J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y E f f e c t o f f e e d i n g f r e q u e n c y o n g r o w t h p e r f o r m a n c e s a n d s u r v i v a l o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s K e y w o r d s : F e e d i n g f r e q u e n c y , g r o w t h p e r f o r m a n c e s , s u r v i v a l , R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s . A B S T R A C T : F e e d m a n a g e m e n t p l a y s a m a j o r r o l e i n t h e e c o n o m i c a l a n d e n v i r o n m e n t a l s t a t u s o f f i s h f a r m s . O p t i m u m f e e d i n g f r e q u e n c y s e e m s t o b e d e p e n d e n t o n f i s h s i z e a n d h i g h e r f r e q u e n c y o f f e e d i n g w a s f o u n d t o b e a d v a n t a g e o u s f o r h i g h e r g r o w t h a n d s u r v i v a l i n y o u n g e r a g e g r o u p s . T h e f i s h e s s h o u l d h a v e t h e a c c e s s t o f e e d u p t o s a t i a t i o n f o r t h e i r o p t i m u m g r o w t h . T h i s e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d f o r s i x w e e k s a t f o u r t r e a t m e n t s a n d t h r e e r e p l i c a t i o n s a s f o l l o w s : T r e a t m e n t A : O n e t i m e a d a y a t 8 : 0 0 h , t r e a t m e n t B : T w o t i m e s a d a y a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 h , t r e a t m e n t C : T h r e e t i m e s a d a y a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 , 1 6 : 0 0 h a n d t r e a t m e n t D : F o u r t i m e s a d a y f o r f e e d i n g a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 , 1 6 : 0 0 , 2 0 : 0 0 h . G i v e n t h e i m p o r t a n c e o f t h e p h y s i c a l a n d c h e m i c a l f a c t o r s a n d t h e i r i m p a c t o n w a t e r s u p p l y a n d u l t i m a t e l y t h e f i s h g r o w t h , t h e s e f a c t o r s w e r e s o c o n t r o l l e d t h r o u g h t h e e x p e r i m e n t t h a t t h e a m o u n t o f d i s s o l v e d o x y g e n w a s f i x e d o n 5 . 5 - 6 p p m , t h e t e m p e r a t u r e 2 6 ± 2 0 C a n d p H 7 . 5 t o 8 . R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s w e r e f e d d u r i n g t h e e x p e r i m e n t a l p e r i o d w i t h S F K f e e d s t a f f c o n t a i n i n g : 8 . 7 % m o i s t u r e , 1 1 . 2 % a s h , 3 2 % p r o t e i n a n d 1 0 . 5 % f a t . F e e d i n g r a t e w a s 1 0 % o f t o t a l b o d y w e i g h t o f f i n g e r l i n g s . A c c o r d i n g t o t h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y , i t w a s s h o w n t h a t f e e d i n g f r e q u e n c y n o a f f e c t b o d y w e i g h t a n d l e n g t h g a i n o f f i s h a n d t h e r e i s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h e r a t e o f F C R , B W I % , S G R , G R a n d C F ( p < 0 . 0 5 ) . R e s u l t o f t h i s s t u d y s h o w e d t h a t i n c r e a s i n g o f f e e d i n g f r e q u e n c y t h e r e i s n ’ t e f f e c t o n g r o w t h a n d s u r v i v a l i n R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s . 2 0 0 - 2 0 5 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 3 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f F i s h e r y , B a n d a r G a z B r a n c h , I s l a m i c A z a d U n i v e r s i t y , B a n d a r G a z , I r a n . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . E m a i l : M a i j d _ m _ s h @ b a n d a r g a z i a u . a c . i r . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 2 1 2 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 1 0 M a r 2 0 1 2 / A c c e p t e d : 2 2 M a r 2 0 1 2 / P u b l i s h e d : 0 4 A p r 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . E f f e c t o f f e e d i n g f r e q u e n c y o n g r o w t h p e r f o r m a n c e s a n d s u r v i v a l o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 2 0 0 - 2 0 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h

