i m e a f a i t h f u l r e c o r d o f t h e a b u n d a n c e a n d e x u b e r a n c e o f t h e t u r t l e p o p u l a t i o n s o f t h e N e w W o r l d ( F e r r e i r a J u n i o r , 2 0 0 3 ) . A f t e r E u r o p e a n o c c u p a t i o n o f t h e A m a z o n , t h e c o n s u m p t i o n o f A m a z o n t u r t l e a s s u b s i s t e n c e a c t i v i t y t u r n e d i n t o a n e x t r a c t i v e p r o d u c t i o n s y s t e m w i t h c h a r a c t e r i s t i c s o f m e r c a n t i l i s m ( 1 7 0 0 - 1 9 0 0 a p p r o x i m a t e l y ) , w h e r e , t h e m a i n p r o d u c t s w e r e b u t t e r a n d o i l p r o d u c e d f r o m t h e e g g s , b o t h u s e d f o r f r y i n g f o o d , h o u s e h o l d a n d p u b l i c l i g h t i n g ( B a t e s , 1 8 6 3 ; S m i t h , 1 9 7 4 ) . A t t h a t t i m e , t h e e g g s w e r e c r u s h e d i n a c a n o e t o b r e a k t h e s h e l l s . A f t e r w a r d s , w a t e r w a s a d d e d t o i t m a k i n g a m i x t u r e t h a t w a s l e f t e x p o s e d t o t h e s u n f o r s e v e r a l h o u r s i n o r d e r t o e x t r a c t t h e o i l f l o a t i n g o n t h e s u r f a c e . T h e o i l w a s s k i m m e d o f f t o g e t h e r w i t h s h e l l s a n d b o i l e d b e f o r e b e i n g s t o r e d i n c l a y p o t s ( S m i t h , 1 9 7 4 ; 1 9 7 9 ; R e d f o r d a n d R o b i n s o n , 1 9 9 1 ) , w h i l e , t h e f a t e x t r a c t e d b y t h i s p r o c e s s , w a s m i x e d w i t h t h e r e s i n , a n d u s e d t o c a u l k b o a t s ( S m i t h , 1 9 7 4 ; 1 9 7 9 ) . I n t h e e i g h t e e n t h c e n t u r y , P . e x p a n s a u s e d t o s p a w n i n s o m e b e a c h e s n e a r t h e t o w n o f I t a c o a t i a r a , S t a t e o f A m a z o n a s , B r a z i l , w h e r e , d u e t o c o m m e r c i a l i n t e r e s t s o f t h e P o r t u g u e s e t h e s e p l a c e s s t a r t e d b e i n g n a m e d a s R o y a l b e a c h ( P e s q u e i r o R e a l d a s T a r t a r u g a s ) . T h e m e a t o f t h e A m a z o n t u r t l e w a s d e s t i n e d f o r l o c a l c o n s u m p t i o n , s u p p l y i n g o n l y t h e r e g i o n a l m a r k e t a n d t r o o p s o f t h e P r o v i n c e o f R i o N e g r o i n B a r c e l o s , S t a t e o f A m a z o n a s , B r a z i l ( f o r d e t a i l s s e e S m i t h , 1 9 7 9 ) . B y 1 9 8 0 s , t h e r e w a s a c h a n g e i n t h e h u m a n c o n s u m p t i o n o f t h e A m a z o n t u r t l e m e a t , w h e r e t h i s p r o d u c t , w h i c h w a s c o n s i d e r e d a m a i n i t e m a n d s o u r c e o f p r o t e i n f o r l o c a l p e o p l e , b e g a n a l s o t o b e c o n s u m e d a s a d e l i c a c y i n t h e A m a z o n i a n p e o p l e ' s d i e t ( A l h o , 1 9 8 5 ) . I n M a n a u s , c a p i t a l c i t y o f t h e S t a t e o f A m a z o n a s , B r a z i l , t h e s o - c a l l e d " t a r t a r u g a d a " , a b a n q u e t o f A m a z o n t u r t l e m e a t p r e p a r e d i n d i f f e r e n t w a y s , i s v e r y c o m m o n o n i m p o r t a n t o c c a s i o n s . T h u s , e x p l o i t a t i o n , i l l e g a l t r a d e a n d c o n s u m p t i o n o f t u r t l e s a r e s o c i a l l y i m p o r t a n t f o r t h e h i g h e r s o c i a l c l a s s , a n d e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t f o r t h e l o w e r s o c i a l c l a s s w h o c a t c h e s t h e s e a n i m a l s t o s u p p l y T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 1 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7

t h e d e m a n d f r o m t h e h i g h e r s o c i a l c l a s s ( A l h o , 1 9 8 5 ) . I n B e l é m , c a p i t a l c i t y o f t h e S t a t e o f P a r á , B r a z i l , i n a d d i t i o n t o t h e t r a d e o f f a t a n d d e r i v a t e s , t h e c o n s u m p t i o n o f m e a t a n d e g g s f r o m t h e A m a z o n t u r t l e , i s a l s o p r a c t i c e d ( A l v e s a n d S a n t a n a , 2 0 0 8 ) . O t h e r b y - p r o d u c t s , s u c h a s s h e l l s , f a t a n d v i s c e r a o f t h e A m a z o n t u r t l e a r e m u c h a p p r e c i a t e d , a n d u s e d i n m a k i n g m e d i c i n a l o i n t m e n t s , s o a p s , c o s m e t i c s , h o u s e h o l d i t e m s a n d a d o r n m e n t s ( S m i t h , 1 9 7 4 , 1 9 7 9 ; A l h o , 1 9 8 5 ; I B A M A , 1 9 8 9 ; P a n t o j a - L i m a , 2 0 0 7 ; A l v e s a n d S a n t a n a , 2 0 0 8 ) . T h e A m a z o n t u r t l e m e a t b e s i d e s b e i n g c o n s u m e d a s a l o c a l d e l i c a c y h a s a l s o b e e n l o o k e d f o r i n r e s t a u r a n t s ( W e t t e r b e r g e t a l . , 1 9 7 6 ; F e r r a r i n i , 1 9 8 0 ; R e d f o r d a n d R o b i n s o n , 1 9 9 1 ) . A f t e r s e v e r a l d e c a d e s o f i n t e n s e e x p l o i t a t i o n , P o d o c n e m i s e x p a n s a h a d a l r e a d y b e e n c o n s i d e r e d a s e n d a n g e r e d s p e c i e s b y t h e c r i t e r i a o f t h e I n t e r n a t i o n a l U n i o n f o r C o n s e r v a t i o n o f N a t u r e a n d N a t u r a l R e s o u r c e s ( I U C N ) . T o d a y , d u e t o p r o t e c t i o n p r o g r a m m e s i m p l e m e n t e d b y t h e B r a z i l i a n f e d e r a l g o v e r n m e n t , a n d l e d b y C h i c o M e n d e s I n s t i t u t e f o r B i o d i v e r s i t y ( I C M B I O ) a n d t h e C e n t e r f o r C o n s e r v a t i o n a n d M a n a g e m e n t o f R e p t i l e s a n d A m p h i b i a n s ( R A N ) i n t h e A m a z o n r e g i o n , t h i s s p e c i e s i s n o l o n g e r t h r e a t e n e d . H o w e v e r , t h i s s p e c i e s s t i l l s h o w s a l o w r i s k o f e x t i n c t i o n , t h e r e f o r e , i t i s c o n s i d e r e d a c o n s e r v a t i o n d e p e n d e n t s p e c i e s a c c o r d i n g t o t h e I U C N c r i t e r i a . T h e P o d o c n e m i s s p e c i e s a r e l i s t e d i n t h e A p p e n d i x I I o f t h e C o n v e n t i o n o n I n t e r n a t i o n a l T r a d e i n E n d a n g e r e d S p e c i e s o f W i l d F a u n a a n d F l o r a ( C I T E S ) , p u b l i s h e d a s A n n e x I I , N o r m a t i v e I n s t r u c t i o n N u m b e r 1 1 / 2 0 0 5 , a v a i l a b l e a t t h e B r a z i l i a n I n s t i t u t e o f t h e E n v i r o n m e n t a n d R e n e w a b l e N a t u r a l R e s o u r c e s ( I B A M A ) . P r o t e i n a n d i s o z y m e e l e c t r o p h o r e s i s h a s l o n g b e e n u s e d a s a p o w e r f u l m o l e c u l a r t o o l f o r s p e c i e s i d e n t i f i c a t i o n , p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e , c o n s e r v a t i o n a n d m a n a g e m e n t g e n e t i c s o f p l a n t s a n d a n i m a l s ( F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; F e r g u s o n e t a l . , 1 9 9 5 , S c a l t s o y i a n n e s , 1 9 9 9 , Z e i d l e r , 2 0 0 0 , R i d g w a y , 2 0 0 5 ; V e r s p o o r e t a l . , 2 0 0 5 ; S u j a t h a e t a l . , 2 0 1 1 ) . P r o t e i n a n d i s o z y m e m o l e c u l e s k n o w n a s g e n e t i c m a r k e r s a r e e n c o d e d b y s t r u c t u r a l g e n e s , w h i c h p l a y t h e r o l e o f d e t e r m i n i n g t h e p r e c i s e s e q u e n c e o f a m i n o a c i d s i n t h e i r p o l y p e p t i d e c h a i n s . T h u s , w h e n e v e r t h e s e m o l e c u l e s a r e e l e c t r o p h o r e t i c a l l y a n a l y s e d , t h e b a n d s v i s u a l i z e d i n t h e g e l s a r e a s s u m e d a s d i r e c t p r o d u c t s o f g e n e a c t i o n . T h e s e g e n e t i c m a r k e r s w h e n e x t r a c t e d f r o m v a r i o u s b i o l o g i c a l t i s s u e s o f a n i m a l a n d v e g e t a b l e o r i g i n ( m u s c l e , h e a r t , l i v e r , w h o l e b l o o d , b l o o d p l a s m a , h e m o l y m p h , s e e d , r o o t , l e a f , a m o n g o t h e r s ) a n d t h e n a n a l y s e d b y e l e c t r o p h o r e s i s , r e v e a l p r o t e i n b a n d i n g p a t t e r n s w h i c h c a n p r o v i d e v a l u a b l e i n f o r m a t i o n , p r i m a r i l y r e g a r d i n g t h e c o r r e c t i d e n t i f i c a t i o n o f s p e c i e s , n a t u r a l a n d a r t i f i c i a l s t o c k s ( F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; F e r g u s o n e t a l . , 1 9 9 5 ) . A m o n g t h e m o s t d i v e r s e b i o l o g i c a l m o l e c u l e s , p r o t e i n s a r e e s s e n t i a l f o r t h e e x p r e s s i o n o f h e r e d i t a r y i n f o r m a t i o n . T h e r e a r e t e n s o f t h o u s a n d s o f g e n e s c o d i n g f o r u n i q u e p o l y p e p t i d e c h a i n s , w h i c h , e i t h e r s o l e l y o r i n c o m b i n e d f o r m s , g e n e r a t e a n i n d e f i n i t e l y g r e a t n u m b e r o f p r o t e i n v a r i a n t s , a v a r i e t y f u r t h e r e m b e l l i s h e d b y a l l e l i c d i v e r s i t y . S o f a r , p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s h a s p r o v i d e d t h e m a i n s o u r c e o f i n s i g h t i n t o t h e g e n e t i c c h a r a c t e r o f s p e c i e s i n t h e w i l d ( V e r s p o o r e t a l . , 2 0 0 5 ) . P r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s d e t e c t s g e n e t i c v a r i a t i o n t h a t a r i s e s f r o m a m i n o a c i d s u b s t i t u t i o n s g e n e r a t e d b y b a s e s e q u e n c e v a r i a t i o n . T h e s e s u b s t i t u t i o n s a l t e r t h e c h a r g e s t a t e o r c o n f o r m a t i o n a l c h a r a c t e r o f t h e p r o t e i n a n d c h a n g e i t s m o b i l i t y w h e n p l a c e d i n a g e l e l e c t r o p h o r e s i s m a t r i x s u b j e c t e d t o a n e l e c t r i c a l f i e l d . H o w e v e r , p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s p r e s e n t s s o m e l i m i t a t i o n s , s u c h a s n o t e v e r y D N A s e q u e n c e v a r i a t i o n t h a t l e a d s t o a m i n o a c i d c h a n g e s , n o t a l l a m i n o a c i d c h a n g e s a r e d e t e c t a b l e b y t h i s t e c h n i q u e . M o r e o v e r , e l e c t r o p h o r e s i s s c r e e n i n g c a n d e t e c t o n l y a p a r t o f t h e a m i n o a c i d s e q u e n c e v a r i a t i o n , w h i c h m i g h t b e p r e s e n t , a m i n o a c i d v a r i a t i o n r e p r e s e n t s o n l y p a r t o f t h e v a r i a t i o n i n t h e D N A , p r o t e i n - c o d i n g r e g i o n s r e p r e s e n t o n l y a s m a l l p a r t o f t h e o v e r a l l g e n o m e , o n l y o n e t h i r d o f a m i n o T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 1 7

a c i d s u b s t i t u t i o n s a n d o n e t e n t h o f D N A b a s e s u b s t i t u t i o n s w i l l b e d e t e c t e d b y t h i s m e t h o d . D e s p i t e t h e s e l i m i t a t i o n s , p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s a n a l y s e s a r e s t i l l a b l e t o p r o v i d e v a l u a b l e i n s i g h t i n t o t h e r e l a t i v e a m o u n t a n d d i s t r i b u t i o n o f g e n e t i c v a r i a t i o n w h i c h , i n t h e c o n t e x t o f p o p u l a t i o n g e n e t i c t h e o r y , c a n i t e s e l f g i v e s i g n i f i c a n t i n s i g h t i n t o t h e c h a r a c t e r o f a g i v e n s p e c i e s ( f o r r e v i e w s e e V e r s p o o r e t a l . , 2 0 0 5 ) . E v e n w i t h t h e a d v e n t o f D N A m o l e c u l a r m a r k e r s , p r o t e i n a n d i s o z y m e m a r k e r s w h e n s e p a r a t e d b y e l e c t r o p h o r e s i s , d u e t o t h e r e l a t i v e s i m p l i c i t y , s p e e d a n d r e l a t i v e l y l o w c o s t o f a n a l y s i s a s c o m p a r e d t o m a n y o t h e r s a r e s t i l l b e i n g a p p l i e d i n s t u d i e s o f p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e i n d i f f e r e n t t a x o n o m i c g r o u p s . F o r i n s t a n c e , e l e c t r o p h o r e t i c s t u d i e s o f p r o t e i n s a n d i s o z y m e s h a v e s u c c e s s f u l l y b e e n u s e d i n : p l a n t s ( S c a l t s o y i a n n e s , 1 9 9 9 ; Z e i d l e r , 2 0 0 0 ; V e a s e y e t a l . , 2 0 0 8 ) ; i n s e c t s ( S i m o n a n d H e b e r t , 1 9 9 5 ; S c a r p a s s a a n d T a d e i , 2 0 0 0 ; S a n t o s e t a l . , 2 0 0 3 ) ; c o r a l r e a f s ( R i d g w a y , 2 0 0 5 ) ; m o l l u s k s ( N i k i f o r o v a n d Z v y a g i n t s e v , 2 0 0 8 ) ; r e p t i l e s ( B o c k e t a l . , 2 0 0 1 ) ; f i s h ( B i l l i n g t o n , 1 9 9 6 , B a t i s t a a n d S o l é - C a v a , 2 0 0 5 ; K u z m i n a n d K u z m i n a , 2 0 0 5 , V e r s p o o r e t a l . , 2 0 0 5 ; Z a w a d z k i e t a l . , 2 0 0 8 ) ; m a m m a l s ( E r d o ğ a n a n d Ö z b e y a z , 2 0 0 4 ; Y i ğ i t e t a l . , 2 0 0 7 ; T a o e t a l . , 2 0 0 7 ) ; a m o n g m a n y o t h e r o r g a n i s m s . S o m e s t u d i e s o n t h e g e n e t i c p o p u l a t i o n s t r u c t u r e o f t h e A m a z o n t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a ) h a v e a l r e a d y b e e n p e r f o r m e d b y m e a n s o f p r o t e i n s ( T e i x e i r a e t a l . , 1 9 9 6 ; M o u r a e t a l . , 2 0 1 1 ) , a l l o z y m e s ( B o c k e t a l . , 2 0 0 1 ) , m i t o c h o n d r i a l D N A ( m t D N A ) a n d m i c r o s s a t é l i t e s ( S i t e s e t a l . , 1 9 9 9 ; P e a r s e e t a l . , 2 0 0 6 ) . T h e f i r s t s t u d y i n A m a z o n t u r t l e u s i n g t h e a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n o f t r a n s f e r r i n ( a b l o o d p l a s m a i r o n b i n d i n g p r o t e i n ) , s u g g e s t e d a f r e e f l o w o f g e n e s i n s e v e n p o p u l a t i o n s a m p l e s f r o m f i v e g e o g r a p h i c a l a r e a s o f t h e A m a z o n ( T e i x e i r a e t a l . , 1 9 9 6 ) . T h i s f i n d i n g h a s r e c e n t l y b e e n c o n f i r m e d b y M o u r a e t a l . , ( 2 0 1 1 ) w h o w e r e i n v e s t i g a t i n g t h e t e m p o r a l d i s t r i b u t i o n o f t h e t r a n s f e r r i n a l l e l e s ( T f a a n d T f b ) i n t h r e e o f t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o r i g i n a l l y e x a m i n e d b y T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) . T h e a l l o z y m e m a r k e r s u s e d b y B o c k e t a l . ( 2 0 0 1 ) s h o w e d p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e b e t w e e n A m a z o n t u r t l e s a m p l e s c o l l e c t e d i n B r a z i l a n d P e r u . W h i l e t h e D N A m o l e c u l a r m a r k e r s ( n u c l e a r a n d m i t o c h o n d r i a l ) o f t h i s s p e c i e s , a n a l y s e d b y S i t e s e t a l . , ( 1 9 9 9 ) i n s a m p l e s c o l l e c t e d f r o m t w o r i v e r s y s t e m s i n t h e A m a z o n B a s i n ( T a p a j o s a n d A r a g u a i a ) s u g g e s t e d e x t e n s i v e w i t h i n - s y s t e m g e n e f l o w ( u p t o 2 7 5 K m ) b u t v e r y l i t t l e g e n e f l o w b e t w e e n r i v e r s y t e m s ( 2 4 0 0 k m ) . A n o t h e r s t u d y w i t h A m a z o n t u r t l e b a s e d o n a n a l y s i s o f m i t o c h o n d r i a l D N A a n d m i c r o s a t e l l i t e m a r k e r s , f r o m a b r o a d s a m p l i n g i n S o u t h A m e r i c a ( i . e . 1 8 d i f f e r e n t s i t e s i n B r a z i l , C o l o m b i a , P e r u a n d V e n e z u e l a ) s t r o n g l y i n d i c a t e d t h e e x i s t e n c e o f g e n e t i c s t r u c t u r e b e t w e e n p o p u l a t i o n s ( P e a r s e e t a l . , 2 0 0 6 ) . W i t h t h e e x c e p t i o n o f t h e w o r k s b y T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) , B o c k e t a l . , ( 2 0 0 1 ) a n d M o u r a e t a l . , ( 2 0 1 1 ) t h e r e i s p r a c t i c a l l y n o i n f o r m a t i o n o n t h e d i s t r i b u t i o n o f a l l e l e f r e q u e n c i e s a t p o l y m o r p h i c l o c i o f p r o t e i n s a p p l i e d t o t h e i d e n t i f i c a t i o n , c o n s e r v a t i o n a n d m a n a g e m e n t o f n a t u r a l s t o c k s o f t h e A m a z o n t u r t l e ( P . e x p a n s a ) . A m o n g t h e v a r i o u s t y p e s o f b i o l o g i c a l t i s s u e s a s s o u r c e s o f p r o t e i n v a r i a n t s , t h e c i r c u l a t i n g b l o o d p l a s m a h a s a h i g h n u m b e r o f p r o t e i n s ( a p p r o x i m a t e l y 3 0 0 ) ( A n d e r s o n a n d A n d e r s o n , 2 0 0 2 ) , w h i c h c a n b e e x t r a c t e d w i t h r e l a t i v e f a c i l i t y a n d u s e d i n t h e a n a l y s i s o f g e n e t i c v a r i a b i l i t y . T h e n , t h e p r e s e n t s t u d y a i m s t o t e s t t h e p o t e n t i a l o f a l l e l i c f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s o f p l a s m a p r o t e i n s s e p a r a t e d b y m e a n s o f s t a r c h g e l e l e c t r o p h o r e s i s f o r i d e n t i f y i n g A m a z o n t u r t l e s t o c k s . T h i s r e s e a r c h m a y a l s o p r o v i d e a v a l u a b l e c o n t r i b u t i o n t o c o n s e r v a t i o n a n d m a n a g e m e n t o f t h i s s p e c i e s i n t h e r e g i o n . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S S a m p l i n g s i t e s a n d c o l l e c t i o n o f b l o o d s a m p l e s A c a p t u r e p e r m i t f o r c a t c h i n g w i l d A m a z o n t u r t l e ( P . e x p a n s a ) w a s p r o v i d e d b y t h e B r a z i l i a n T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 1 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7

I n s t i t u t e o f E n v i r o n m e n t a n d R e n e w a b l e N a t u r a l R e s o u r c e s ( I B A M A ) t h r o u g h t h e B i o d i v e r s i t y A u t h o r i z a t i o n a n d I n f o r m a t i o n S y s t e m ( S I S B I O L i c e n s e N o . 1 3 0 8 1 - 1 o f 1 9 / 1 2 / 2 0 0 7 ) . I n p o s s e t i o n o f t h i s l e g a l s u p p o r t n i n e t y f i v e h a t c h l i n g s p e c i m e n s o f P . e x p a n s a w e r e c o l l e c t e d f r o m t h r e e g e o g r a p h i c a l a r e a s i n t h e A m a z o n r e g i o n , t o t a l i z i n g t h r e e p o p u l a t i o n s a m p l e s : 1 ) M a r a c a r a n a ( 0 2 º 1 3 S ; 5 8 º 1 5 W ) , R i o U a t u m ã - A M ( 3 0 ) ; 2 ) T r o m b e t a s ( 0 1 ° 2 0 S ; 5 6 ° 4 5 W ) , R i o T r o m b e t a s - P A ( 3 4 ) , a n d 3 ) M o n t e C r i s t o ( 0 4 ° 0 4 S ; 5 5 ° 3 8 W ) , R i o T a p a j ó s - P A ( 3 1 ) ( F i g . 1 ) . W i t h t h e a i d o f 3 m l d i s p o s a b l e s y r i n g e s , b l o o d s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m t h e f e m o r a l a r t e r y a n d p l a c e d i n 5 m l B D v a c u t a i n e r t u b e s , c o n t a i n i n g 0 . 5 m l o f 3 . 8 % s o d i u m c i t r a t e a s a n t i c o a g u l a n t . B l o o d p l a s m a s p e c i m e n s w e r e s e p a r a t e d b y c e n t r i f u g a t i o n a t 3 , 0 0 0 r p m f o r 2 0 m i n u t e s a n d s t o r e d a t - 2 5 º C , u n t i l e l e c t r o p h o r e s i s r u n ( T e i x e i r a e t a l . , 1 9 9 6 ) . A f t e r b l o o d c o l l e c t i o n a l l a n i m a l s w e r e r e t u r n e d t o t h e i r r e s p e c t i v e c o l l e c t i o n s i t e s . E l e c t r o p h o r e s i s p r o c e d u r e s T h e e l e c t r o d e b u f f e r ( 0 . 0 6 M l i t h i u m h y d r o x i d e a n d 0 . 3 0 M b o r i c a c i d ) a n d g e l b u f f e r ( 0 . 0 3 M t r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h a n e a n d 0 . 0 0 5 M c i t r i c a c i d ) c o n t a i n i n g 1 % o f t h e e l e c t r o d e b u f f e r , w e r e p r e p a r e d a c c o r d i n g t o R i d g w a y e t a l . , ( 1 9 7 0 ) . T h e b u f f e r s w e r e a d j u s t e d t o p H 8 . 2 0 w i t h 1 M l i t h i u m h y d r o x i d e . S i g m a s t a r c h g e l s a t a c o n c e n t r a t i o n o f 8 . 3 5 % w e r e m a d e u p i n 3 4 0 m l o f t h e g e l b u f f e r . B y m e a n s o f a c o n t i n u o u s T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 1 9 F i g . 1 . T h e g e o g r a p h i c s o u r c e s w h e r e t h e t h r e e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P . e x p a n s a , w e r e c a p t u r e d i n t h e A m a z o n r e g i o n : 1 ) M a r a c a r a n a , R i o U a t u m ã ; 2 ) T r o m b e t a s , R i o T r o m b e t a s ; a n d 3 ) M o n t e C r i s t o , R i o T a p a j ó s . M a p m o d i f i e d f r o m T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) .

s t i r r i n g p r o c e s s p e r f o r m e d w i t h a s i m p l e m e c h a n i c a l s t i r r e r , t h e s t a r c h m i x e d i n b u f f e r w a s c o o k e d u p t o b o i l i n g p o i n t ( a p p r o x i m a t e l y 9 0 ° C ) i n a 2 - l i t e r r o u n d - b o t t o m e d f l a s k s u p p o r t e d b y a h e a t i n g m a n t l e . T h e n , t h e c o o k e d g e l w a s d e g a s s e d w i t h t h e h e l p o f a v a c u u m p u m p . T h e s o l u b l e p r o t e i n s u p e r n a t a n t s w e r e a b s o r b e d i n t o 5 m m x 8 m m r e c t a n g u l a r f i l t e r p a p e r s ( W h a t m a n 3 M M o r 1 7 M M ) , w h i c h w e r e t h e n i n s e r t e d o n t h e g e l s . T h e f i l t e r p a p e r W h a t m a n 3 M M w a s u s e d f o r a n a l y s i s o f e s t e r a s e ( E S T ) , p h o s p h o g l u c o m u t a s e ( P G M ) , m a l a t e d e h y d r o g e n a s e ( M D H ) a n d s u p e r o x i d e d i s m u t a s e ( S O D ) ; a n d W h a t m a n 1 7 M M f o r a n a l y s i s o f t r a n s f e r r i n ( T f ) , a l b u m i n ( A l b ) a n d g e n e r a l p r o t e i n ( G P ) . I n t h e a n a l y s e s o f T f , A l b a n d G P , t h e g e l s w e r e s u b j e c t e d t o a p o t e n t i a l o f 1 2 0 V d u r i n g t h e f i r s t 4 5 m i n u t e s . T h e f i l t e r p a p e r i n s e r t s w e r e r e m o v e d a n d t h e e l e c t r o p h o r e t i c r u n c o n t i n u e d a t 2 5 0 V f o r a b o u t f o u r h o u r s , u n t i l t h e b o r a t e l i n e h a d m o v e d a b o u t 1 0 c m p a s t t h e i n s e r t l i n e . F o r t h e a n a l y s e s o f E S T , P G M , M D H a n d S O D , t h e g e l s w e r e s u b j e c t e d t o a p o t e n t i a l o f 1 5 0 V f o r o n e h o u r . T h e f i l t e r p a p e r i n s e r t s w e r e r e m o v e d a n d t h e e l e c t r o p h o r e t i c r u n c o n t i n u e d f o r a b o u t f i v e h o u r s , u n t i l t h e b o r a t e l i n e h a d m o v e d a b o u t 1 0 c m p a s t t h e i n s e r t l i n e . T h e a l l e l e s w e r e c l a s s i f i e d a l p h a b e t i c a l l y a c c o r d i n g t o t h e i r d e c r e a s i n g e l e c t r o p h o r e t i c m o b i l i t i e s t o w a r d s t h e a n o d e . I n t h e a n a l y s e s o f T f , A l b , P G , M D H a n d P G M , c o n t r o l p l a s m a o f k n o w n g e n o t y p e s w e r e s e l e c t e d a n d i n t e r s p e r s e d a l o n g t h e g e l s i n o r d e r t o g e n o t y p e t h e s p e c i m e n s m o r e a c c u r a t e l y . P r o t e i n s y s t e m s t a i n i n g T r a n s f e r r i n ( T f ) T h e d i f f e r e n t i a l p r e c i p i t a t i o n m e t h o d w i t h r i v a n o l ( 2 - e t h o x y - 6 , 9 - d i a m i n o a c r i d i n e l a c t a t e ) w a s u s e d f o r i s o l a t i o n o f p l a s m a t r a n s f e r r i n p r i o r t o e l e c t r o p h o r e s i s r u n a s d e s c r i b e d b y J a m i e s o n a n d T u r n e r ( 1 9 7 8 ) w i t h m o d i f i c a t i o n s o f T e i x e i r a e t a l . , . ( 1 9 9 6 ) . T h e n , p l a s m a s a m p l e s w e r e t r e a t e d w i t h 2 % r i v a n o l s o l u t i o n a t a r a t i o o f 1 : 1 . F o r t h e r e v e l a t i o n o f t r a n s f e r r i n m o l e c u l e s t h e g e l s w e r e s t a i n e d w i t h 1 % A m i d o B l a c k , d i l u t e d i n a s o l u t i o n p r e p a r e d i n 5 : 5 : 1 p a r t s o f w a t e r , m e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d , r e s p e c t i v e l y f o r f i v e m i n u t e s , a c c o r d i n g t o J a m i e s o n a n d T u r n e r ( 1 9 7 8 ) . F i n a l l y , t h e g e l s w e r e w a s h e d b y s u c c e s s i v e i m m e r s i o n s i n p l a s t i c v e s s e l s c o n t a i n i n g t h e a f o r e m e n t i o n e d s o l u t i o n ( w a t e r , m e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d ) f o r a p p r o x i m a t e l y 1 5 h o u r s ( T e i x e i r a e t a l . , 1 9 9 6 ) . T h e T f l o c u s a l l e l e s w e r e i d e n t i f i e d a n d c l a s s i f i e d a c c o r d i n g t o T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) . A l b u m i n ( A l b ) G i v e n t h a t , u s u a l l y t h e p r o t e i n s u p e r n a t a n t o b t a i n e d b y t h e d i f f e r e n t i a l p r e c i p i t a t i o n m e t h o d w i t h r i v a n o l , c o n t a i n s s i g n i f i c a n t a m o u n t s o f a l b u m i n ( B o e t t c h e r e t a l . , 1 9 5 8 ) t h i s m e t h o d w a s a l s o t e s t e d t o i s o l a t e a l b u m i n m o l e c u l e s . T h u s , p l a s m a s a m p l e s w e r e t r e a t e d w i t h 1 % r i v a n o l s o l u t i o n a t a r a t i o o f 1 : 1 ( J a m i e s o n a n d T u r n e r , 1 9 7 8 ) w i t h m o d i f i c a t i o n s . F o r v i s u a l i z a t i o n o f t h e a l b u m i n m o l e c u l e s , t h e g e l s w e r e s t a i n e d w i t h 1 % A m i d o B l a c k f o l l o w i n g t h e p r o c e d u r e o f J a m i e s o n a n d T u r n e r ( 1 9 7 8 ) u s e d f o r s t a i n i n g t r a n s f e r r i n , e x c e p t f o r t h e s t a i n i n g t i m e t h a t l a s t e d f r o m f i v e t o s e v e n m i n u t e s . T h e d i s t a i n i n g p r o c e d u r e w a s t h e s a m e a s t h a t p r e v i o u s l y d e s c r i b e d f o r t r a n s f e r r i n . G e n e r a l p r o t e i n ( G P ) F o r t h e r e v e l a t i o n o f b a n d s i n t h e g e n e r a l p r o t e i n p a t t e r n s , t h e g e l s w e r e s t a i n e d w i t h t h e s a m e m e t h o d o l o g y d e s c r i b e d p r e v i o u s l y f o r t r a n s f e r r i n a n d a l b u m i n ( i . e . 1 % A m i d o B l a c k ) . N o m e n c l a t u r e a n d e n z y m e s t a i n i n g T h e e n z y m e s w e r e c l a s s i f i e d a c c o r d i n g t o t h e N o m e n c l a t u r e C o m m i t t e e o f t h e I n t e r n a t i o n a l U n i o n o f B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y ( N C - I U B M B . 2 0 0 9 ) , w h e r e e a c h e n z y m e n a m e i s w r i t t e n i n f u l l a n d e n z y m e a b b r e v i a t i o n a n d e n z y m e c o m m i s s i o n n u m b e r ( E C n u m b e r ) i n p a r e n t h e s e s , a s f o l l o w : e s t e r a s e ( E S T - E C 3 . 1 . 1 . 1 ) , p h o s p h o g l u c o m u t a s e ( P G M - E C 2 . 7 . 5 . 1 ) , m a l a t e d e h y d r o g e n a s e ( M D H - E C 1 . 1 . 1 . 3 7 ) a n d s u p e r o x i d e d i s m u t a s e ( S O D - E C 3 . 1 5 . 1 . 1 ) . T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 2 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7

I n o r d e r t o v i s u a l i z e i s o z y m e b a n d s i n t h e z y m o g r a m s , t h e s t a r c h g e l s w e r e i m m e r s e d a n d i n c u b a t e d i n s t a i n i n g s o l u t i o n s c o n t a i n i n g c h e m i c a l c o m p o n e n t s ( s u b s t r a t e s , c o e n z y m e s , e l e c t r o n c a r r i e r s , b u f f e r s o l u t i o n s , a n d t e t r a z o l i u m s a l t s ) n e c e s s a r y t o d e - t e c t e n z y m a t i c a c t i v i t i e s a s d e s c r i b e d b e l o w f o r e a c h e n z y m e s y s t e m t e s t e d . E s t e r a s e ( E S T E C 3 . 1 . 1 . 1 ) F o r t h e r e v e l a t i o n o f e s t e r a s e i s o z y m e p a t t e r n i n t h e g e l s t h e f o l l o w i n g s t a i n i n g s o l u t i o n w a s u s e d : 3 m l o f 1 % α - n a p h t h y l a c e t a t e , d i s s o l v e d i n a c e t o n e a t 5 0 % , 8 7 m l o f d i s t i l l e d w a t e r , 1 0 0 m g o f t h e d y e f a s t b l u e R R s a l t a n d 1 0 m l o f 0 . 5 M T r i s H C l p H 7 . 1 ( S h a w a n d P r a s a d , 1 9 7 0 ) . T h e g e l s l i c e s w e r e p l a c e d i n p l a s t i c v e s s e l s , i m m e r s e d i n t h e a b o v e s o l u t i o n a n d l a t e r i n c u b a t e d a t 3 7 ° C i n a l a b o r a t o r y o v e n f o r a b o u t 3 0 m i n u t e s o r u n t i l t h e d e v e l o p m e n t o f t h e b a n d s . T h e s t a i n i n g s o l u t i o n w a s t h e n d i s c a r d e d a n d t h e g e l s , a f t e r b e i n g w a s h e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r , w e r e f i x e d i n a 1 0 % g l y c e r o l s o l u t i o n p r e p a r e d i n 5 : 5 : 1 p a r t s o f w a t e r , m e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d , r e s p e c t i v e l y . P h o s p h o g l u c o m u t a s e ( P G M E C 5 . 4 . 2 . 2 ) T h e s t a i n i n g r e c i p e u s e d f o r r e v e a l i n g t h e p h o s p h o g l u c o m u t a s e i s o z y m e p a t t e r n s i n t h e g e l s w a s t h a t r e c o m m e n d e d b y A l f e n a s e t a l . , ( 1 9 9 1 ) w i t h m o d i f i c a t i o n s : 1 4 m g o f N A D P + , 2 . 8 m g P M S , 1 4 m g M T T , 2 8 m g M g C l 2 , 7 0 m g o f g l u c o s e - 1 - p h o s p h a t e , 7 0 m l o f 0 . 2 M T r i s - H C l p H 8 . 0 a n d 2 8 m l o f g l u c o s e - 6 - p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e ( G 6 P D H ) , w h i c h w a s a d d e d l a s t . T h e g e l s w e r e p l a c e d i n p l a s t i c v e s s e l s c o n t a i n i n g t h e s t a i n i n g s o l u t i o n a n d t h e n i n c u b a t e d i n a n o v e n a t 3 7 ° C f o r a b o u t t w o h o u r s , o r u n t i l t h e d e v e l o p m e n t o f t h e b a n d s . T h e s t a i n i n g s o l u t i o n w a s d i s c a r d e d a n d t h e g e l s a f t e r b e i n g w a s h e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r w e r e f i x e d i n a 1 0 % a q u e o u s g l y c e r o l s o l u t i o n . M a l a t e d e h y d r o g e n a s e ( M D H E C 1 . 1 . 1 . 3 7 ) T h e m a l a t e d e h y d r o g e n a s e i s o z y m e p a t t e r n s w e r e r e v e a l e d u s i n g t h e f o l l o w i n g s t a i n i n g s o l u t i o n : 5 m g o f N A D + , 5 m g P M S , 1 0 m g M T T , 2 5 m L o f 0 . 5 M m a l i c a c i d p H 8 . 0 a n d 5 0 m L o f 0 . 1 M T r i s H C l p H 8 . 5 ( A l l e n d o r f e t a l . , 1 9 7 7 ) w i t h m o d i f i c a t i o n s . T h e g e l s w e r e i m m e r s e d i n t o t h i s s o l u t i o n i n p l a s t i c v e s s e l s a n d t h e n i n c u b a t e d i n a n o v e n a t 3 7 ° C f o r a b o u t o n e h o u r , o r u n t i l t h e d e v e l o p m e n t o f t h e b a n d s . T h e s t a i n i n g s o l u t i o n w a s d i s c a r d e d a n d t h e g e l s a f t e r b e i n g w a s h e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r w e r e f i x e d i n a 1 0 % g l y c e r o l s o l u t i o n p r e p a r e d i n 5 : 5 : 1 p a r t s o f w a t e r , m e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d , r e s p e c t i v e l y . S u p e r o x i d e d i s m u t a s e ( S O D E C 1 . 1 5 . 1 . 1 ) T h e f o l l o w i n g s t a i n i n g s o l u t i o n w a s u s e d f o r v i s u a l i z i n g t h e s u p e r o x i d e d i s m u t a s e p a t t e r n i n t h e g e l s : 2 4 m g M T T p l u s 7 m g P M S d i s s o l v e d i n 7 0 m l o f 0 . 0 5 M T r i s - H C l p H 7 . 0 ( A l l e n d o r f e t a l . , 1 9 7 7 ) w i t h m o d i f i c a t i o n s . T h e g e l s w e r e i m m e r s e d i n t h e a f o r e m e n t i o n e d s o l u t i o n , i n p l a s t i c v e s s e l s a n d t h e n i n c u b a t e d a t 3 7 ° C i n t h e d a r k f o r a p p r o x i m a t e l y 2 h o u r s , o r u n t i l t h e d e v e l o p m e n t o f a c h r o m a t i c b a n d s . T h e s t a i n i n g s o l u t i o n w a s d i s c a r d e d a n d t h e g e l s w e r e t h e n w a s h e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r a n d f i x e d i n a 1 0 % g l y c e r o l s o l u t i o n p r e p a r e d i n 5 : 5 : 1 p a r t s o f d i s t i l l e d w a t e r , m e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d , r e s p e c t i v e l y . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s P o p u l a t i o n g e n e t i c a n a l y s e s o f t h e A m a z o n t u r t l e w e r e p e r f o r m e d u s i n g t h e f o l l o w i n g s t a t i s t i c a l p r o g r a m m e s : B i o s y s - 2 ( S w o f f o r d e t a l . , 1 9 9 7 ) , T F P G A 1 . 3 ( M i l l e r , 1 9 9 7 ) a n d P O P G E N E V e r s i o n 1 . 3 2 ( Y e h e t a l . , 1 9 9 9 ) . T h e l i s t o f s t a t i s t i c a l a n a l y s e s i s p r e s e n t e d b e l o w , a n d t h e p r o g r a m m e s u s e d i n e a c h o n e o f t h e m a r e s h o w n i n p a r e n t h e s e s : 1 ) l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) a n d c h i - s q u a r e ( X 2 ) t e s t s a s s u m i n g t h e H a r d y - W e i n b e r g e q u i l i b r i u m ( P O P G E N E 1 . 3 2 a n d T F P G A 1 . 3 ) ; 2 ) e s t i m a t i o n o f a l l e l e f r e q u e n c i e s , a v e r a g e h e t e r o z y g o s i t y , p r o p o r t i o n o f p o l y m o r p h i c l o c i a n d m e a n n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s ( P O P G E N E 1 . 3 2 a n d T F P G A 1 . 3 ) ; 3 ) e s t i m a t i o n o f g e n e t i c d i s t a n c e s a c c o r d i n g t o R o g e r s ( 1 9 7 2 ) a s m o d i f i e d b y W r i g h t ( 1 9 7 8 ) ( T F P G A 1 . 3 ) ; 4 ) c l u s t e r a n a l y s i s o f g e n e t i c d i s t a n c e s u s i n g t h e U n w e i g h t e d P a i r - G r o u p M e t h o d w i t h A r i t h m e t i c T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 2 1