I N T R O D U C T I O N R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s b e l o n g s t o C y p r i n i d a e i s o n e o f t h e m o s t e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t a n d v a l u a b l e t e l o s t e i i n t h e C a s p i a n S e a . T h i s k i n d o f f i s h e x i s t i n t h e s o u t h e r n p a r t o f t h e C a s p i a n S e a e s p e c i a l l y I r a n ' s s h o r e s . A p p r o x i m a t e l y t w o t h i r d o f t h e s e m i a r t i f i c i a l p r o p a g a t i o n i n G o l e s t a n p r o v i n c e w a s d o n e . F i s h i s t h e m a j o r s o u r c e o f p r o t e i n f o r o v e r o n e b i l l i o n p e o p l e a r o u n d t h e w o r l d ( R a m e s h g u r u e t a l . , 2 0 1 1 ) . U n d e r s t a n d i n g o f n a t u r a l f o o d s a n d d i e t a r y h a b i t s o f f i s h c u l t u r e c o u l d b e a n i m p o r t a n t f a c t o r i n p r o v i d i n g e f f e c t i v e m e t h o d o f n u t r i t i o n . A l t h o u g h i n t e n s i v e f i s h c u l t u r e a d a p t a b i l i t y o f t h e s p e c i e s w i t h d i f f e r e n t f e e d i n g m e t h o d s h a v e b e e n p r o v e n , b u t t h e c h o i c e o f m e t h o d s t o p r o v i d e f o o d a n d n u t r i t i o n i n a q u a c u l t u r e s h o u l d b e c o n s i d e r e d d i e t a r y a t p a t t e r n s o f n o r m a l b e h a v i o r ( A f s h a r M a z a n d a r a n , 2 0 0 2 ) . I n r e s u l t , u n d e r s t a n d i n g t h e n u t r i t i o n a l q u a l i t i e s o f f i s h e s a r e v e r y i m p o r t a n t . F i s h f e e d i n g i s o n e o f t h e m o s t i m p o r t a n t f a c t o r s i n c o m m e r c i a l f i s h f a r m i n g b e c a u s e f e e d i n g r e g i m e m a y h a v e c o n s e q u e n c e s o n b o t h g r o w t h e f f i c i e n c y a n d f e e d w a s t a g e ( T s e v i s e t a l . , 1 9 9 2 ; A z z a y d i e t a l . , 2 0 0 0 ) . T h e g r o w t h o f f i s h a t a l l s t a g e s i s l a r g e l y g o v e r n e d b y t h e k i n d o f f o o d , r a t i o n , f e e d i n g f r e q u e n c y , f o o d i n t a k e a n d i t s a b i l i t y t o a b s o r b t h e n u t r i e n t s . A m o n g t h e s e , f e e d i n g f r e q u e n c y i s a n i m p o r t a n t a s p e c t f o r t h e s u r v i v a l a n d g r o w t h o f f i s h a t t h e e a r l y s t a g e ( M o l l a h a n d T a n , 1 9 8 2 ) . O p t i m u m f e e d i n g f r e q u e n c y s e e m s t o b e d e p e n d e n t o n f i s h s i z e a n d h i g h e r f r e q u e n c y o f f e e d i n g w a s f o u n d t o b e a d v a n t a g e o u s f o r h i g h e r g r o w t h a n d s u r v i v a l i n y o u n g e r a g e g r o u p s . T h e f i s h e s s h o u l d h a v e t h e a c c e s s t o f e e d u p t o s a t i a t i o n f o r t h e i r o p t i m u m g r o w t h . H o w e v e r , o v e r - f e e d i n g l e a d s n o t o n l