A v e r a g e ( U P G M A ) d e n d r o g r a m ( T F P G A 1 . 3 ) ; 5 ) e x a c t t e s t s f o r p o p u l a t i o n d i f f e r e n t i a t i o n ( R a y m o n d a n d R o u s s e t , 1 9 9 5 ) f o r m a k i n g p a i r w i s e p o p u l a t i o n c o m p a r i s o n s ( T F P G A 1 . 3 ) ; 6 ) F - s t a t i s t i c s ( F I S , F I T a n d F S T ) o f W r i g h t ( 1 9 7 8 ) a n d e s t i m a t e d g e n e f l o w ( N m ) b a s e d o n N e i ( 1 9 7 8 ) a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n p a i r s o f t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s ( P O P G E N E 1 . 3 2 ) ; 7 ) l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m a n a l y s i s b e t w e e n p a i r s o f p o l y m o r p h i c l o c i ( B I O S Y S 2 ) ; a n d 8 ) h o m o g e n e i t y t e s t f o r i n v e s t i g a t i n g a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a m o n g p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n p a i r s o f t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s ( B I O S Y S 2 a n d P O P G E N E 1 . 3 2 ) . F u t h e r m o r e , t h e s i g n i f i c a n c e o f F S T v a l u e s b e t w e e n p o p u l a t i o n s a m p l e s w a s t e s t e d u s i n g t h e c h i - s q u a r e c o n t i n g e n c y t e s t o f W o r k m a n a n d N i s w a n d e r ( 1 9 7 0 ) . R E S U L T S E l e c t r o p h o r e t i c a n a l y s e s o f t h r e e p r o t e i n a n d f o u r e n z y m e s y s t e m s f r o m b l o o d p l a s m a s p e c i m e n s o f t h r e e A m a z o n t u r t l e p o p u l a t i o n s a m p l e s : 1 ) M a r a c a r a n a , R i o U a t u m ã - A M ; 2 ) T r o m b e t a s , R i o T r o m b e t a s - P A ; a n d 3 ) M o n t e C r i s t o , R i o T a p a j ó s - P A r e v e a l e d z o n e s o f e l e c t r o p h o r e t i c a c t i v i t i e s i n t h e g e l s p r e s u m a b l y e n c o d e d b y 1 1 l o c i ( T a b l e 1 ) . O f t h e s e l o c i , s e v e n p r o v e d t o b e m o n o m o r p h i c ( G P - 1 , G P - 2 , E S T - 1 , E S T - 2 , P G M - 1 , S O D - 1 a n d S O D - 2 ) a n d f o u r p o l y m o r p h i c ( T f , A l b , M D H - 1 a n d P G M - 2 ) . D e t a i l e d d e s c r i p t i o n s o f t h e e l e c t r o p h o r e g r a m s a n d z y m o g r a m s f o l l o w b e l o w . P r o t e i n s y s t e m s T r a n s f e r r i n a ( T f ) A s p r e v i o u s l y r e p o r t e d b y T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) , t h e l o c u s T f w a s f o u n d t o b e p o l y m o r p h i c r e v e a l i n g e l e c t r o p h o r e t i c p a t t e r n s w i t h t h r e e t h e o r e t i c a l l y e x p e c t e d g e n o t y p e s ( T f a a , T f a b a n d T f b b ) , p r e s u m a b l y e n c o d e d b y c o d o m i n a n t a l l e l e s ( T f a a n d T f b ) . T h e s a m p l e s s h o w e d a g o o d g e n e t i c b a l a n c e a t t h e i n t r a a n d i n t e r - p o p u l a t i o n l e v e l s , a s r e v e a l e d b y c h i - s q u a r e ( X 2 ) a n d l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) t e s t s ( T a b l e 2 ) . H o m o g e n e i t y t e s t f o r T f a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n p a i r s o f p o p u l a t i o n s a m p l e s r e v e a l e d n o s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s ( T a b l e 3 ) . A l b u m i n a ( A l b ) T h e e l e c t r o p h o r e g r a m s o f a l b u m i n r e v e a l e d a p o l y m o r p h i s m w i t h t h e p r e s e n c e o f t w o g e n o t y p e s ( A l b a a a n d A l b a b ) p r e s u m a b l y e n c o d e d b y t w o c o d o m i n a n t T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 2 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T a b l e 1 . A l l e l e f r e q u e n c i e s a t 1 1 p r o t e i n a n d i s o z y m e l o c i e x a m i n e d i n t h e b l o o d p l a s m a f r o m t h r e e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P o d o c n e m i s e x p a n s a . P o p u l a t i o n s a m p l e s L o c u s a n d a l l e l e M a r a c a r a n a * N = 3 0 T r o m b e t a s * N = 3 4 M o n t e C r i s t o * N = 3 1 T o t a l N = 9 5 T f a 0 . 7 3 3 3 0 . 8 0 8 8 0 . 7 9 0 3 0 . 7 7 8 9 T f b 0 . 2 6 6 7 0 . 1 9 1 2 0 . 2 0 9 7 0 . 2 2 1 1 A l b a 0 . 9 1 6 7 0 . 9 2 6 5 0 . 9 5 1 6 0 . 9 3 1 6 A l b b 0 . 0 8 3 3 0 . 0 7 3 5 0 . 0 4 8 4 0 . 0 6 8 4 G P - 1 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 G P - 2 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 E S T - 1 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 E S T - 2 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 S O D - 1 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 S O D - 2 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 M D H a 0 . 0 0 0 0 . 0 0 0 0 . 2 9 0 3 0 . 0 9 4 7 M D H b 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 0 . 7 0 9 7 0 . 9 0 5 3 P G M - 1 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 P G M - 2 a 0 . 7 0 3 7 0 . 7 2 7 3 0 . 4 4 2 3 0 . 6 3 9 5 P G M - 2 b 0 . 2 9 6 3 0 . 2 7 2 7 0 . 5 5 7 7 0 . 3 6 0 5 * T h r e e , o n e a n d f i v e s p e c i m e n s w e r e n o t g e n o t y p e d a t t h e l o c u s P G M - 2 i n M a r a c a r a n a , R i o U a t u m ã ; T r o m b e t a s , R i o T r o m b e t a s a n d M o n t e C r i s t o , R i o T a p a j ó s , r e s p e c t i v e l y ( s e e T a b l e 2 ) .

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 2 3 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 P o p u l a t i o n s a m p l e s T o t a l N = 9 5 M a r a c a r a n a N = 3 0 T r o m b e t a s N = 3 4 M o n t e C r i s t o N = 3 1 T f g e n o t y p e s T f a a 1 6 ( 1 6 . 0 3 3 9 ) 2 2 ( 2 2 . 1 6 4 2 ) 2 0 ( 1 9 . 2 7 8 7 ) 5 8 ( 5 7 . 5 5 5 6 ) T f a b 1 2 ( 1 1 . 9 3 2 2 ) 1 1 ( 1 0 . 6 7 1 6 ) 9 ( 1 0 . 4 4 2 6 ) 3 2 ( 3 2 . 8 8 8 9 ) T f b b 2 ( 2 , 0 3 3 9 ) 1 ( 1 . 1 6 4 2 ) 2 ( 1 . 2 7 8 7 ) 5 ( 4 . 5 5 5 6 ) T f a l l e l e f r e q u e n c i e s T f a 0 . 7 3 3 3 0 . 8 0 8 8 0 . 7 9 0 3 0 . 7 7 8 9 T f b 0 . 2 6 6 7 0 . 1 9 1 2 0 . 2 0 9 7 0 . 2 2 1 1 H a r d y - W e i n b e r g t e s t d . f . 1 1 1 1 X 2 0 . 0 0 1 0 2 2 0 . 0 3 4 5 0 . 6 3 3 2 0 . 0 7 0 8 P 0 . 9 7 4 5 0 . 8 5 2 7 0 . 4 2 6 2 0 . 7 9 0 2 G 0 . 0 0 1 0 2 4 0 . 0 3 5 5 0 . 5 8 2 4 0 . 0 6 9 7 P 0 . 9 7 4 5 0 . 8 5 0 4 0 . 4 4 5 4 0 . 7 9 1 8 A l b g e n o t y p e s A l b a a 2 5 ( 2 5 . 1 6 9 5 ) 2 9 ( 2 9 . 1 4 9 3 ) 2 8 ( 2 8 . 0 4 9 2 ) 8 2 ( 8 2 . 4 1 2 7 ) A l b a b 5 ( 4 . 6 6 1 0 ) 5 ( 4 . 7 0 1 5 ) 3 ( 2 . 9 0 1 6 ) 1 3 ( 1 2 . 1 7 4 6 ) A l b b b 0 ( 0 . 1 6 9 5 ) 0 ( 0 . 1 4 9 3 ) 0 ( 0 . 0 9 2 ) 0 ( 0 . 4 1 2 7 ) A l b a l l e l e f r e q u e n c i e s A l b a 0 . 9 1 6 7 0 . 9 2 6 5 0 . 9 5 1 6 0 . 9 3 1 6 A l b b 0 . 0 8 3 3 0 . 0 7 3 5 0 . 0 4 8 4 0 . 0 6 8 4 H a r d y - W e i n b e r g t e s t d . f . 1 1 1 1 X 2 0 . 1 9 5 3 0 . 1 6 9 0 0 . 0 5 2 6 0 . 4 7 0 7 P 0 . 6 5 8 6 0 . 6 8 1 0 0 . 8 1 8 6 0 . 4 9 2 6 G 0 . 3 6 4 2 0 . 3 1 7 8 0 . 1 0 1 7 0 . 8 8 2 2 P 0 . 5 4 6 2 0 . 5 7 2 9 0 . 7 4 9 7 0 . 3 4 7 6 M D H g e n o t y p e s M D H a a 0 0 9 ( 2 . 5 0 8 2 ) 9 ( 0 . 8 0 9 5 ) M D H a b 0 0 0 ( 1 2 . 9 8 3 6 ) 0 ( 1 6 . 3 8 1 0 ) M D H b b 3 0 3 4 2 2 ( 1 5 . 5 0 8 2 ) 8 6 ( 7 7 . 8 0 9 5 ) M D H a l l e l e f r e q u e n c i e s M D H a 0 0 0 . 2 9 0 3 0 . 0 9 4 7 M D H b 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 0 . 7 0 9 7 0 . 9 0 5 3 H a r d y - W e i n b e r g t e s t d . f . - - 1 1 X 2 - - 3 2 . 5 0 3 4 1 0 0 . 1 1 1 4 P - - 0 . 0 0 0 0 * * 0 . 0 0 0 0 * * G - - 3 8 . 3 8 3 5 6 0 . 5 6 8 0 P - - 0 . 0 0 0 0 * * 0 . 0 0 0 0 * * T a b l e 2 . G e n o t y p e a n d a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a t f o u r p o l y m o r p h i c l o c i i n t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s . C h i - s q u a r e ( X 2 ) a n d l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) t e s t s w e r e a p p l i e d a s s u m i n g H a r d y - W e i n b e r g e q u i l i b r i u m . E x p e c t e d n u m b e r s o f g e n o t y p e s a r e s h o w n i n p a r e n t h e s e s . P o p u l a t i o n s a m p l e s T o t a l * N = 8 6 M a r a c a r a n a * N = 2 7 T r o m b e t a s * N = 3 3 M o n t e C r i s t o * N = 2 6 P G M - 2 g e n o t y p e s P G M - 2 a a 1 5 ( 1 3 . 2 6 4 2 ) 1 6 ( 1 7 . 4 5 4 5 ) 5 ( 4 . 9 6 0 8 ) 3 6 ( 3 4 . 4 2 1 1 ) P G M - 2 a b 8 ( 1 1 . 4 7 1 7 ) 1 6 ( 1 3 . 0 9 0 9 ) 1 3 ( 1 3 . 0 7 8 4 ) 3 7 ( 4 0 . 1 5 7 9 ) P G M - 2 b b 4 ( 2 . 2 6 4 2 ) 1 ( 2 . 4 5 4 5 ) 8 ( 7 . 9 6 0 8 ) 1 3 ( 1 1 . 4 2 1 1 )