y t o r e d u c t i o n i n f e e d c o n v e r s i o n e f f i c i e n c y a n d i n c r e a s e i n i n p u t c o s t , b u t a l s o a c c u m u l a t i o n o f w a s t e s t h a t a d v e r s e l y a f f e c t s t h e w a t e r q u a l i t y ( B i s w a s e t a l . , 2 0 0 6 ) . M o r e o v e r , k n o w l e d g e o f t h e o p t i m u m f e e d i n g r a t e i s i m p o r t a n t n o t o n l y f o r p r o m o t i n g b e s t g r o w t h a n d f e e d e f f i c i e n c y , b u t a l s o f o r p r e v e n t i n g w a t e r q u a l i t y d e t e r i o r a t i o n a s a r e s u l t o f e x c e s s f e e d i n g ( N g e t a l . , 2 0 0 0 ; M i h e l a k a k i s e t a l . , 2 0 0 2 ; W e b s t e r e t a l . , 2 0 0 2 ) . I n t h i s c o n t e x t , i t i s u s e f u l t o k n o w t h e o p t i m u m f e e d i n g r a t e o f t h e c u l t u r e d s p e c i e s a n d h o w f e e d e f f i c i e n c y , f e e d c o n s u m p t i o n a n d c o m p o s i t i o n o f f l e s h a r e a f f e c t e d b y i t ( E r o l d o g ˘ a n e t a l . , 2 0 0 4 ) . A m o n g t h e d i f f e r e n t f e e d m a n a g e m e n t p r a c t i c e s p r o v e n t o m a x i m i s e t h e b e n e f i t o f f e e d i n g , f e e d i n g f r e q u e n c y a n d r a t i o n s i z e p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n r e g u l a t i n g t h e f e e d i n t a k e , g r o w t h a n d w a s t e o u t p u t s o f f i s h ( S i l v a e t a l . , 2 0 0 7 ) . O p t i m i z i n g f e e d i n g f r e q u e n c y m a y m i n i m i s e f e e d w a s t a g e , l e a d i n g t o i m p r o v e m e n t i n c u l t u r e e n v i r o n m e n t a n d o r r e d u c t i o n i n s i z e h e t e r o g e n e i t y ( D w y e r e t a l . , 2 0 0 2 ; T u c k e r e t a l . , 2 0 0 6 ) , w h e r e a s p o o r l y t i m e d o r s p o r a d i c f e e d i n g f r e q u e n c y m a y l e a d t o i n c r e a s e d h u n g e r , i n t r a - s p e c i f i c a g g r e s s i o n a n d i n c r e a s e d r a t e o f c a n n i b a l i s m ( F o l k v o r d a n d O t t e r a , 1 9 9 3 ) . S t u d i e s o n f e e d i n g b e h a v i o r i n s e v e r a l f i s h s p e c i e s h a v e s h o w n t h a t i f f e e d i n g f r e q u e n c y b e i n a c c o r d a n c e w i t h n a t u r a l f e e d i n g , i t w i l l i n c r e a s e g r o w t h a n d d e c r e a s e F C R ( B o l l i e t e t a l , 2 0 0 1 ) . S o , w i t h a s p e c t t o t w o o r t h r e e t i m e s f e e d i n g p e r d a y i n f a r m s a n d e x i s t i n g f o o d f o r R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s f e e d i n g i n I r a n i t s e e m s e s s e n t i a l t o s p e c i f y t h e b e s t f e e d i n g f r e q u e n c y f o r r e a c h i n g t h e h i g h e s t r a t e o f g r o w t h o n R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s . C o n s i d e r i n g t h e i d e a s m e n t i o n e d a b o v e i n t h i s r e s e a r c h , t h e e f f e c t s o f f e e d i n g f r e q u e n c y o n t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e s a n d s u r v i v a l o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s w e r e s t u d i e d . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S I n t h i s s t u d y h a s b e e n c a r r i e d o u t i n S i j u a l b o n y f i s h e s r e p r o d u c e a n d c u l t i v a t e c e n t e r ( G o r g a n , G o l e s t a n , I r a n ) o n 2 0 1 0 s u m m e r . T h i s e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d f o r s i x w e e k s a t f o u r t r e a t m e n t s a n d t h r e e r e p l i c a t i o n s a s f o l l o w s : T r e a t m e n t A : O n e t i m e a d a y a t 0 8 : 0 0 h , t r e a t m e n t B : T w o t i m e s a d a y a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 h , t r e a t m e n t C : T h r e e t i m e s a d a y a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 , 1 6 : 0 0 h a n d t r e a t m e n t D : F o u r t i m e s a d a y f o r f e e d i n g a t 0 8 : 0 0 , 1 2 : 0 0 , 1 6 : 0 0 , 2 0 : 0 0 h . I n i t i a l b o d y w e i g h t a n d l e n g t h M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 2 0 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 2 0 0 - 2 0 5

a v e r a g e w e r e 0 . 9 g r . G i v e n t h e i m p o r t a n c e o f t h e p h y s i c a l a n d c h e m i c a l f a c t o r s a n d t h e i r i m p a c t o n w a t e r s u p p l y a n d u l t i m a t e l y t h e f i s h g r o w t h , t h e s e f a c t o r s w e r e s o c o n t r o l l e d t h r o u g h t h e e x p e r i m e n t t h a t t h e a m o u n t o f d i s s o l v e d o x y g e n w a s f i x e d o n 5 . 5 - 6 p p m , t h e t e m p e r a t u r e 2 6 ± 2 0 C a n d p H 7 . 5 t o 8 . R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s w e r e f e d d u r i n g t h e e x p e r i m e n t a l p e r i o d w i t h S F K f e e d s t a f f c o n t a i n i n g : 8 . 7 % m o i s t u r e , 1 1 . 2 % a s h , 3 2 % p r o t e i n a n d 1 0 . 5 % f a t . F e e d i n g r a t e w h i c h p a i d a t t e n t i o n t o l i v e w e i g h t a n d i n d i f f e r e n t t i m e s a n d a f t e r e a c h t w o w e e k s b i o m e t r y , e q u a l l 1 0 % o f b o d y w e i g h t i s c a l c u l a t e d a n d w a s i n t e r e d t o e a c h a q u a r i u m . F i s h p e r f o r m a n c e s w e r e e v a l u a t e d i n t e r m s o f F e e d C o n v e r s i o n R a t i o ( F C R ) , S p e c i f i c G r o w t h R a t e ( S G R , % d − 1 ) , B o d y W e i g h t I n d e x ( B W I % ) , G r o w t h R a t e ( G R , g r d − 1 ) , C o n d i t i o n F a c t o r ( C F , g r / C m ) a n d S u r v i v a l ( % ) . T h e s e p e r f o r m a n c e i n d i c e s w e r e c a l c u l a t e d a s f o l l o w s ( H u n g e t a l . , 1 9 8 9 ; R o n y a i e t a l . , 1 9 9 0 ; B i s w a s e t a l . , 2 0 1 0 ) : F C R = t o t a l f e e d i n t a k e / t o t a l b i o m a s s g a i n S G R = [ ( l n f i n a l w e i g h t − l n i n i t i a l w e i g h t ) / r e a r i n g d u r a t i o n i n d a y s ] × 1 0 0 B W I = [ ( b o d y w e i g h t f i n a l − b o d y w e i g h t i n i t i a l ) / b o d y w e i g h t i n i t i a l ] × 1 0 0 G R = ( b o d y w e i g h t f i n a l − b o d y w e i g h t i n i t i a l ) / r e a r i n g d u r a t i o n i n d a y s B W I = [ ( b o d y w e i g h t / t o t a l l e n g t h 3 ) ] × 1 0 0 S u r v i v a l = ( n u m b e r o f f i s h h a r v e s t e d / n u m b e r o f f i s h s t o c k e d ) × 1 0 0 F o r a n a l y s i s o f a l l d a t a w e r e u s e d S P S S v e r s i o n 1 3 a n d a s o f t w a r e p r o g r a m f o r d r a w i n g g r a p h s o f E x c e l 2 0 0 3 . A l l d a t a w e r e a n a l y z e d w i t h o n e - w a y a n a l y s e s o f v a r i a n c e ( A N O V A ) a n d s i g n i f i c a n t m e a n s w e r e s u b j e c t e d t o a m u l t i p l e c o m p a r i s o n t e s t ( D u n c a n ) a t P < 0 . 