a l l e l e s ( A l b a a n d A l b b ) a t t h e l o c u s A l b . T h e t h e o r e t i c a l l y e x p e c t e d g e n o t y p e ( A l b b b ) w a s n o t d e t e c t e d i n a n y o f t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s a n a l y s e d . A l l s a m p l e s s h o w e d a g o o d g e n e t i c b a l a n c e a t t h e i n t r a a n d i n t e r - p o p u l a t i o n l e v e l s , a s r e v e a l e d b y t h e c h i - s q u a r e ( X 2 ) a n d l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) t e s t s ( T a b l e 2 ) . H o m o g e n e i t y t e s t f o r A l b a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a m o n g p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n p a i r s o f p o p u l a t i o n s a m p l e s r e v e a l e d n o s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s ( T a b l e 3 ) . G e n e r a l p r o t e i n ( G P ) T w o b a n d s c o m m o n t o a l l s p e c i m e n s w e r e s e e n i n t h e g e l s , i n a z o n e o f e l e c t r o p h o r e t i c a c t i v i t y c l a s s i f i e d a s p o s t - a l b u m i n ( M a n w e l l a n d B a k e r , 1 9 7 0 ) w i t h e l e c t r o p h o r e t i c m i g r a t i o n s i m m e d i a t e l y p r i o r t o a l b u m i n , a n d p r e s u m a b l y e n c o d e d b y t h e f i x e d l o c i ( G P - 1 a n d G P - 2 ) ( T a b l e 1 ) . S o m e a d d i t i o n a l b a n d s w e r e s e e n i n t h e g e l s , b u t t h e s e w e r e t o o w e a k l y o r d i f f u s e l y s t a i n e d f o r b e i n g r e l i a b l y s c o r e d . T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 2 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 P G M - 2 a l l e l e f r e q u e n c i e s P G M - 2 a 0 . 7 0 3 7 0 . 7 2 7 3 0 . 4 4 2 3 0 . 6 3 9 5 P G M - 2 b 0 . 2 9 6 3 0 . 2 7 2 7 0 . 5 5 7 7 0 . 3 6 0 5 H a r d y - W e i n b e r g t e s t d . f . 1 1 1 1 X 2 2 . 6 0 8 6 1 . 4 3 5 9 0 . 0 0 0 9 7 0 . 5 3 9 0 P 0 . 1 0 6 3 0 . 2 3 0 8 0 . 9 7 5 1 0 . 4 6 2 8 G 2 . 4 7 5 2 1 . 6 2 1 6 0 . 0 0 0 9 7 0 . 5 3 5 3 P 0 . 1 1 5 6 0 . 2 0 2 9 0 . 9 7 5 1 0 . 4 6 4 4 d . f . = d e g r e e s o f f r e e d o m ; * T h r e e , o n e a n d f i v e s p e c i m e n s w e r e n o t g e n o t y p e d a t t h e P G M - 2 l o c u s i n M a r a c a r a n a , R i o U a t u m ã ; T r o m b e t a s , R i o T r o m b e t a s a n d M o n t e C r i s t o , R i o T a p a j ó s , r e s p e c t i v e l y ; * * P < 0 . 0 0 1 . T a b l e 3 . T h e a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a t f o u r p o l y m o r p h i c l o c i a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n p a i r s o f t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P o d o c n e m i s e x p a n s a , w e r e a n a l y s e d b y m e a n s o f h o m o g e n e i t y t e s t s . C h i - s q u a r e ( X 2 ) , l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) a n d p r o b a b i l i t y s t a t i s t i c a l v a l u e s w e r e c a l c u l a t e d b y u s i n g c o n t i n g e n c y t a b l e s . P o p u l a t i o n s a m p l e s L o c u s A m o n g s a m p l e s M a r a c a r a n a v s T r o m b e t a s M a r a c a r a n a v s M o n t e C r i s t o T r o m b e t a s v s M o n t e C r i s t o T f X 2 ( 2 ) = 1 . 1 2 4 P = 0 . 5 7 0 G ( 2 ) = 1 . 1 0 5 P = 0 . 5 7 6 X 2 ( 1 ) = 1 . 0 3 7 P = 0 . 3 0 9 G ( 1 ) = 1 . 0 3 5 P = 0 . 3 0 9 X 2 ( 1 ) = 0 . 5 4 6 P = 0 . 4 6 0 G ( 1 ) = 0 . 5 4 7 P = 0 . 4 6 0 X 2 ( 1 ) = 0 . 0 6 9 P = 0 . 7 9 2 G ( 1 ) = 0 . 0 6 9 P = 0 . 7 9 2 A l b X 2 ( 2 ) = 0 . 6 2 8 P = 0 . 7 3 1 G ( 2 ) = 0 . 6 5 6 P = 0 . 7 2 0 X 2 ( 1 ) = 0 . 0 4 2 P = 0 . 8 3 6 G ( 1 ) = 0 . 0 4 2 P = 0 . 8 3 7 X 2 ( 1 ) = 0 . 6 0 8 P = 0 . 4 3 6 G ( 1 ) = 0 . 6 1 3 P = 0 . 4 3 4 X 2 ( 1 ) = 0 . 3 5 5 P = 0 . 5 5 1 G ( 1 ) = 0 . 3 5 9 P = 0 . 5 4 9 M D H X 2 ( 2 ) = 4 1 . 0 5 0 P = 0 . 0 0 0 * * * G ( 2 ) = 4 4 . 3 7 5 P = 0 . 0 0 0 * * * § X 2 ( 1 ) = 2 0 . 4 3 4 P = 0 . 0 0 0 * * * G ( 1 ) = 2 7 . 3 9 2 P = 0 . 0 0 0 * * * X 2 ( 1 ) = 2 2 . 9 1 5 P = 0 . 0 0 0 * * * G ( 1 ) = 2 9 . 8 5 9 P = 0 . 0 0 0 * * * P G M - 2 X 2 ( 2 ) = 1 0 . 3 1 5 P = 0 . 0 0 6 * * G ( 2 ) = 1 0 . 1 1 2 P = 0 . 0 0 6 * * X 2 ( 1 ) = 0 . 0 8 1 P = 0 . 7 7 6 G ( 1 ) = 0 . 0 8 1 P = 0 . 7 7 6 X 2 ( 1 ) = 6 . 3 9 8 P = 0 . 0 1 1 * G ( 1 ) = 6 . 4 6 6 P = 0 . 0 1 1 * X 2 ( 1 ) = 8 . 6 3 4 P = 0 . 0 0 3 * * G ( 1 ) = 8 . 6 8 2 P = 0 . 0 0 3 * * G r a n d t o t a l X 2 ( 8 ) = 5 3 . 1 1 7 P = 0 . 0 0 0 * * * G ( 8 ) = 5 6 . 2 4 8 P = 0 . 0 0 0 * * * * p < 0 . 0 5 ; * * p < 0 . 0 1 o r * * * p < 0 . 0 0 1 ; § f i x e d l o c u s i n t h e s a m p l e s .

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 2 5 E n z y m e s y s t e m s E s t e r a s e ( E S T E C 3 . 1 . 1 . 1 ) T h e e s t e r a s e e n z y m e r e v e a l e d t w o z o n e s o f e l e c t r o p h o r e t i c a c t i v i t y , w i t h a m o n o m o r p h i c i s o z y m e p a t t e r n p r e s u m a b l y e n c o d e d b y t h e s a m e f i x e d l o c i ( E S T - 1 a n d E S T - 2 ) i n a l l A m a z o n t u r t l e s a m p l e s t e s t e d ( T a b l e 1 ) . T h e l o c i ( E S T - 1 a n d E S T - 2 ) w e r e v i s u a l i z e d i n t h e g e l , i n a m o r e c a t h o d i c e l e c t r o p h o r e t i c r e g i o n . T h e l o c u s E S T - 1 w a s w e a k l y s t a i n e d w i t h a n e l e c t r o p h o r e t i c m i g r a t i o n i m m e d i a t e l y a h e a d o f E S T - 2 l o c u s . T h e l o c u s E S T - 2 w a s s t r o n g l y s t a i n e d . P h o s p h o g l u c o m u t a s e ( P G M E C 5 . 4 . 2 . 2 ) T h e p h o s p h o g l u c o m u t a s e z y m o g r a m s h o w e d t w o l o c i ( P G M - 1 a n d P G M - 2 ( F i g . 2 ) . P G M - 1 l o c u s p r o v e d t o b e m o n o m o r p h i c a n d P G M - 2 p o l y m o r p h i c . P G M - 2 s h o w e d t h r e e t h e o r e t i c a l l y e x p e c t e d g e n o t y p e s ( P G M - 2 a a , P G M - 2 a b a n d P G M - 2 b b ) p r e s u m a b l y e n c o d e d b y c o d o m i n a n t a l l e l e s ( P G M - 2 a a n d P G M - 2 b ) . T h e l o c i ( P G M - 1 a n d P G M - 2 ) w e r e d e t e c t e d i n a m o r e c a t h o d i c r e g i o n o f t h e g e l . P G M - 1 s h o w e d a f a s t e r e l e c t r o p h o r e t i c m i g r a t i o n w i t h a s l i g h t l y s t a i n e d b a n d . T h e l o c u s P G M - 2 d e s p i t e s h o w i n g z y m o g r a m b a n d s t h a t c o u l d b e g e n o t y p e d f o r m o s t s p e c i m e n s e x a m i n e d , n i n e s p e c i m e n s c o u l d n o t b e g e n o t y p e d d u e t o t h e l o w r e s o l u t i o n o f t h e b a n d s . A l l s a m p l e s s h o w e d a g o o d g e n e t i c b a l a n c e a t t h e i n t r a a n d i n t e r - p o p u l a t i o n l e v e l s , a s r e v e a l e d b y t h e c h i - s q u a r e ( X 2 ) a n d l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) t e s t s ( T a b l e 2 ) . H o w e v e r , h o m o g e n e i t y t e s t s r e v e a l e d s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d b e t w e e n a l l p a i r w i s e c o m p a r i s o n s m a d e w i t h M o n t e C r i s t o s a m p l e ( T a b l e 3 ) . M a l a t o d e s i d r o g e n a s e ( M D H E C 1 . 1 . 1 . 3 7 ) T h e M D H z i m o g r a m r e v e a l e d a z o n e o f e l e c t r o p h o r e t i c a c t i v i t y l o c a t e d i n t h e m o r e c a t h o d i c r e g i o n o f t h e g e l s , s u p p o s e d l y c o n t r o l l e d b y M D H l o c u s . T h i s l o c u s p r o v e d t o b e p o l y m o r p h i c i n t h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e , w i t h g e n o t y p e s ( M D H a a a n d M D H b b ) p r o d u c e d b y a c t i o n o f c o d o m i n a n t a l l e l e s ( M D H a a n d M D H b ) b u t w i t h t h e a b s e n c e o f t h e o r e t i c a l l y e x p e c t e d g e n o t y p e M D H a b ( F i g . 3 ) . I n p o p u l a t i o n s a m p l e s o f M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s t h i s l o c u s p r o v e d t o b e f i x e d f o r t h e a l l e l e M D H b ( T a b l e 2 ) . A l l e l e M D H a a n d g e n o t y p e M D H a a w e r e d e t e c t e d o n l y i n M o n t e C r i s t o s a m p l e . D u e t o t h e e n o r m o u s d e f i c i e n c y o f h e t e r o z y g o t e s a n d t h e e x c e s s o f h o m o z y g o t e s ( M D H a a ) t h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e a n d t h e t o t a l p o p u l a t i o n s a m p l e a r e n o t i n H a r d y - W e i n b e r g e q u i l i b r i u m , a s s h o w n i n t h e c h i - s q u a r e ( X 2 ) a n d l o g - l i k e l i h o o d r a t i o ( G ) t e s t s ( T a b l e 2 ) . T h e h o m o g e n e i t y t e s t s r e v e a l e d h i g h l e v e l s o f s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g p o p u l a t i o n s a m p l e s a n d a l l p a i r w i s e c o m p a r i s o n s m a d e w i t h M o n t e C r i s t o s a m p l e ( T a b l e 3 ) . S u p e r o x i d e d i s m u t a s e ( S O D E C 1 . 1 5 . 1 . 1 ) T h e s u p e r o x i d e d i s m u t a s e z y m o g r a m r e v e a l e d t w o z o n e s o f e l e c t r o p h o r e t i c a c t i v i t y , w i t h a m o n o m o r p h i c i s o z y m e p a t t e r n p r e s u m a b l y e n c o d e d b y t w o f i x e d l o c i ( S O D - 1 a n d S O D - 2 ) i n a l l s a m p l e s t e s t e d ( T a b l e 1 ) . T h e l o c i ( S O D - 1 a n d S O D - 2 ) w e r e d e t e c t e d i n a m o r e c a t h o d i c r e g i o n o f t h e g e l s . T h e l o c u s S O D - 1 m i g r a t e d s l i g h t l y a h e a d o f t h e S O D - 2 l o c u s . E v e n t u a l l y , i t w a s n o t e d t h e p r e s e n c e o f s a t e l l i t e b a n d s p o s i t i o n e d i n f r o n t o f t h e l o c u s S O D - 1 . L i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m T h e h y p o t h e s i s o f i n d e p e n d e n t s e g r e g a t i o n b e t w e e n p a i r s o f t h e p o l y m o r p h i c l o c i d e t e c t e d i n P . e x p a n s a , w a s t e s t e d b y m e a n s o f t h e c h i - s q u a r e ( X 2 ) t e s t . O f t h e s i x p o s s i b l e c o m b i n a t i o n s b e t w e e n p a i r s o f l o c i , t h e r e w e r e n o s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t T a b l e 4 . L i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m a n a l y s i s b e t w e e n p a i r s o f p o l y m o r p h i c l o c i i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P . e x p a n s a . L o c i c o m p a r e d X 2 d . f P T f a n d A l b 0 . 3 8 1 0 . 5 3 5 3 T f a n d M D H 0 . 7 6 1 0 . 3 8 3 6 T f a n d P G M - 2 0 . 2 1 1 0 . 6 5 0 5 A l b a n d M D H 2 . 9 8 1 0 . 0 8 4 1 A l b a n d P G M - 2 0 . 9 6 1 0 . 3 2 6 1 M D H a n d P G M - 2 2 . 0 3 1 0 . 1 5 3 8

3 2 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 d i f f e r e n c e s ( T a b l e 4 ) . M e a s u r e s o f g e n e t i c d i v e r s i t y T h e p r o p o r t i o n o f p o l y m o r p h i c l o c i ( P ) w h e n c a l c u l a t e d b y u s i n g t h e 0 . 9 5 c r i t e r i o n ( i . e . t h e c o m m o n a l l e l e w i t h a f r e q u e n c y e q u a l t o o r l e s s t h a n 0 . 9 5 ) , s h o w e d a P o f 2 7 . 2 7 % f o r t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f T r o m b e t a s a n d M a r a c a r a n a , a n d o f 3 6 . 3 6 % f o r M o n t e C r i s t o a n d t o t a l s a m p l e ( T a b l e 5 ) . T h e h i g h e s t P v a l u e s p r e s e n t e d b y M o n t e C r i s t o a n d t o t a l p o p u l a t i o n s a m p l e s w e r e d u e t o t h e p o l y m o r p i s m a t t h e M D H l o c u s d e t e c t e d o n l y i n t h e M o n t e C r i s t o s a m p l e . T h e a v e r a g e n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s w a s 1 . 2 7 a n d i n M o n t e C r i s t o 1 . 3 6 . T h e a v e r a g e o b s e r v e d h e t e r o z y g o s i t y ( H o ) i n t h e M a r a c a r a n a p o p u l a t i o n s a m p l e w a s 0 . 0 7 8 5 , T r o m b e t a s 0 . 0 8 6 9 a n d M o n t e C r i s t o 0 . 0 7 7 1 . T h e a v e r a g e e x p e c t e d h e t e r o z y g o s i t y ( H e ) i n t h e M a r a c a r a n a p o p u l a t i o n s a m p l e w a s 0 . 0 8 7 4 , T r o m b e t a s 0 . 0 7 6 6 a n d M o n t e C r i s t o 0 . 1 2 1 1 . A s o n e c a n s e e , ( H e ) v a l u e f o r t h e M o n t e C r i s t o s a m p l e w a s m u c h h i g h e r a s c o m p a r e d t o t h e o t h e r t w o s a m p l e s . G e n e t i c s t r u c t u r e T h e e s t i m a t e s o f p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s p e r f o r m e d b y u s i n g W r i g h t ' s F s t a t i s t i c s s h o w e d a v e r a g e v a l u e s o f 0 . 1 3 4 7 a n d 0 . 1 9 1 2 f o r F I S a n d F I T , r e s p e c t i v e l y . T h e A l b l o c u s w a s t h e o n l y o n e t o s h o w n e g a t i v e v a l u e s f o r F I S a n d F I T , d u e t o t h e s l i g h t e x c e s s o f h e t e r o z y g o u s i n d i v i d u a l s i n t h e s a m p l e s . T h e a v e r a g e v a l u e o f F S T w a s 0 . 0 6 5 2 a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s ( T a b l e 6 ) . M a r a c a r a n a v s T r o m b e t a s s a m p l e s s h o w e d a n a v e r a g e v a l u e o f F S T = 0 . 0 0 3 5 , w h e r e a s M o n t e C r i s t o v s M a r a c a r a n a a n d M o n t e C r i s t o v s T r o m b e t a s , r e v e a l e d a v e r a g e F S T v a l u e s = 0 . 0 6 1 a n d 0 . 0 6 6 , r e s p e c t i v e l y ( T a b l e 7 ) . A l l p a i r w i s e c o m p a r i s o n s o f F S T v a l u e s m a d e w i t h M o n t e C r i s t o s a m p l e w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m z e r o ( P < 0 . 0 0 1 ) . G e n e f l o w e s t i m a t i o n e x p r e s s e d a s n u m b e r o f m i g r a n t s p e r g e n e r a t i o n ( N m ) a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s w a s 3 . 5 8 ( T a b l e 6 ) . C o r r o b o r a t e d b y t h e r e s u l t s o b t a i n e d f r o m h o m o g e n e i t y t e s t s ( T a b l e 3 ) , t h e p a i r w i s e c o m p a r i s o n s p e r f o r m e d b y m e a n s o f e x a c t t e s t s f o r p o p u l a t i o n F i g . 2 . Z y m o g r a m o f p h o s p h o g l u c o m u t a s e s h o w i n g t h e m o n o m o r p h i c l o c u s P G M - 1 , a n d t h e p o l y m o r p h i c l o c u s P G M - 2 i n t h e b l o o d p l a s m a o f P . e x p a n s a . T h e P G M - 2 g e n o t y p e s f r o m l e f t t o r i g h t a r e : P G M - 2 a a ( l a n e s 3 , 5 , 6 a n d 9 ) ; P G M - 2 a b ( l a n e s 1 , 2 , 7 a n d 8 ) ; P G M - 2 b b ( l a n e 4 ) . F i g . 3 . Z y m o g r a m o f m a l a t e d e h y d r o g e n a s e s h o w i n g t h e p o l y m o r p h i s m a t t h e l o c u s M D H i n t h e b l o o d p l a s m a o f P . e x p a n s a . T h e g e n o t y p e s f r o m l e f t t o r i g h t a r e : M D H b b ( l a n e s 1 , 2 , 4 , 5 , 6 a n d 8 ) ; M D H a a ( l a n e s 3 , 7 a n d 9 ) .

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 2 7 d i f f e r e n t i a t i o n r e v e a l e d h i g h s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n a l l c o m p a r i s o n s m a d e w i t h M o n t e C r i s t o s a m p l e ( T a b l e 7 ) . G e n e t i c d i s t a n c e T h e R o g e r s ( 1 9 7 2 ) g e n e t i c d i s t a n c e m o d i f i e d b y W r i g h t ( 1 9 7 8 ) r e v e a l e d t h e l o w e s t d i s t a n c e b e t w e e n M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s p o p u l a t i o n s a m p l e s , u n l i k e t h e h i g h e r v a l u e s d e t e c t e d b e t w e e n t h e s e s a m p l e s a n d M o n t e C r i s t o ( T a b l e 8 ) , a s i l l u s t r a t e d b y t h e U P G M A d e n d r o g r a m m e t h o d ( F i g . 4 ) . T h e i n t e r n a l s u p p o r t v a l u e s o f t h e n o d e s o b t a i n e d b y b o o t s t r a p m e t h o d s s h o w e d a l o w n o d e b o o t s t r a p v a l u e o f 2 7 . 2 7 % b e t w e e n M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s s a m p l e s . A m a x i m u m b o o t s t r a p v a l u e o f 1 0 0 % w a s f o u n d i n t h e n o d e t h a t i n c l u d e s t h e s a m p l e s M a r a c a r a n a , T r o m b e t a s a n d M o n t e C r i s t o . D I S C U S S I O N L i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m I n p o p u l a t i o n g e n e t i c s t u d i e s t y p i c a l l y u s i n g a s y s t e m o f m u l t i p l e p o l y m o r p h i c g e n e l o c i , i t i s n e c e s s a r y t o s u b j e c t t h e s e l o c i t o t h e t e s t o f l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m , s i n c e g e n e t i c c o a d a p t a t i o n m a y e x i s t b e t w e e n s o m e a l l e l e s , b u t n o t b e t w e e n o t h e r s w i t h i n t h e s a m e p o p u l a t i o n . I n t h i s c i r c u m s t a n c e , c e r t a i n a l l e l e s o f a g i v e n l o c u s c a n a l s o b e c o a d a p t e d w i t h o t h e r s o f d i s t i n c t l o c i ( A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ; A l l e n d o r f a n d L u i k a r t , 2 0 0 7 ) . G i v e n t h a t , t h e a l l e l e s o f t h e p o l y m o r p h i c l o c i e x a m i n e d h e r e i n t h e A m a z o n t u r t l e ( P . e x p a n s a ) p o p u l a t i o n s a m p l e s , a r e n o t a s s o c i a t e d ( T a b l e 4 ) a n d T a b l e 5 . S u m m a r y o f g e n e t i c v a r i a t i o n a t 1 1 l o c i i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P . e x p a n s a . S t a n d a r d d e v i a t i o n s a r e s h o w n i n p a r e n t h e s e s . P o p u l a t i o n s a m p l e s T o t a l M a r a c a r a n a T r o m b e t a s M o n t e C r i s t o M e a n n u m b e r o f t u r t l e p e r l o c u s 2 9 . 6 3 3 . 9 3 0 . 5 9 4 N u m b e r o f l o c u s 1 1 1 1 1 1 1 1 * P r o p o r t i o n o f p o l y m o r p h i c l o c i ( P ) 2 7 . 2 7 2 7 . 2 7 3 6 . 3 6 3 6 . 3 6 A v e r a g e n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s 1 . 2 7 1 . 2 7 1 . 3 6 1 . 3 6 N u m b e r o f p o l y m o r p h i c l o c i 3 3 4 4 A v e r a g e o b s e r v e d h e t e r o z y g o s i t y ( H o ) 0 . 0 7 8 5 ( 0 . 1 4 4 2 ) 0 . 0 8 6 9 ( 0 . 1 6 6 8 ) 0 . 0 7 7 1 ( 0 . 1 5 5 3 ) 0 . 0 8 1 1 ( 0 . 1 5 3 3 ) * * A v e r a g e e x p e c t e d h e t e r o z y g o s i t y ( H e ) 0 . 0 8 7 4 ( 0 . 1 6 3 2 ) 0 . 0 7 6 6 ( 0 . 1 4 3 9 ) 0 . 1 2 1 1 ( 0 . 1 9 3 3 ) 0 . 1 0 0 4 ( 0 . 1 6 3 1 ) * * N e i ( 1 9 7 3 ) e x p e c t e d h e t e r o z y g o s i t y ; * P c o r r e s p o n d s t o 0 . 9 5 c r i t e r i o n . T a b l e 6 . W r i g h t s F - s t a t i s t i c s a n d g e n e f l o w ( N m ) f o r e a c h l o c u s i n t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s . L o c u s F I S F I T F S T * N m T f 0 . 0 1 7 4 0 . 0 2 3 3 0 . 0 0 6 0 4 1 . 6 5 A l b - 0 . 0 7 7 1 - 0 . 0 7 3 4 0 . 0 0 3 4 7 3 . 3 1 G P - 1 - - 0 . 0 0 0 0 - G P - 2 - - 0 . 0 0 0 0 - E S T - 1 - - 0 . 0 0 0 0 - E S T - 2 - - 0 . 0 0 0 0 - M D H 1 . 0 0 0 1 . 0 0 0 0 . 2 1 4 3 0 . 9 2 P G M - 1 - - 0 . 0 0 0 0 - P G M - 2 0 . 0 1 9 8 0 . 0 8 9 5 0 . 0 7 1 1 3 . 2 7 S O D - 1 - - 0 . 0 0 0 0 - S O D - 2 - - 0 . 0 0 0 0 - M e a n 0 . 1 3 4 7 0 . 1 9 1 2 0 . 0 6 5 2 3 . 5 8 * N m = G e n e f l o w e s t i m a t e d f r o m F S T = 0 . 2 5 ( 1 - F S T ) / F S T .

3 2 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 p r e s u m a b l y a r e s e g r e g a t i n g i n d e p e n d e n t l y ( i . e . n o e p i s t a s i s ) , t h e y c a n b e u s e d i n f u t u r e p o p u l a t i o n g e n e t i c s t u d i e s o f t h i s s p e c i e s , r e q u i r i n g g a m e t i c e q u i l i b r i u m b e t w e e n l o c i , a s b a s i c p r e m i s e . T h e r e f o r e , t h e u s e o f t h e s e l o c i a s g e n e t i c m a r k e r s f o r i n v e s t i g a t i n g A m a z o n t u r t l e p r o b a b l y s h o u l d n o t b r i n g a b o u t a n y i n f l u e n c e i n t h e e s t i m a t i o n o f p a r a m e t e r s o n t h e p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e o f t h i s s p e c i e s . N e v e r t h e l e s s , w e c a n n o t c o m p l e t e l y r u l e o u t t h e p o s s i b i l i t y t h a t s o m e o f t h e s e l o c i a r e i n l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m w i t h o t h e r l o c i t h a t h a v e n o t b e e n e x a m i n e d t h u s f a r , d u e t o e v o l u t i o n a r y p r o c e s s e s , s u c h a s : i n b r e e d i n g , g e n e t i c d r i f t , n a t u r a l s e l e c t i o n , p o p u l a t i o n b o t t l e n e c k a n d W a h l u n d e f f e c t ( A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ; D u r a n d e t a l . , 2 0 0 3 ; H a r t l , 2 0 0 8 ) . H a r d y - W e i n b e r g e q u i l i b r i u m T h e H a r d y - W e i n b e r g t e s t i s a s i m p l i f i e d s t a t i s t i c a l m e t h o d c o m m o n l y u s e d t o d e s c r i b e p o p u l a t i o n g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s b y m e a n s o f t h e b i n o m i a l e x p a n s i o n : ( p + q ) 2 = p 2 + 2 p q + q 2 = 1 , w h e r e p a n d q , c o r r e s p o n d t h e a l l e l i c f r e q u e n c i e s o f t h e t w o d i f f e r e n t a l l e l e s o f a g i v e n p o p u l a t i o n p r e s u m a b l y i n g e n e t i c e q u i l i b r i u m . T h i s m e t h o d a l l o w s o n e t o d e s c r i b e a p o p u l a t i o n b y i t s a l l e l e a n d g e n o t y p e f r e q u e n c i e s d i s p l a y e d a t e a c h g e n e l o c u s , a n d t h e e f f e c t s o f n a t u r a l s e l e c t i o n . T h e m a i n a s s u m p t i o n o f H a r d y - W e i n b e r g L a w i s t h a t i n a n i n f i n i t e l y l a r g e p o p u l a t i o n i n t h e a b s e n c e o f e v o l u t i o n a r y p r o c e s s e s : m u t a t i o n , m i g r a t i o n , d r i f t a n d n a t u r a l s e l e c t i o n ; g e n e f r e q u e n c i e s w i l l r e m a i n c o n s t a n t a c r o s s g e n e r a t i o n s . T h i s l a w a l s o s a y s t h a t i f t h e c r o s s i n g s o c c u r a t r a n d o m , t h e g e n o t y p i c f r e q u e n c i e s a r e r e l a t e d t o t h e g e n e f r e q u e n c i e s t h r o u g h t h e a f o r e m e n t i o n e d b i n o m i a l e x p a n s i o n ( A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ; F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; A l l e n d o r f a n d L u i k a r t , 2 0 0 7 ) . O f t h e f o u r p o l y m o r p h i c l o c i a n a l y s e d ( T f , A l b , M D H , P G M - 2 ) o n l y M D H l o c u s s h o w e d H a r d y - W e i n b e r g d i s e q u i l i b r i u m i n t h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e , w i t h r e p e r c u s s i o n i n t h e t o t a l p o p u l a t i o n s a m p l e ( T a b l e 2 ) . A m o n g t h e f a c t o r s t h a t n o r m a l l y b r i n g a b o u t g e n e t i c i m b a l a n c e i n g e n e l o c i , a r e : 1 ) a d a p t i v e d i f f e r e n c e s b e t w e e n g e n o t y p e s ( N e v o e t a l . , 1 9 8 4 ) ; 2 ) p o s s i b l e e x i s t e n c e o f o t h e r l o c i i n l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m w i t h a p a r t i c u l a r l o c u s u n d e r s t u d y ( F u t u y m a , 1 9 9 7 ) ; 3 ) s e l e c t i o n a g a i n s t h e t e r o z y g o u s i n d i v i d u a l s ( G i l l e s p i e , 1 9 9 8 ; B e i g u e l m a n , 2 0 0 8 ) ; 4 ) i n b r e e d i n g ( W r i g h t , 1 9 2 1 ) ; 5 ) W a h l u n d e f f e c t ( i . e . p h y s i c a l m i x t u r e s o f g e n e t i c a l l y d i s t i n c t p o p u l a t i o n s ) ( S m i t h e t a l . , 1 9 8 1 ) ; a n d 6 ) p r o d u c t i o n o f a n o n - f u n c t i o n a l p r o t e i n ( i . e . a n u l l a l l e l e ) ( F e r g u s o n , 1 9 8 0 ) . W i t h t h e e x c e p t i o n o f t h e n u l l a l l e l e a n d W a h l u n d e f f e c t ( f a c t o r s n o t o b s e r v e d i n t h e p r e s e n t M D H a n a l y s i s ) , o n e o r m o r e o f t h e a f o r e m e n t i o n e d f a c t o r s , a c t i n g i n c o m b i n a t i o n , c o u l d b e a f f e c t i n g t h e g e n o t y p i c a n d a l l e l i c d i s t r i b u t i o n s i n t h e l o c u s M D H . T h e r e f o r e , a b r o a d e r s a m p l i n g s h o u l d b e c o n d u c t e d i n t h e o c c u r r e n c e a r e a o f T a b l e 7 . E x a c t t e s t s f o r p o p u l a t i o n d i f f e r e n t i a t i o n ( R a y m o n d a n d R o u s s e t , 1 9 9 5 ) b a s e d o n t h e a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s a t p o l y m o r p h i c l o c i w e r e a p p l i e d f o r m a k i n g p a i r w i s e c o m p a r i s o n s i n t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s ( l o w e r h a l f o f m a t r i x ) . I n a d d i t i o n , F S T v a l u e s ( u p p e r h a l f o f m a t r i x ) a n d c o r r e s p o n d i n g N m v a l u e s ( b e t w e e n p a r e n t h e s e s ) a r e s h o w n . T h e F S T v a l u e s s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m z e r o a r e s h o w n i n b o l d . P o p u l a t i o n s a m p l e s M a r a c a r a n a T r o m b e t a s M o n t e C r i s t o M a r a c a r a n a - 0 . 0 0 3 5 ( 7 1 . 1 5 ) 0 . 0 6 1 ( 3 . 6 2 ) T r o m b e t a s X 2 ( 6 ) = 2 . 2 3 0 P = 0 . 8 9 7 - 0 . 0 6 6 ( 3 . 5 4 ) M o n t e C r i s t o X 2 ( 8 ) = 3 1 . 2 3 0 P = 0 . 0 0 0 1 * X 2 ( 8 ) = 3 3 . 0 2 3 P = 0 . 0 0 0 1 * - * p < 0 . 0 0 1 .

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 2 9 P . e x p a n s a , w i t h a n a l y s e s i n c l u d i n g p r e f e r a b l y t h e l o c i e x a m i n e d i n t h i s s t u d y , a n d e x t r a l o c i , i n o r d e r t o b e t t e r u n d e r s t a n d t h i s p e c u l i a r g e n e t i c i m b a l a n c e d e t e c t e d i n t h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e . A d d i t i o n a l l y , i t i s n e c e s s a r y t o c o n d u c t f u r t h e r s t u d i e s w i t h h i s t o r i c a l s e r i e s o f t h e m o l e c u l a r g e n e t i c m a r k e r s a l r e a d y e x a m i n e d i n P . e x p a n s a ( M o u r a e t a l . , 2 0 1 1 , a n d r e f e r e n c e s t h e r e i n ) ; t o a s s e s s w h a t a l l e l e s a t c e r t a i n l o c i c o u l d b e i n c r e a s i n g o r d e c r e a s i n g i n f r e q u e n c y o v e r s u b s e q u e n t g e n e r a t i o n s o f t h i s s p e c i e s . M e a s u r e s o f g e n e t i c d i v e r s i t y T h e k n o w l e d g e o f a l l e l e f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n s i s e s s e n t i a l i n r e s e a r c h e s o f g e n e t i c v a r i a b i l i t y a n d p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e . T h i s k i n d o f r e s e a r c h c o n t r i b u t e s s i g n i f i c a n t l y t o t h e k n o w l e d g e o f t h e e v o l u t i o n a r y h i s t o r y o f a g i v e n p o p u l a t i o n , t h e r e f o r e , m a y i n d i c a t e t h e a c t i o n o f c e r t a i n e v o l u t i o n a r y m e c h a n i s m s o n t h e p o p u l a t i o n u n d e r s t u d y , s u c h a s i n b r e e d i n g , g e n e t i c d r i f t , f o u n d e r e f f e c t a n d p o p u l a t i o n b o t t l e n e c k s . A d d i t i o n a l l y , b y c o m p a r i s o n s o f a l l e l e f r e q u e n c i e s i t i s p o s s i b l e t o d e m o n s t r a t e w h e t h e r c e r t a i n p o p u l a t i o n s h a v e s i m i l a r e v o l u t i o n a r y h i s t o r i e s ( H a r t l , 2 0 0 8 ) . T h e g e n e t i c v a r i a t i o n o f a p o p u l a t i o n i s u s u a l l y m e a s u r e d b y t h e p r o p o r t i o n o f p o l y m o r p h i c l o c i ( P ) , a v e r a g e h e t e r o z y g o s i t y p e r l o c u s ( H ) , n u m b e r o f p o l y m o r p h i c l o c i a n d a v e r a g e n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s ( N e i , 1 9 7 5 ) . A m o n g t h e s e m e a s u r e s o f g e n e t i c v a r i a t i o n , h e t e r o z y g o s i t y i s t h e m o s t i n f o r m a t i v e , a n d i s t h e r e f o r e p r e f e r r e d b y m o s t p o p u l a t i o n g e n e t i c i s t s , a n d l e s s a f f e c t e d b y s a m p l e s i z e . I t i s a g o o d m e a s u r e o f v a r i a t i o n b e c a u s e i t e s t i m a t e s t h e p r o b a b i l i t y t h a t t w o a l l e l e s d r a w n a t r a n d o m f r o m a p o p u l a t i o n a r e d i f f e r e n t . T h e p o l y m o r p h i s m o f a p o p u l a t i o n i s , m o r e o v e r , a n i m p r e c i s e m e a s u r e o f g e n e t i c v a r i a t i o n d u e t o t h e a r b i t r a r i n e s s i n t h e c h o i c e o f t h e p o l y m o r p h i s m c r i t e r i o n t o b e u s e d ( 0 . 9 5 o r 0 . 9 9 ) , i . e . t h e m o s t c o m m o n a l l e l e w i t h f r e q u e n c y n o g r e a t e r t h a n 0 . 9 5 o r 0 . 9 9 . F o r e x a m p l e , a c e r t a i n l o c u s p r e s e n t i n g t w o a l l e l e s w i t h f r e q u e n c i e s 0 . 9 5 a n d 0 . 0 5 , w h i l e a n o t h e r p r e s e n t i n g 2 0 a l l e l e s , e a c h w i t h a f r e q u e n c y o f 0 . 0 5 a r e e q u a l l y c o n s i d e r e d p o l y m o r p h i c u n d e r t h e 0 . 9 5 c r i t e r i o n o f p o l y m o r p h i s m ( N e i , 1 9 7 5 ; A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ) . I n t h e p r e s e n t s t u d y , t h e a v e r a g e e x p e c t e d h e t e r o z y g o s i t y ( H e ) o f P . e x p a n s a i n t h e M a r a c a r a n a p o p u l a t i o n s a m p l e w a s 0 . 0 8 7 4 , T r o m b e t a s 0 . 0 7 6 6 a n d M o n t e C r i s t o 0 . 1 2 1 1 . T h e p o p u l a t i o n s a m p l e o f M o n t e C r i s t o s h o w e d t h e h i g h e r v a r i a t i o n b e t w e e n t h e a v e r a g e o b s e r v e d h e t e r o z y g o s i t y ( H o ) a n d t h e a v e r a g e e x p e c t e d h e t e r o z y g o s i t y ( H e ) ( 0 . 0 7 7 1 a n d 0 . 1 2 1 1 , r e s p e c t i v e l y ) ( T a b l e 5 ) . T h i s w a s n o t e d d u e t o t h e l e v e l o f p o l y m o r p h i s m d e t e c t e d i n t h e M D H l o c u s , w h e r e t h e a l l e l e f r e q u e n c i e s o f M D H a M D H b w e r e 0 . 2 9 a n d 0 . 7 1 , r e s p e c t i v e l y , o n l y i n t h i s s a m p l e . A s a r e s u l t , a g r e a t v a r i a t i o n b e t w e e n t h e s e m e a s u r e s H o a n d H e w a s a l s o o b s e r v e d i n t h e t o t a l s a m p l e . T h e v a l u e f o r H e i n t h e p o p l a t i o n s a m p l e o f M o n t e C r i s t o ( 0 . 1 2 1 1 ) w a s m u c h h i g h e r t h a n t h e v a l u e s r e v e a l e d i n t h e t w o o t h e r s a m p l e s a n a l y s e d i n t h e p r e s e n t s t u d y , M a r a c a r a n a ( 0 . 0 8 7 4 ) a n d T a b l e 8 . R o g e r s ( 1 9 7 2 ) g e n e t i c d i s t a n c e m o d i f i e d b y W r i g h t ( 1 9 7 8 ) b e t w e e n t h e P o d o c m e n i s e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s . P o p u l a t i o n s a m p l e s M a r a c a r a n a T r o m b e t a s M o n t e C r i s t o M a r a c a r a n a - - - T r o m b e t a s 0 . 0 2 4 0 - - M o n t e C r i s t o 0 . 1 1 9 5 0 . 1 2 3 0 - F i g . 4 . T h e U P G M A d e n d r o g r a m b a s e d o n R o g e r s ( 1 9 7 2 ) g e n e t i c d i s t a n c e m o d i f i e d b y W r i g h t ( 1 9 7 8 ) b e t w e e n P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s .