0 5 . W h e n t h e n o r m a l i t y o f d a t a d i d n o t p r e s e n t , t h e n o n p a r a m e t r i c t e s t K r u s k a l - W a l l i s t o c o m p a r e t r e a t m e n t s a n d t e s t M a n n - W h i t n e y f o r p a i r e d c o m p a r i s o n b e t w e e n t r e a t m e n t s w e r e u s e d . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N F i n a l w e i g h t a n d l e n g t h o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s i n d i f f e r e n t t r e a t m e n t s w i t h 1 , 2 , 3 a n d 4 f e e d i n g f r e q u e n c y p e r d a y a r e s h o w n i n t a b l e 1 . O b t a i n e d r e s u l t s i n t h i s s t u d y s h o w e d t h a t i n c r e a s i n g f e e d i n g f r e q u e n c y h a s n o e f f e c t o n i n c r e a s i n g w e i g h t a n d l e n g t h o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s a n d t h e r e i s n o n e e d f u l l d i f f e r e n c e i n t h i s r e s p e c t a m o n g c o n s i d e r e d t r e a t m e n t s ( p > 0 . 0 5 ) . C o m p a r i s o n a v e r a g e o f d i f f e r e n t f e e d i n g f r e q u e n c y e f f e c t s o n R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s g r o w t h f a c t o r s d u r i n g c u l t u r e p e r i o d a r e s h o w n i n t a b l e 2 . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e r e i s n ' t a n y m e a n i n g f u l d i f f e r e n c e i n F C R , % B W I , S G R , G R , C F a n d s u r v i v a l i n d i f f e r e n t t r e a t m e n t s ( p > 0 . 0 5 ) . C u l t u r e c o n d i t i o n l i k e f l o c k d e n s i t y , t e m p e r a t u r e , w a t e r q u a l i t y a n d f e e d i n g f r e q u e n c y a r e e f f e c t i v e o n f i s h g r o w t h i n a q u a c u l t u r e ( W a l l a c e e t a l , 1 9 8 8 ) . C h a n g i n s o m e f a c t o r s l i k e f e e d i n g f r e q u e n c y , f e e d i n g t e c h n i q u e , o r f i s h d e n s i t y m a y c a u s e s o m e c h a n g e s i n d i f f e r e n t f i s h s p e c i e s b o d y w e i g h t ( M c C a r t h y e t a l , 1 9 9 6 ) . F e e d i n g f r e q u e n c y i s a n i m p o r t a n t a s p e c t f o r t h e s u r v i v a l a n d g r o w t h o f f i s h a t t h e e a r l y s t a g e ( M o l l a h a n d T a n , 1 9 8 2 ) . O v e r - f e e d i n g l e a d s n o t o n l y t o r e d u c t i o n i n f e e d M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 2 0 0 - 2 0 5 2 0 2 T a b l e 1 . T h e a v e r a g e o f w e i g h t a n d l e n g t h o f R u t i l u s r u t i l u s c a s p i c u s i n d i f f e r e n t t r e a t m e n t s T h e s m a l l L a t i n l e t t e r s s h o w t h a t t h e r e a r e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g d i f f e r e n t t r e a t m e n t s I n i t i a l w e i g h t ( g r ) I n i t i a l l e n g t h ( c m ) F i n a l w e i g h t ( g r ) F i n a l l e n g t h ( c m ) T r e a t m e n t s A 1 t i m e f e e d i n g p e r d a y 0 . 9 ± 0 . 2 3 a 4 . 6 1 ± 0 . 1 8 a 3 . 2 5 ± 0 . 0 8 7 a 5 . 1 3 ± 0 . 3 7 a B 2 t i m e s f e e d i n g p e r d a y 0 . 9 ± 0 . 2 3 a 4 . 6 1 ± 0 . 1 8 a 3 . 2 9 ± 0 . 0 3 4 a 5 . 0 6 ± 0 . 3 3 a C 3 t i m e s f e e d i n g p e r d a y 0 . 9 ± 0 . 2 3 a 4 . 6 1 ± 0 . 1 8 a 3 . 2 7 ± 0 . 0 7 7 a 5 . 1 5 ± 0 . 3 a D 4 t i m e s f e e d i n g p e r d a y 0 . 9 ± 0 . 2 3 a 4 . 6 1 ± 0 . 1 8 a 3 . 2 7 ± 0 . 0 7 1 a 5 . 1 2 ± 0 . 2 8 a