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 3 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T r o m b e t a s ( 0 . 0 7 6 6 ) ; a n d i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d b y B o c k e t a l . , ( 2 0 0 1 ) , f r o m P e r u ( 0 . 0 4 3 ) a n d B r a z i l ( 0 . 0 7 2 - 0 . 0 7 8 ) . H o w e v e r , t h e s e v a l u e s a r e w i t h i n t h e r a n g e e s t i m a t e d f o r t h e g r o u p o f r e p t i l e s , w h e r e , i n s t u d i e s o f p r o t e i n - i s o z y m e m a r k e r s , t h i s m e a s u r e r a n g e d f r o m 0 . 0 5 0 t o 0 . 1 2 4 ( C h a k r a b o r t y e t a l . , 1 9 8 0 ; F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; A l l e n d o r f a n d L u i k a r t , 2 0 0 7 ) . T h e p o l y m o r p h i s m ( P ) i n P . e x p a n s a w a s e s t i m a t e d t o b e 0 . 1 7 ( B o c k e t a l . , 2 0 0 1 ) . T h i s v a l u e i s w e l l b e l o w t h e v a l u e s e s t i m a t e d i n t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d i n t h e p r e s e n t s t u d y , w h i c h w a s 0 . 2 7 i n M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s , a n d 0 . 3 6 i n M o n t e C r i s t o . I t s h o u l d b e e m p h a s i z e d t h a t t h e M o n t e C r i s t o s a m p l e i s s h o w i n g a p o l y m o r p h i s m 3 3 % h i g h e r , i n r e l a t i o n t o t h e s a m p l e s o f M a r a c a r a n a a n d T r o m b e t a s , a n d 1 2 2 % h i g h e r i n r e l a t i o n t o t h e s a m p l e s e x a m i n e d b y B o c k e t a l . , ( 2 0 0 1 ) . I n a d d i t i o n , t h e s a m p l e s o f t h e p r e s e n t s t u d y s h o w e d p o l y m o r p h i s m v a l u e s a b o v e t h a t s h o w n i n r e p t i l e s ( P = 0 . 2 3 ) ( F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ; H a r t l , 2 0 0 8 ) . T h e M o n t e C r i s t o p o p u l a t i o n s a m p l e o f P . e x p a n s a w i t h a n a v e r a g e n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s e q u a l t o 1 . 3 6 , e x c e e d e d t h e v a l u e o f 1 . 2 7 d e t e c t e d i n t h e T r o m b e t a s a n d M a r a c a r a n a s a m p l e s . T h i s p r o m i n e n c e i n t h e m e a s u r e s o f g e n e t i c v a r i a t i o n o f P . e x p a n s a d i s p l a y e d b y M o n t e C r i s t o ( i . e . p o p u l a t i o n s a m p l e c o l l e c t e d f r o m t h e R i o T a p a j ó s ) i n r e l a t i o n t o t h e o t h e r p o p u l a t i o n s a m p l e s i n v e s t i g a t e d i n t h e p r e s e n t s t u d y , i s c o n s i s t e n t w i t h t h e r e s u l t s o f m i c r o s a t e l l i t e a n d m i t o c h o n d r i a l D N A o f t h i s s p e c i e s p r e s e n t e d b y S i t e s e t a l . , ( 1 9 9 9 ) a n d P e a r s e e t a l . , ( 2 0 0 6 ) . S i t e s e t a l . , 1 9 9 9 f o u n d a h i g h e r a l l e l i c r i c h n e s s a n d a l a r g e r n u m b e r o f h a p l o t y p e s i n t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e f r o m R i o T a p a j ó s i n r e l a t i o n t o t h e p o p u l a t i o n s a m p l e f r o m R i o A r a g u a i a . P e a r s e e t a l . , ( 2 0 0 6 ) c o n f i r m e d t h i s m u c h h i g h e r g e n e t i c d i v e r s i t y o f T a p a j ó s c o m p a r e d t o m o s t o t h e r B r a z i l i a n p o p u l a t i o n s a m p l e s c o l l e c t e d f r o m A m a z o n a r e a s . G e n e t i c s t r u c t u r e I n o r d e r t o g e n e r a t e i n f o r m a t i o n o n t h e g e n e t i c s t r u c t u r e o f n a t u r a l p o p u l a t i o n s f o r b r e e d i n g a n d g e n e t i c c o n s e r v a t i o n o f s p e c i e s , m a n y r e s e a r c h e r s h a v e u s e d W r i g h t ' s F s t a t i s t i c s ( D i a s , 1 9 9 8 ) . T h e p a r a m e t e r u s e d t o e s t i m a t e t h e g e n e f i x a t i o n i n d e x e s r e s u l t i n g f r o m b i p a r e n t a l i n b r e e d i n g i s t h e F c o e f f i c i e n t ( F I S , F I T a n d F S T ) o f W r i g h t ( 1 9 5 1 ) d e f i n e d a s t h e c o r r e l a t i o n b e t w e e n t h e a l l e l e s i n t h e g a m e t e s t h a t f o r m a z y g o t e ( R o b i n s o n , 1 9 9 8 ) . F I S i s k n o w n a s t h e i n b r e e d i n g i n d e x o f i n d i v i d u a l s r e l a t i v e t o i t s s u b p o p u l a t i o n ( i t e s t i m a t e s t h e d e v i a t i o n f r o m H a r d y - W e i n b e r g g e n o t y p i c f r e q u e n c i e s i n t h e s u b p o p u l a t i o n ) ; F I T i s t h e i n b r e e d i n g i n t h e p o p u l a t i o n ( e s t i m a t e d d e v i a t i o n f r o m H a r d y - W e i n b e r g e q u i l i b r i u m i n t h e e n t i r e p o p u l a t i o n ) ; a n d F S T i s t h e i n b r e e d i n g d u e t o t h e d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g s u b p o p u l a t i o n s i n r e l a t i o n t o t h e t o t a l p o p u l a t i o n ( d i v e r g e n c e o f a l l e l e f r e q u e n c i e s a m o n g p o p u l a t i o n s ) ( F r a n k h a m e t a l . , 2 0 0 8 ) . A c c o r d i n g t o W r i g h t ( 1 9 7 8 ) F e q u a l t o 0 . 2 5 i s c o n s i d e r e d a n a r b i t r a r y v a l u e a b o v e w h i c h t h e r e i s v e r y g r e a t g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g p o p u l a t i o n s ; v a l u e s i n t h e r a n g e 0 . 1 5 t o 0 . 2 5 i n d i c a t e m o d e r a t e l y g r e a t g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n ; 0 . 0 5 t o 0 . 1 5 i n d i c a t e m o d e r a t e g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n ; a n d g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n i s , h o w e v e r , b y n o m e a n s n e g l i g i b l e i f F i s a s s m a l l a s 0 . 0 5 o r e v e n l e s s . B y u s i n g W r i g h t ( 1 9 7 8 ) ' s c r i t e r i o n t h e a v e r a g e v a l u e o f F I S = 0 . 1 3 4 7 o b t a i n e d i n P . e x p a n s a i n t h e p r e s e n t s t u d y i n d i c a t e s a m o d e r a t e i n b r e e d i n g w i t h i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s o f t h i s s p e c i e s ( T a b l e 6 ) . T h e a v e r a g e v a l u e o f F I T = 0 . 1 9 1 2 i n d i c a t e s t h a t i n b r e e d i n g i n t h e t o t a l s a m p l e p o p u l a t i o n w a s m o d e r a t e l y g r e a t . T h e a v e r a g e v a l u e o f F S T = 0 . 0 6 5 2 p o i n t s t o a g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n m o d e r a t e a m o n g p o p u l a t i o n s a m p l e s . T h e l o c i t h a t c o n t r i b u t e d m o s t t o g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g t h e s a m p l e s w e r e M D H a n d P G M - 2 . T h e M D H l o c u s i n p a r t i c u l a r s t o o d o u t a s h a v i n g a g r e a t d e f i c i e n c y o f h e t e r o z y g o u s i n d i v i d u a l s i n t h e p o p u l a t i o n s a m p l e o f M o n t e C r i s t o , w h i c h r e f l e c t e d i n t h e t o t a l p o p u l a t i o n

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 3 1 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 s a m p l e ( T a b l e 2 ) . I n a d d i t i o n , s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s w e r e d e t e c t e d i n t h e a l l e l e d i s t r i b u t i o n s o f t h e s e l o c i , a s d e m o n s t r a t e d i n t h e h o m o g e n e i t y t e s t s ( T a b l e 3 ) . T h e v a l u e s o f F I S , F I T a n d F S T i n p o p u l a t i o n s t u d i e s o f P s e u d e m y s s c r i p t a u s i n g a l l o z y m e s w e r e 0 . 1 8 3 , 0 . 1 4 2 a n d 0 . 0 4 8 , r e s p e c t i v e l y ( S c r i b n e r e t a l . , 1 9 8 6 ) , a n d a p p r o a c h t h o s e v a l u e s o b s e r v e d i n t h e p r e s e n t w o r k f o r P o d o c n e m i s e x p a n s a . A c c o r d i n g t o W r i g h t ( 1 9 6 9 c i t e d i n F r a n k h a m e t a l . , 2 0 0 2 , p . 3 2 8 ) o n e m i g r a n t p e r g e n e r a t i o n w o u l d b e e n o u g h t o a v o i d a c o m p l e t e g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g i d e a l i z e d p o p u l a t i o n s . T h e o r e t i c a l l y , t h e n u m b e r o f m i g r a n t s N m 4 m e a n s t h e o c c u r r e n c e o f p a n m i x i a a m o n g p o p u l a t i o n s . W h i l e , N m 2 i n d i c a t e s a m o d e r a t e g e n e t i c d i v e r g e n c e ; h o w e v e r , c o n s i d e r a b l e v a r i a t i o n e x i s t s f o r t h e s e v a l u e s o f N m a m o n g o r g a n i s m s , p r o v i d i n g a c o n s i d e r a b l e s c o p e f o r g e n e t i c d i v e r g e n c e t h a t r e s u l t s f r o m r a n d o m g e n e t i c d r i f t ( H a r t l , 2 0 0 8 ) . S i t e s e t a l . , ( 1 9 9 9 ) f o u n d a v a l u e o f N m = 1 . 6 7 i n P . e x p a n s a , r e f l e c t i n g a m o d e r a t e g e n e t i c d i v e r g e n c e a m o n g t h e p o p u l a t i o n s a m p l e s s t u d i e d . V a l e n z u e l a ( 2 0 0 1 ) e s t i m a t e d a v a l u e o f N m 4 . 6 0 , r e v e a l i n g a m o d e r a t e g e n e t i c d i v e r g e n c e a m o n g p o p u l a t i o n s a m p l e s o f R i o s C a q u e t á ( C o l o m b i a ) , T a p a j o s a n d A r a g u a i a ( B r a z i l ) . I n t h e p r e s e n t s t u d y a n a v e r a g e v a l u e o f N m = 3 : 5 8 , w a s e s t i m a t e d i n t h e t o t a l p o p u l a t i o n s a m p l e o f t h i s s p e c i e s ( T a b l e 6 ) , w h i c h r e s u l t e d i n a m o d e r a t e g e n e t i c d i v e r g e n c e a s s h o w n a b o v e ( F S T = 0 . 0 6 5 2 ) . I n t h e p a i r w i s e p o p u l a t i o n s a m p l e c o m p a r i s o n s , M a r a c a r a n a v s T r o m b e t a s , t h e d e t e c t e d v a l u e o f N m = 7 1 . 1 5 p r o v i d e s s t r o n g e v i d e n c e f o r p a n m i x i a b e t w e e n t h e s e t w o s a m p l e s e x a m i n e d . I n c o n t r a s t w i t h t h e T f l o c u s d a t a p r e s e n t e d b y T e i x e i r a e t a l . , ( 1 9 9 6 ) , a l i m i t e d g e n e f l o w w a s d e t e c t e d i n t h e p a i r w i s e p o p u l a t i o n s a m p l e c o m p a r i s o n s , M o n t e C r i s t o v s M a r a c a r a n a a n d M o n t e C r i s t o v s T r o m b e t a s ( N m = 3 . 6 2 a n d 3 : 5 4 , r e s p e c t i v e l y ) . T h i s g e n e f l o w l i m i t a t i o n a l s o l e d t o a m o d e r a t e g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n d e t e c t e d i n t h e a f o r e m e n t i o n e d p a i r w i s e s a m p l e c o m p a r i s o n s , M o n t e C r i s t o v s M a r a c a r a n a a n d M o n t e C r i s t o v s T r o m b e t a s , w i t h F S T v a l u e s = 0 . 0 6 1 a n d 0 . 0 6 6 , r e s p e c t i v e l y ( T a b l e 7 ) . I n t h i s c o n t e x t , t h e f o l l o w i n g q u e s t i o n c o m e s u p : w h a t i s t h e N m i n t h e n a t u r a l p o p u l a t i o n s o f P . E x p a n s a . T h e d a t a p r e s e n t e d h e r e , b a s e d o n l y o n a l i m i t e d n u m b e r o f l o c i a n d p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d , p l u s t h e p a u c i t y o f d a t a a v a i l a b l e i n l i t e r a t u r e f o r t h i s s p e c i e s r e g a r d i n g g e n e t i c s t r u c t u r e , d o n o t a l l o w a n s w e r i n g t h i s q u e s t i o n . C u r r e n t l y w h a t c a n b e c l e a r l y s e e n i s t h a t , t h e g r e a t e s t g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n r e v e a l e d i n t h e p r e s e n t s t u d y w h e n M o n t e C r i s t o ( i . e . p o p u l a t i o n s a m p l e c o l l e c t e d f r o m t h e R i o T a p a j ó s ) w a s c o m p a r e d t o t h e o t h e r s a m p l e s , s h o w s t o b e c o n g r u e n t w i t h t h e D N A d a t a p u b l i s h e d b y P e a r s e e t a l . , ( 2 0 0 6 ) , w h o c o m p a r e d T a p a j ó s w i t h o t h e r p o p u l a t i o n s a m p l e s f r o m t h e A m a z o n b a s i n . G e n e t i c d i s t a n c e G e n e t i c d i s t a n c e m e a s u m e n t s h a v e l o n g b e e n a p p l i e d a s o n e o f t h e m a j o r t o o l s f o r i n v e s t i g a t i n g t h e g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n b e t w e e n p o p u l a t i o n s . T h e s e m e a s u r e m e n t s t h a t u s e g e n e a n d g e n o t y p i c f r e q u e n c i e s o b t a i n e d t h r o u g h p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s t e c h n i q u e f r o m i n d i v i d u a l s t a k e n a t r a n d o m i n n a t u r a l p o p u l a t i o n s , a r e a b l e t o p r o v i d e a n e s t i m a t e o f i n t r a a n d i n t e r s p e c i f i c d i f f e r e n t i a t i o n . T h e s e f r e q u e n c i e s c a n b e t r a n s f o r m e d i n t o a s e r i e s o f i n d e x e s t h a t a l l o w e s t i m a t i n g t h e d e g r e e o f s i m i l a r i t y o r g e n e t i c d i s t a n c e b e t w e e n s p e c i e s a n d p o p u l a t i o n s ( f o r r e v i e w s e e N e i , 1 9 7 5 ; W r i g h t , 1 9 7 8 ; A y a l a a n d K i g e r , 1 9 8 0 ; F e r g u s o n , 1 9 8 0 ; S o l f e r i n i a n d S e l i v o n , 2 0 0 1 ) . W h e n g e n e t i c d i s t a n c e , g e n e t i c i d e n t i t y , o r o t h e r m e a s u r e m e n t s o f g e n e t i c s i m i l a r i t y h a v e b e e n c o m p i l e d f o r a l l p o s s i b l e p a i r s o f p o p u l a t i o n s o r s p e c i e s , t h e d a t a a r e b e s t p r e s e n t e d i n t h e f o r m o f a m a t r i x . T h e n , f o r v i s u a l d i s p l a y o f t h e r e s u l t s , d e n d r o g r a m s c a n b e c o n s t r u c t e d . O n e o f t h e m o s t u s e f u l d e n d r o g r a m s f o r e l e c t r o p h o r e t i c d a t a i s t h e U n w e i g h t e d P a i r - G r o u p M e t h o d w i t h A r i t h m e t i c A v e r a g e ( U P G M A ) ( F e r g u s o n , 1 9 8 0 ) . T h i s m e t h o d i s m a i n l y a p p l i e d b e c a u s e i t a s s u m e s

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 3 3 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 a n e v o l u t i o n a r y c o n s t a n t r a t e i n e a c h b r a n c h o f t h e t r e e a n d w o r k s p o o r l y w h e n t h i s a s s u m p t i o n i s v i o l a t e d ( H a r t l , 2 0 0 8 ) . T h e m a t r i x o f t h e e s t i m a t e d g e n e t i c d i s t a n c e s b e t w e e n p o p u l a t i o n s a m p l e s o f P . e x p a n s a , s h o w e d t h e l o w e s t v a l u e i n t h e p a i r w i s e c o m p a r i s o n M a r a c a r a n a v s T r o m b e t a s ( T a b l e 8 ) . T h e s e f i n d i n g s s u g g e s t t h a t t h e s e s a m p l e s a r e p r e s u m a b l y p a r t o f a l a r g e p a n m i c t i c p o p u l a t i o n , i . e . b e l o n g i n g t o t h e s a m e s t o c k , w i t h t h i s f a c t b e i n g s u p p o r t e d b y t h e l a r g e e s t i m a t e d n u m b e r o f m i g r a n t s p e r g e n e r a t i o n b e t w e e n t h e m ( N m = 7 1 . 1 5 ) . I t i s n o t e w o r t h y t h a t t a g g e d s p e c i m e n s o f A m a z o n t u r t l e , f r o m t h e R i o T r o m b e t a s w e r e a l r e a d y f o u n d n e a r t h e t o w n o f I t a c o a t i a r a , i n t h e s t a t e o f A m a z o n a s ( A l f i n i t o e t a l . , 1 9 7 6 ) . T h i s f a c t c o u l d e x p l a i n a p o s s i b l e f l o w o f a n i m a l s f r o m t h e R i o T r o m b e t a s t o w a r d s R i o U a t u m ã ( r i v e r f r o m w h e r e t h e M a r a c a r a n a p o p u l a t i o n s a m p l e w a s c a u g h t ) . C o n s i d e r i n g t h a t t h e s e r i v e r s a r e t r i b u t a r i e s o f t h e s a m e b a n k ( i . e . l e f t b a n k ) o f t h e A m a z o n R i v e r , s u c h a f l o w w o u l d b e f a c i l i t a t e d , r e s u l t i n g i n a g r e a t e r h o m o g e n e i t y b e t w e e n t h e s e s a m p l e d a r e a s ( T a b l e 3 , T a b l e 7 ) . I t a l s o s h o u l d b e h i g h l i g h t e d t h a t t h e g r e a t e s t d i s t a n c e v a l u e s w e r e d e t e c t e d b e t w e e n t h e p a i r w i s e p o p u l a t i o n s a m p l e c o m p a r i s o n s m a d e w i t h M o n t e C r i s t o , m e a n i n g r e s t r i c t e d f l o w o f g e n e s b e t w e e n M o n t e C r i s t o v s M a r a c a r a n a ( N m = 3 . 6 2 ) a n d M o n t e C r i s t o v s T r o m b e t a s ( N m = 3 . 5 4 ) ( T a b l e 7 , T a b l e 8 ) . I n f a c t , s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s w e r e d e t e c t e d i n t h e s e c o m p a r i s o n s ( T a b l e 3 ) . T h e d e n d r o g r a m ( F i g . 4 ) g e n e r a t e d f r o m t h e d a t a o f T a b l e 8 , i n a w a y , s e e m s t o r e p r e s e n t g r a p h i c a l l y t h e a n c e s t r y r e l a t i o n s h i p s a n d g e n e t i c s t r u c t u r e o f t h e P . e x p a n s a p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d . C O N C L U S I O N 1 ) T h e p r e s e n t e l e c t r o p h o r e t i c d a t a b a s e d o n p l a s m a p r o t e i n m a r k e r s p o i n t o u t a p o s s i b l e e x i s t e n c e o f d i s t i n c t s u b p o p u l a t i o n s s t o c k s o f P . e x p a n s a i n t h e s a m p l e d a r e a , w h e r e M o n t e C r i s t o ( p o p u l a t i o n s a m p l e f r o m t h e R i o T a p a j ó s ) , w a s a l w a y s g e n e t i c a l l y d i f f e r e n t c o m p a r e d t o t h e o t h e r t w o p o p u l a t i o n s a m p l e s e x a m i n e d . 2 ) D u e t o t h e r e a s o n a b l y h i g h d e g r e e o f p o l y m o r p h i s m r e v e a l e d i n p l a s m a p r o t e i n s o f P . e x p a n s a , a n e x t e n s i o n o f t h e p r e s e n t r e s e a r c h i s h i g h l y r e c o m m e n d e d i n o r d e r t o d e t e c t a g r e a t e r n u m b e r o f p o l y m o r p h i c l o c i a n d a p p l y t h e m a s g e n e t i c m a r k e r s i n p o p u l a t i o n s t u d i e s o f t h i s s p e c i e s . 3 ) E v e n w i t h t h e a d v e n t o f m o d e r n D N A b a s e d m a r k e r s , t h e p r o t e i n a n d i s o z y m e m a r k e r s s e p a r a t e d b y e l e c t r o p h o r e s i s t e c h n i q u e , r e m a i n a p o w e r f u l a n d e f f e c t i v e t o o l i n s t u d i e s o f p o p u l a t i o n g e n e t i c s t r u c t u r e , a n d , t h e r e f o r e , i t s h o u l d n e v e r b e u n d e r e s t i m a t e d . T h e r e l a t i v e s i m p l i c i t y , s p e e d a n d l o w c o s t o f p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i s i n r e l a t i o n t o m a n y o t h e r m o l e c u l a r t e c h n i q u e s , s t i l l m a k e s i t v e r y p o p u l a r a n d u s e f u l i n m a n y l a b o r a t o r i e s w o r l d w i d e . A C K N O W L E D G M E N T S T h i s s t u d y w a s p a r t i a l l y f i n a n c e d b y t h e I n s t i t u t o N a c i o n a l d e P e s q u i s a s d a A m a z ô n i a ( I N P A ) , M a n a u s , A M , B r a s i l , t h r o u g h t h e I n s t i t u t i o n a l P r o j e c t P r o g r a m m e ( P R J 1 2 . 0 1 ) . S p e c i a l t h a n k s t o t h e C o o r d e n a ç ã o d e A p e r f e i ç o a m e n t o d e P e s s o a l d e N í v e l S u p e r i o r ( C A P E S ) , B r a s í l i a , D F , B r a s i l a n d F u n d a ç ã o d e A m p a r o à P e s q u i s a d o E s t a d o d o A m a z o n a s ( F A P E A M ) , M a n a u s , A M , B r a s i l , f o r t h e M a s t e r o f S c i e n c e ( M S c ) s c h o l a r s h i p g i v e n t o A r l i s s o n S i l v a d e M o u r a . T h e a u t h o r s a r e i n d e b t e d t o M r P a u l o H e n r i q u e G u i m a r ã e s d e O l i v e i r a , C e n t r o d e P r e s e r v a ç ã o e P e s q u i s a s d e Q u e l ô n i o s A q u á t i c o s ( C P P Q A ) , P r e s i d e n t e F i g u e i r e d o , A M , B r a s i l , M r G i l m a r N i c o l a u K l e i n , I n s t i t u t o C h i c o M e n d e s d e C o n s e r v a ç ã o d a B i o d i v e r s i d a d e ( I C M B i o ) , P o r t o T r o m b e t a s , P A , B r a s i l , a n d M r N i c o l a S e b a s t i ã o T a n c r e d i , I n s t i t u t o B r a s i l e i r o d o M e i o A m b i e n t e e d o s R e c u r s o s N a t u r a i s R e n o v á v e i s ( I B A M A ) , S a n t a r é m , P A , B r a s i l , f o r t h e i r l o g i s t i c a l s u p p o r t , g u i d a n c e a n d e x t e n s i v e h e l p d u r i n g t h e c a t c h o f t h e t u r t l e s p e c i m e n s

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 3 3 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 i n t h e f i e l d . T h e a u t h o r s a r e a l s o m o s t g r a t e f u l t o M r s C r i s t i n a A l c â n t a r a d a S i l v a f o r h e r g e n e r o u s t e c h n i c a l a s s i s t a n c e i n t h e l a b o r a t o r y d u r i n g t h e e l e c t r o p h o r e s i s a n a l y s e s . R E F E R E N C E S A l f e n a s A C , P e t e r s I , B r u n e W a n d P a s s a d o r G C . 1 9 9 1 . E l e t r o f o r e s e d e p r o t e í n a s e i s o e n z i m a s d e f u n g o s e e s s ê n c i a s f l o r e s t a i s . U F V , V i ç o s a , M G . A l f i n i t o J . 1 9 7 5 . A p r e s e r v a ç ã o d a t a r t a r u g a a m a z ô n i c a . B r a s i l F l o r e s t a l 6 ( 2 1 ) : 2 0 - 2 3 . A l f i n i t o J , V i a n n a C M , S i l v a M M F a n d R o d r i g u e s H . 1 9 7 6 . T r a n s f e r ê n c i a d e t a r t a r u g a s d o r i o T r o m b e t a s p a r a o r i o T a p a j ó s . B r a s i l F l o r e s t a l 7 ( 2 6 ) : 4 9 - 5 3 . A l h o C J R . 1 9 8 5 . C o n s e r v a t i o n a n d m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s f o r c o m m o n l y e x p l o i t e d A m a z o n i a n t u r t l e s . B i o l C o n s e r v 3 2 : 2 9 1 - 2 9 8 . A l h o C J R a n d P á d u a L F M . 1 9 8 2 . R e p r o d u c t i v e p a r a m e t e r s a n d n e s t i n g b e h a v i o r o f t h e A m a z o n t u r t l e P o d o c n e m i s e x p a n s a ( T e s t u d i n a t a , P e l o m e d u s i d a e ) i n B r a z i l . C a n J Z o o l 6 0 : 9 7 - 1 0 3 . A l l e n d o r f F W a n d L u i k a r t G . 2 0 0 7 . C o n s e r v a t i o n a n d t h e g e n e t i c s o f p o p u l a t i o n s . B l a c k w e l l P u b l i s h i n g . M a l d e n , M A , O x f o r d . A l l e n d o r f F W , M i t c h e l l N , R y m a n N a n d S t å h l G . 1 9 7 7 . I s o z y m e l o c i i n b r o w n t r o u t ( S a l m o t r u t l a L . ) : d e t e c t i o n a n d i n t e r p r e t a t i o n f r o m p o p u l a t i o n d a t a . H e r e d i t a s 8 6 : 1 7 9 - 1 9 0 . A l v e s R R N a n d S a n t a n a G G . 2 0 0 8 . U s e a n d c o m m e r c i a l i z a t i o n o f P o d o c n e m i s e x p a n s a ( S c h w e i g e r 1 8 1 2 ) ( T e s t u d i n e s : P o d o c n e m i d i d a e ) f o r m e d i c i n a l p u r p o s e s i n t w o c o m m u n i t i e s i n N o r t h o f B r a z i l . J E t h n o b i o l E t h n o m e d 4 : 1 - 6 . A n d e r s o n N L a n d A n d e r s o n N G . 2 0 0 2 . T h e h u m a n p l a s m a p r o t e o m e h i s t o r y , c h a r a c t e r a n d d i a g n o s t i c p r o s p e c t s . M o l C e l l P r o t e o m i c s 1 : 8 4 5 - 8 6 7 . A y a l a F J a n d K i g e r J r . J A . 1 9 8 0 . M o d e r n G e n e t i c s . T h e B e n j a m i n s / C u m m i n g s P u b l i s h i n g C o m p a n y , I n c . , M e n l o P a r k , C a l i f o r n i a . B a t e s H W . 1 8 6 3 . T h e n a t u r a l i s t o n t h e r i v e r A m a z o n s . M u r r a y , L o n d o n . B a t i s t a R P a n d S o l é - C a v a A M . 2 0 0 5 . B a i x a d i f e r e n c i a ç ã o g e n é t i c a e n t r e p o p u l a ç õ e s d e p e i x e - b a t a t a ( L o p h o l a t i l u s v i l l a r i i M i r a n d a - R i b e i r o , 1 9 1 5 ) a o n o r t e e s u l d o B a n c o d o s A b r o l h o s , B r a s i l . I n : C o s t a , P . A . S . , M a r t i n s , A . S . , O l a v o , G . ( E d s . ) . P e s c a e p o t e n c i a i s d e e x p l o r a ç ã o d e r e c u r s o s v i v o s n a r e g i ã o c e n t r a l d a Z o n a E x c l u s i v a b r a s i l e i r a . M u s e u N a c i o n a l , R i o d e J a n e i r o . 2 4 1 - 2 4 7 . B e i g u e l m a n B . 2 0 0 8 . G e n é t i c a d e p o p u l a ç õ e s h u m a n a s . S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e G e n é t i c a , R i b e i r ã o P r e t o . B i c k h a m J W , I v e r s o n J B , P a r h a m J F , P h i l i p p e n H D , R h o d i n A G J , S h a f f e r H B , S p i n k s P Q a n d D i j k P P . 2 0 0 7 . A n a n n o t a t e d l i s t o f m o d e r n t u r t l e t e r m i n a l t a x a w i t h c o m m e n t s o n a r e a s o f t a x o n o m i c i n s t a b i l i t y a n d r e c e n t c h a n g e T u r t l e t a x o n o m y w o r k i n g g r o u p . C h e l o n i a n R e s e a r c h M o n o g r a p h s 4 : 1 7 3 - 1 9 9 . B i l l i n g t o n N . 1 9 9 6 . G e n e t i c m a r k e r s a n d s t o c k i d e n t i f i c a t i o n . I n : S u m m e r f e l t , R . C ( E d . ) . T h e w a l l e y e c u l t u r e m a n u a l . N C R A C C u l t u r e S e r i e s 1 0 1 . N o r t h C e n t r a l R e g i o n a l A q u a c u l t u r e C e n t e r P u b l i c a t i o n s O f f i c e . I o w a S t a t e U n i v e r s i t y , A m e s . 3 2 3 3 3 0 . B o c k B C , P á e z V P a n d W h i t e M M . 2 0 0 1 . G e n e t i c p o p u l a t i o n s t r u c t u r e o f t w o t h r e a t e n e d S o u t h A m e r i c a n r i v e r t u r t l e s p e c i e s , P o d o c n e m i s e x p a n s a a n d P o d o c n e m i s u n i f i l i s . C h e l o n i a n C o n s e r v B i 4 : 4 7 - 5 2 . B o e t t c h e r E W , K i s t l e r P a n d N i t s c h m a n n H S . 1 9 5 8 . M e t h o d o f i s o l a t i n g t h e β 1 m e t a l - c o m b i n i n g g l o b u l i n f r o m h u m a n b l o o d p l a s m a . N a t u r e 1 8 1 : 4 9 0 - 4 9 1 .

3 3 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 C h a k r a b o r t y R , F u e r s t P A a n d N e i M . 1 9 8 0 . S t a t i s t i c a l s t u d i e s o n p r o t e i n p o l y m o r p h i s m i n n a t u r a l p o p u l a t i o n s . I I I . D i s t r i b u t i o n o f a l l e l e f r e q u e n c i e s a n d t h e n u m b e r o f a l l e l e s p e r l o c u s . G e n e t i c s 9 4 : 1 0 3 9 - 1 0 6 3 . C i s n e r o s - H e r e d i a D F . 2 0 0 6 . T u r t l e s o f t h e T i p u t i n i B i o d i v e r s i t y S t a t i o n w i t h r e m a r k s o n t h e d i v e r s i t y a n d d i s t r i b u t i o n o f t h e T e s t u d i n e s f r o m E c u a d o r . B i o t a N e o t r o p 6 ( 1 ) : 1 1 - 2 3 . D i a s L A S . 1 9 9 8 . V a r i â n c i a d e f r e q u ê n c i a s a l é l i c a s . I n : A l f e n a s , A . C . ( E d . ) . E l e t r o f o r e s e d e i s o e n z i m a s e p r o t e í n a s a f i n s f u n d a m e n t o s e a p l i c a ç õ e s e m p l a n t a s e m i c r o r g a n i s m o s . U F V , V i ç o s a . 3 8 1 - 4 0 4 . D u r a n d P , M i c h a l a k i s Y , C e s t i e r S , O u r y B , L e c l e r c M C , T i b a y r e n c M a n d R e n a u d F . 2 0 0 3 . S i g n i f i c a n t l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u m a n d h i g h g e n e t i c d i v e r s i t y i n a p o p u l a t i o n o f P l a s m o d i u m f a l c i p a r u m f r o m a n a r e a ( R e p u b l i c o f t h e C o n g o ) h i g h l y e n d e m i c f o r m a l a r i a . A m J T r o p M e d H y g 6 8 ( 3 ) : 3 4 5 - 3 4 9 . E r d o ğ a n M a n d Ö z b e y a z C . 2 0 0 4 . I n v e s t i g a t i o n o f B l o o d P r o t e i n P o l y m o r p h i s m a n d E s t i m a t i o n o f G e n e t i c D i s t a n c e s i n S o m e D o g B r e e d s i n T u r k e y . T u r k J V e t A n i m S c i 2 8 : 5 8 3 - 5 9 0 . F e r g u s o n A . 1 9 8 0 . B i o c h e m i c a l s y s t e m a t i c s a n d e v o l u t i o n . B l a c k i e , G l a s g o w a n d L o n d o n . F e r g u s o n A , T a g g a r t J B , P r o d h ö h l P A , M c M e e l O , T h o m p s o n C , S t o n e C , M c G i n n i t y P a n d H y n e s R A . 1 9 9 5 . T h e a p p l i c a t i o n o f m o l e c u l a r m a r k e r s t o t h e s t u d y a n d c o n s e r v a t i o n o f f i s h p o p u l a t i o n s , w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o S a l m o . J F i s h B i o l ( S u p p p l e m e n t A ) 4 7 : 1 0 3 - 1 2 6 . F e r r a r i n i S A . 1 9 8 0 . Q u e l ô n i o s : A n i m a i s e m E x t i n ç ã o . F a l a n g o l a , M a n a u s . F e r r e i r a J ú n i o r P D . 2 0 0 3 . I n f l u ê n c i a d o s p r o c e s s o s s e d i m e n t o l ó g i c o s e g e o m o r f o l ó g i c o s n a e s c o l h a d a s á r e a s d e n i d i f i c a ç ã o d e P o d o c n e m i s e x p a n s a ( t a r t a r u g a - d a - a m a z ô n i a ) e P o d o c n e m i s u n i f i l i s ( t r a c a j á ) , n a b a c i a d o r i o A r a g u a i a . P h . D . T h e s i s , U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e O u r o P r e t o , E s c o l a d e M i n a s , O u r o P r e t o , M G , B r a z i l . F e r r e i r a J ú n i o r P D a n d C a s t r o P T A . 2 0 0 3 . G e o l o g i c a l c o n t r o l o f P o d o c n e m i s e x p a n s a a n d P o d o c n e m i s u n i f i l i s n e s t i n g A r e a s i n R i o J a v a é s , B a n a n a l I s l a n d , B r a z i l . A c t a A m a z o n i c a 3 3 ( 3 ) : 4 4 5 - 4 6 8 . F r a n k h a m R , B a l l o u J D a n d B r i s c o e D A . 2 0 0 2 . I n t r o d u c t i o n t o c o n s e r v a t i o n g e n e t i c s . C a m b r i d g e U n i v e r i t y P r e s s , C a m b r i d g e , U K . F r a n k h a m R , B a l l o u J D a n d B r i s c o e D A . 2 0 0 8 . F u n d a m e n t o s d a g e n é t i c a d a c o n s e r v a ç ã o . E d i t o r a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e G e n é t i c a , R i b e i r ã o P r e t o . F u t u y m a D J . 1 9 9 7 . B i o l o g i a e v o l u t i v a . S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e G e n é t i c a , 3 ª E d . , R i b e i r ã o P r e t o . G i l l e s p i e J H . 1 9 9 8 . P o p u l a t i o n G e n e t i c s . T h e J o h n s H o p k i n e U n i v e r s i t y P r e s s , B a l t i m o r e . G i l m o r e R M . 1 9 8 6 . F a u n a e e t n o z o o l o g i a d a A m é r i c a d o S u l t r o p i c a l . I n : R i b e i r o , B . G . ( E d ) . S u m a E t n o l ó g i c a B r a s i l e i r a . V o z e s , P e t r ó p o l i s . 1 8 9 - 2 3 3 . H a r t l D L . 2 0 0 8 . P r i n c í p i o s d e g e n é t i c a d e p o p u l a ç ã o . T h i r d E d i t i o n . E d i t o r a F U N P E C , R i b e i r ã o P r e t o , S P . I B A M A . 1 9 8 9 . I n s t i t u t o B r a s i l e i r o d o M e i o A m b i e n t e e d o s R e c u r s o s N a t u r a i s R e n o v á v e i s . P r o j e t o s Q u e l ô n i o s d a A m a z ô n i a 1 0 A n o s . I B A M A , B r a s í l i a . I v e r s o n J B . 1 9 9 2 . A r e v i s e d c h e c k l i s t w i t h d i s t r i b u t i o n m a p s o f t h e t u r t l e s o f t h e w o r l d . E a r l h a m C o l l e g e , R i c h m o n d , I n d i a n a . J a m i e s o n A a n d T u r n e r R J . 1 9 7 8 . T h e e x t e n d e d s e r i e s o f T f a l l e l e s i n A t l a n t i c c o d , G a d u s m o r h u a . I n : B a t t a g l i a B . , B e a r d m o r e J . A . ( E d s ) . M a r i n e O r g a n i s m s : g e n e t i c s e c o l o g y a n d e v o l u t i o n , N A T O C o n f e r e n c e S e r i e s I V : M a r i n e S c i e n c e s , N o . 2 . P l e n u m P r e s s , N e w Y o r k & L o n d o n . 6 9 9 - 7 2 9 .

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 3 5 K u z m i n E V a n d K u z m i n a O Y . 2 0 0 5 . P o p u l a t i o n a n a l y s i s o f e l e c t r o p h o r e t i c v a r i a t i o n i n b l o o d s e r u m a l b u m i n s o f E u r o p e a n ( A c i p e n c e r r u t h e n s i s L . ) a n d S i b e r i a n ( A . r u t h e n s i s m a r s i g l i i B r a n d t ) s t e r l e t . R u s s J G e n e t 4 1 ( 2 ) : 2 4 6 - 2 5 3 . M a n w e l l C a n d B a k e r C . M . 1 9 7 0 . M o l e c u l a r B i o l o g y a n d t h e o r i g i n o f s p e c i e s . S i d g w i c k & J a c k s o n , L o n d o n . M i l l e r M P . 1 9 9 7 . T o o l s f o r P o p u l a t i o n G e n e t i c A n a l y s e s ( T F P G A ) 1 . 3 : A W i n d o w s p r o g r a m f o r t h e a n a l y s i s o f a l l o z y m e a n d m o l e c u l a r p o p u l a t i o n g e n e t i c d a t a . C o m p u t e r s o f t w a r e d i s t r i b u t e d b y a u t h o r . M i t t e r m e i e r R A . 1 9 7 8 . S o u t h A m e r i c a s r i v e r t u r t l e s : s a v i n g t h e m b y u s e . O r y x 1 4 ( 3 ) : 2 2 2 - 2 3 0 . M i t t e r m e i e r R A , M e d e m F a n d R h o d i n A G J . 1 9 8 0 . V e r n a c u l a r n a m e s o f S o u t h A m e r i c a n t u r t l e s . S o c i e t y f o r S t u d y o f A m p h i b i a n s a n d R e p t i l e s . H e r p e t o l o g i c a l C i r c u l a r 9 : 1 2 . M o u r a A S , O l i v e i r a P H G , K l e i n G N , T a n c r e d i N S , S i l v a C A a n d T e i x e i r a A S . 2 0 1 1 . T e m p o r a l d i s t r i b u t i o n o f t h e t r a n s f e r r i n a l l e l e s ( T f a a n d T f b ) i n A m a z o n t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 ) . J R e s B i o l . , 5 : 3 4 6 - 3 5 1 . N C - I U B M B . 2 0 0 9 . N o m e n c l a t u r e C o m m i t t e e o f t h e I n t e r n a t i o n a l U n i o n o f B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y . A v a i l a b l e i n < h t t p : / / w w w . c h e m . q m u l . a c . u k / i u b m b / e n z y m e / i n d e x . h t m l > . A c e s s e d o n : 2 0 M a y 2 0 0 9 . N e i M . 1 9 7 3 . A n a l y s i s o f g e n e d i v e r s i t y i n s u b d i v i d e d p o p u l a t i o n s . P r o c N a t l A c a d S c i U S A 7 0 : 3 3 2 1 - 3 3 2 3 . N e i M . 1 9 7 5 . M o l e c u l a r p o p u l a t i o n g e n e t i c s a n d e v o l u t i o n . N o r t h - H a l l a n d , A m s t e r d a m a n d N e w Y o r k . N e i M . 1 9 7 8 . E s t i m a t i o n o f a v e r a g e h e t e r o z y g o s i t y a n d g e n e t i c d i s t a n c e f r o m a s m a l l n u m b e r o f i n d i v i d u a l s . G e n e t i c s 8 9 : 5 8 3 - 5 9 0 . N e v o E , B e n - S h l o m o R , a n d L a v i e B . 1 9 8 4 . M e r c u r y s e l e c t i o n o f a l l o z y m e s i n m a r i n e o r g a n i s m s : P r e d i c t i o n a n d v e r i f i c a t i o n i n n a t u r e . P r o c N a t l A c a d S c i U S A 8 1 : 1 2 5 8 - 1 2 5 9 . N i k i f o r o v S M a n d Z v y a g i n t s e v A Y . 2 0 0 8 . A l l o z y m e d i v e r s i t y a m o n g l o c a l p o p u l a t i o n s o f t h e p a c i f i c M u s s e l M y t i l u s t r o s s u l u s ( B i v a l v i a : M y t i l i d a e ) f r o m p o l l u t e d a r e a s o f P e t e r t h e G r e a t b a y ( S e a o f J a p a n ) . R u s s J M a r B i o l . , 3 4 ( 1 ) : 4 5 - 5 0 . P a n t o j a - L i m a J . 2 0 0 7 . A s p e c t o s d a B i o l o g i a R e p r o d u t i v a d e P o d o c n e m i s e x p a n s a S c h w e i g g e r , 1 8 1 2 , P o d o c n e m i s s e x t u b e r c u l a t a C o r n a l i a , 1 8 4 9 e P o d o c n e m i s u n i f i l i s T r o s c h e l , 1 8 4 8 ( T e s t u d i n e s , P o d o c n e m i d i d a e ) n a R e s e r v a B i o l ó g i c a d o A b u f a r i , A m a z o n a s , B r a s i l . M a s t e r T h e s i s , I n s t i t u t o N a c i o n a l d e P e s q u i s a d a A m a z ô n i a / U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d o A m a z o n a s , M a n a u s , A M , B r a z i l . P e a r s e D E , A r n d t A D , V a l e n z u e l a N , M i l l e r B A , C a n t a r e l l i V a n d S i t e s J r . J W . 2 0 0 6 . E s t i m a t i n g p o p u l a t i o n s t r u c t u r e u n d e r n o n e q u i l i b r i u m c o n d i t i o n s i n a c o n s e r v a t i o n c o n t e x t : c o n t i n e n t - w i d e p o p u l a t i o n g e n e t i c s o f t h e g i a n t A m a z o n r i v e r t u r t l e , P o d o c n e m i s e x p a n s a ( C h e l o n i a : P o d o c n e m i d i d a e ) . M o l E c o l . , 1 5 : 9 8 5 - 1 0 0 6 . P r i t c h a r d P C H a n d T r e b b a u P . 1 9 8 4 . T h e T u r t l e s o f V e n e z u e l a . S o c i e t y f o r t h e s t u d y o f A m p h i b i a n s a n d R e p t i l e s , C o n t r i b u t i o n s i n H e r p e t o l o g y 2 . F u n d a c i ó n d e I n t e r n a d o s R u r a l e s , C a r a c a s , V e n e z u e l a . R a y m o n d M a n d R o u s s e t F . 1 9 9 5 . A n e x a c t t e s t f o r p o p u l a t i o n d i f f e r e n t i a t i o n . E v o l u t i o n 4 9 : 1 2 8 0 - 1 2 8 3 . R e d f o r d K H a n d R o b i n s o n J G . 1 9 9 1 . S u b s i s t e n c e a n d c o m m e r c i a l u s e s o f w i l d l i f e . I n : R o b i n s o n , J . G . , R e d f o r d , K . H . ( E d s ) . N e o t r o p i c a l w i l d l i f e u s e a n d c o n s e r v a t i o n . C h i c a g o , U n i v e r s i t y o f C h i c a g o P r e s s . 7 - 2 3 .

3 3 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 R i d g w a y G J , S h e r b u n e S W a n d L e w i s R D . 1 9 7 0 . P o l y m o r p h i s m i n t h e e s t e r a s e s o f A t l a n t i c h e r r i n g . T A m F i s h S o c . , 9 9 : 1 4 7 - 1 5 1 . R i d g w a y T . 2 0 0 5 . A l l o z y m e e l e c t r o p h o r e s i s s t i l l r e p r e s e n t s a p o w e r f u l t e c h n i q u e i n t h e m a n a g e m e n t o f c o r a l r e e f s . B i o d i v e r s C o n s e r v . , 1 4 : 1 3 5 - 1 4 9 . R o b i n s o n I P . 1 9 9 8 . A l o e n z i m a s n a g e n é t i c a d e p o p u l a ç õ e s d e p l a n t a s . I n : A l f e n a s , A . C . ( E d . ) . E l e t r o f o r e s e d e i s o e n z i m a s e p r o t e í n a s a f i n s f u n d a m e n t o s e a p l i c a ç õ e s e m p l a n t a s e m i c r o r g a n i s m o s . U F V , V i ç o s a . 3 2 9 - 3 8 0 . R o g e r s J S . 1 9 7 2 . M e a s u r e s o f g e n e t i c s i m i l a r i t y a n d g e n e t i c d i s t a n c e . I n : S t u d i e s i n G e n e t i c s V I I , U n i v e r s i t y o f T e x a s , A u s t i n , T X , U S A . P u b l i c a t i o n 7 2 1 3 : 1 4 5 - 1 5 4 . S a n t o s J M M , M a i a J F , T a d e i W P a n d R o d r i g u e z G A D . 2 0 0 3 . I s o e n z y m a t i c v a r i a b i l i t y a m o n g f i v e A n o p h e l e s s p e c i e s b e l o n g i n g t o t h e N y s s o r h y n c h u s a n d A n o p h e l e s S u b g e n e r a o f t h e A m a z o n R e g i o n , B r a z i l . M e m I O s w a l d o C r u z 9 8 ( 2 ) : 2 4 7 - 2 5 3 . S c a l t s o y i a n n e s A . 1 9 9 9 . A l l o z y m e d i f f e r e n t i a t i o n a n d p h y l o g e n y o f C e d a r s p e c i e s . S i l v a e G e n e t 4 8 ( 2 ) : 6 1 - 6 8 . S c a r p a s s a V M a n d T a d e i W P . 2 0 0 0 . E n z y m a t i c a n a l y s i s i n A n o p h e l e s n u n e z t o v a r i G a b a l d ó n ( D i p t e r a , C u l i c i d a e ) . R e v B r a s B i o l . , 6 0 ( 4 ) : 5 3 9 - 5 5 0 . S c r i b n e r K T , E v a n s E J , M o r r e a l e S J , S m i t h M H , a n d G i b b o n s J W . 1 9 8 6 . G e n e t i c d i v e r g e n c e a m o n g P o p u l a t i o n s o f t h e Y e l l o w - b e l l i e d S l i d e r t u r t l e ( P s e u d e m y s s c r i p t a ) s e p a r a t e d b y a q u a t i c a n d t e r r e s t r i a l h a b i t a t s . C o p e i a 3 : 6 9 1 - 7 0 0 . S h a w C R a n d P r a s a d R . 1 9 7 0 . S t r a r c h g e l e l e c t r o p h o r e s i s o f e n z y m e s A c o m p i l a t i o n o f r e c i p e s . B i o c h e m G e n e t . , 4 : 2 9 7 - 3 2 0 . S i m o n J C a n d H e b e r t P N . 1 9 9 5 . P a t t e r n s o f g e n e t i c v a r i a t i o n a m o n g C a n a d i a n p o p u l a t i o n s o f t h e b i r d c h e r r y - o a t a p h i d , R h o p a l o s i p h u m p a d i L . ( H o m o p t e r a : A p h i d i d a e ) . H e r e d i t y 7 4 : 4 6 - 3 5 . S i t e s J r . J W , F r i t z s i m m o n s N N , d a S i l v a J r . N J a n d C a n t a r e l l i V H . 1 9 9 9 . C o n s e r v a t i o n g e n e t i c s o f t h e g i a n t A m a z o n r i v e r t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a : P e l o m e d u s i d a e ) - I n f e r e n c e s f r o m t w o c l a s s e s o f m o l e c u l a r m a r k e r s . C h e l o n i a n C o n s e r v B i 3 : 4 5 4 - 4 6 3 . S m i t h N J H . 1 9 7 4 . D e s t r u c t i v e e x p l o i t a t i o n o f t h e S o u t h A m e r i c a n r i v e r t u r t l e . A P C G Y e a r b o o k 3 6 : 8 5 - 1 0 2 . S m i t h N J H . 1 9 7 9 . A q u a t i c t u r t l e s o f A m a z o n i a : a n e n d a n g e r e d r e s o u r c e . B i o l C o n s e r v . , 1 6 : 1 6 5 - 1 7 6 . S m i t h P J , F r a n c i s R I C C a n d J a m i e s o n A . 1 9 8 1 . A n e x c e s s o f h o m o z y g o t e s a t a s e r u m e s t e r a s e l o c u s i n t h e A t l a n t i c m a c k e r e l S c o m b e r s c o m b r u s . A n i m B l o o d G r o u p s B i o c h e m G e n e t 1 2 : 1 7 1 - 1 8 0 . S o l f e r i n i V N a n d S e l i v o n D . 2 0 0 1 . P o l i m o r f i s m o s d e i s o z i m a s . I n : M a t i o l i , S . R . ( E d . ) . B i o l o g i a M o l e c u l a r e E v o l u ç ã o . H o l o s , E d i t o r a , R i b e i r ã o P r e t o , S P . 1 3 7 - 1 4 2 . S u j a t h a , K , I s w a r y a D e e p t i , V A a n d S h r i k a n y a , K V L . 2 0 1 1 . A l l o z y m e e l e c t r o p h o r e t i c s t u d i e s i n f o u r s p e c i e s o f g r o u p e r s ( P i s c e s : S e r r a n i d a e ) r e p r e s e n t e d i n t h e c o m m e r c i a l f i s h e r y o f V i s a k h a p a t n a m I n d i a . I n d i a n J o u r n a l o f G e o - M a r i n e S c i e n c e s ( I J M S ) 4 0 ( 3 ) : 3 6 5 - 3 7 1 . S w o f f o r d D L , S e l a n d e r R B a n d B l a c k W . C . 1 9 9 7 . B I O S Y S - 2 : A c o m p u t e r p r o g r a m f o r t h e a n a l y s i s o f a l l e l i c v a r i a t i o n i n p o p u l a t i o n s g e n e t i c s a n d b i o c h e m i c a l s y s t e m a t i c s . I l l i n o i s N a t u r a l H i s t o r y S u r v e y , I L , U S A . T a o J , Q i n Z - Q , T a o Y , W e n L , S h u X - S , W a n g Z - C , L i u X - W , L i W - J a n d H u W - X . 2 0 0 7 . G e n e t i c r e l a t i o n s h i p s a m o n g C h i n e s e p i g s a n d o t h e r p i g p o p u l a t i o n s f r o m H u n a n P r o v i n c e , C h i n a . A n i m G e n e t 3 8 : 4 1 7 - 4 2 0 . T e i x e i r a A S , J a m i e s o n A , R a p o s o J C P a n d V i e i r a A A . 1 9 9 6 . T r a n s f e r r i n p o l y m o r p h i s m i n A m a z o n T u r t l e

T e i x e i r a a n d M o u r a , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 4 ) : 3 1 5 - 3 3 7 3 3 7 ( P o d o c n e m i s e x p a n s a ) s t o c k s . B r a z J G e n e t 1 9 : 5 5 9 - 5 6 4 . V a l e n z u e l a N . 2 0 0 1 . G e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n a m o n g n e s t i n g b e a c h e s i n t h e h i g h l y m i g r a t o r y g i a n t r i v e r t u r t l e ( P o d o c n e m i s e x p a n s a ) f r o m C o l o m b i a . H e r p e t o l o g i c a 5 7 : 4 8 - 5 7 . V e a s e y E A , C a r d i n D , S i l v a R M , B r e s s a n E A a n d V e n c o v s k y R . 2 0 0 8 . A s s e s s i n g t h e g e n e t i c s t r u c t u r e o f O r y z a g l u m a e p a t u l a p o p u l a t i o n s w i t h i s o z y m e m a r k e r s . B r a z A r c h B i o l T e c h . , 5 1 ( 5 ) : 8 7 3 - 8 8 2 . V e r s p o o r E , B e a r d m o r e J A , C o n s u e g r a S , G a r c í a d e L e á n i z C , H i n d a r K , J o r d a n W C , K o l j o n e n M - L , M a h k r o v A A , P a a v e r T , S á n c h e z J A , S k a a l a Ø , T i t o v S a n d C r o s s T F ( 2 0 0 5 ) . P o p u l a t i o n s t r u c t u r e i n t h e A t l a n t i c s a l m o n : i n s i g h t s f r o m 4 0 y e a r s o f r e s e a r c h i n t o g e n e t i c p r o t e i n v a r i a t i o n . J F i s h B i o l . , 6 7 : 3 - 5 4 . V o g t R C . 2 0 0 8 . T a r t a r u g a s d a A m a z ô n i a . G r á f i c a B i b l o s , L i m a , P e r u . W e t t e r b e r g G B , F e r r e i r a M , B r i t o W L S a n d A r a u j o V C . 1 9 7 6 . E s p é c i e s d a f a u n a a m a z ô n i c a p o t e n c i a l m e n t e p r e f e r i d a s p a r a c o n s u m o n o s r e s t a u r a n t e s d e M a n a u s . B r a s i l F l o r e s t a l 7 ( 2 5 ) : 5 9 - 6 8 . W o r k m a n P L a n d N i s w a n d e r J D . 1 9 7 0 . P o p u l a t i o n s t u d i e s o n s o u t h w e s t e r n I n d i a n t r i b e s . I I . L o c a l g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n i n t h e P a p a g o . A m J H u m G e n e t . , 2 2 : 2 4 - 4 9 . W r i g h t S . 1 9 2 1 . S y s t e m s o f m a t i n g . I I . T h e e f f e c t s o f i n b r e e d i n g o n t h e g e n e t i c c o m p o s i t i o n o f a p o p u l a t i o n . G e n e t i c s 6 : 1 1 1 - 1 2 3 . W r i g h t S . 1 9 5 1 . T h e g e n e t i c a l s t r u c t u r e o f p o p u l a t i o n s . A n n a l s o f E u g e n i c 1 5 : 3 9 5 - 4 2 0 . W r i g h t S . 1 9 7 8 . E v o l u t i o n a n d t h e g e n e t i c s o f p o p u l a t i o n s , v o l . 4 . V a r i a b i l i t y w i t h i n a n d a m o n g n a t u r a l p o p u l a t i o n s . U n i v e r s t y o f C h i c a g o P r e s s , C h i c a g o . Y e h F C , Y a n g R C a n d B o y l e T . 1 9 9 9 . P o p g e n e v e r s i o n 1 . 3 2 . M i c r o s o f t W i n d o w s - b a s e d F r e e w a r e f o r P o p u l a t i o n G e n e t i c A n a l y s i s . Q u i c k U s e r G u i d e . C e n t e r f o r I n t e r n a t i o n a l F o r e s t r y R e s e a r c h , U n i v e r s i t y o f A l b e r t a . Y i ğ i t N , K a n k i l i ç T , Ç o l a k R , Ç o l a k E , G a t t e r m a n n R , N e u m a n n K , Ö z k u r t Ş a n d G h a r k h e l o o M . M . 2 0 0 7 . A l l o z y m e v a r i a t i o n s a n d g e n e t i c d i f f e r e n t i a t i o n i n M e s o c r i c e t u s b r a n d t i N e h r i n g , 1 8 9 8 a n d M a s o c r i c e t u s a u r a t u s ( W a t e r h o u s e , 1 8 3 9 ) ( M a m m a l i a : R o d e n t i a ) . T u r k J Z o o l . , 3 1 : 2 1 9 - 2 2 7 . Z a w a d z k i C H , R e n e s t o E , P e r e s M D a n d P a i v a S . 2 0 0 8 . A l l o z y m e v a r i a t i o n a m o n g t h r e e p o p u l a t i o n s o f t h e a r m o r e d c a t f i s h H y p o s t o m u s r e g a n i ( I h e r i n g , 1 9 0 5 ) ( S i l u r i f o r m e s , L o r i c a r i i d a e ) f r o m t h e P a r a n á a n d P a r a g u a y r i v e r b a s i n s , B r a z i l . G e n e t M o l B i o l . , 3 1 ( 3 ) : 7 6 7 - 7 7 1 . Z e i d l e r M . 2 0 0 0 . E l e c t r o p h o r e t i c a n a l y s i s o f p l a n t i s o z y m e s . A c t a U n i v P a l a c k i O l o m u c F a c R N a t 3 8 : 7 - 1 6 . S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g Y o u r e t a i n y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / S u b m i t . p h p .