J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A c u t e t o x i c i t y o f i n s e c t i c i d e , D i a z i n o n a n d f u n g i c i d e , T i l t ( P r o p i c o n a z o l e ) o n P a c i f i c w h i t e S h r i m p , L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s K e y w o r d s : A c u t e t o x i c i t y , D i a z i n o n , T i l t , L i t o p e n a e u s v a n n a m e i , P a l a e m o n a d s p e r s u s . A B S T R A C T : A c u t e t o x i c i t y o f D i a z i n o n a n d T i l t ( P r o p i c o n a z o l e ) a g r i c u l t u r a l t o x i n s w a s s t u d i e d o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s , a i m i n g t o d e t e r m i n e t h e 5 0 % l e t h a l c o n c e n t r a t i o n ( L C 5 0 ) i n 9 6 h t i m e d u r a t i o n . T h e e x p e r i m e n t s w e r e c o n d u c t e d a t s t a t i c c o n d i t i o n a n d s t a n d a r d m e t h o d i n f o u r d a y s . P h y s i c a l a n d c h e m i c a l f a c t o r s w e r e c o n t r o l l e d t h r o u g h t h e e x p e r i m e n t s o t h a t t h e a m o u n t o f d i s s o l v e d o x y g e n w a s f i x e d o n 8 m g / L , t e m p e r a t u r e : 2 5 ± 1 0 C , p H : 7 . 5 t o 8 a n d s a l i n i t y : 3 1 p p t . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f D i a z i n o n a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 2 9 8 , 0 . 2 5 5 , 0 . 2 3 7 , 0 . 2 2 6 m g / L , a n d t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f T i l t a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 9 . 0 2 1 , 4 . 2 2 7 , 4 . 0 3 2 , 3 . 6 3 5 m g / L , t o t h e L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e . A l s o , t h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f D i a z i n o n a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 3 9 1 , 0 . 3 3 0 , 0 . 2 9 4 , 0 . 2 7 7 m g / L , a n d t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f T i l t a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 7 8 9 , 0 . 7 6 3 , 0 . 6 7 4 , 0 . 6 1 1 m g / L , t o t h e P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s . 1 6 0 - 1 6 6 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 3 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f F i s h e r y , B a n d a r G a z B r a n c h , I s l a m i c A z a d U n i v e r s i t y , B a n d a r G a z , I r a n . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . E m a i l : M a j i d _ m _ s h @ b a n d a r g a z i a u . a c . i r . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 9 1 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 6 J a n 2 0 1 2 / A c c e p t e d : 0 6 F e b 2 0 1 2 / P u b l i s h e d : 0 7 M a r 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : M a j i d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i . A c u t e t o x i c i t y o f i n s e c t i c i d e , D i a z i n o n a n d f u n g i c i d e , T i l t ( P r o p i c o n a z o l e ) o n P a c i f i c w h i t e S h r i m p , L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h

I N T R O D U C T I O N W h i t e s h r i m p L i t o p e n a e u s v a n n a m e i ( B o o n e ) i s d i s t r i b u t e d t h r o u g h o u t t h e P a c i f i c c o a s t f r o m t h e G u l f o f C a l i f o r n i a t o n o r t h e r n P e r u . I t i s t h e m a j o r s p e c i e s o f p e n a e i d s h r i m p i n t h e e a s t h e m i s p h e r e a n d c o n t r i b u t e s 3 0 % o f f a r m e d p r o d u c t i o n o f p e n a e i d s h r i m p i n t h e w o r l d ( P e ´ r e z F a r f a n t e a n d K e n s l e y , 1 9 9 7 ) . T h i s s p e c i e s i n h a b i t s w i d e r a n g e s o f s a l i n i t y , i n c l u d i n g b r a c k i s h w a t e r o f 1 2 p p t a n d s a l i n e w a t e r o f 4 0 p p t ( M e n z a n d B l a k e , 1 9 8 0 ) . G o m i s h a n r e g i o n i n G o l e s t a n p r o v i n c e i s o n e o f t h e m a i n a r e a s f o r c u l t u r i n g t h e L i t o p e n a e u s v a n n a m e i i n I r a n . D i s t r i b u t i o n a r e a s o f P a l a e m o n a d s p e r s u s , R a t h k e i n c l u d e t h e N o r t h S e a , B a l t i c S e a , E a s t e r n A t l a n t i c , M e d i t e r r a n e a n , a n d B l a c k S e a ( U d e k e m d A c o z , 1 9 9 9 ; J a n a s e t a l . , 2 0 0 4 ) . P a l a e m o n a d s p e r s u s i n h a b i t s m a i n l y Z o s t e r a c o v e r e d b o t t o m s o n l y ( B e r g l u n d , 1 9 8 0 ; B a d e n a n d P i h l , 1 9 8 4 ) . A l s o , t h i s p r a w n e x i s t i n C a s p i a n s e a a n d G o m i s h a n l a g o o n , I r a n . P e s t i c i d e u s e c a u s e s s e r i o u s e n v i r o n m e n t a l p r o b l e m s , e s p e c i a l l y i n t h e d r y s e a s o n w h e n t h e d i l u t i o n c a p a c i t y o f t h e w a t e r s y s t e m s i s l o w , i n c r e a s i n g t h e r i s k o f h i g h c o n c e n t r a t i o n s o f t o x i c c h e m i c a l s . M o r e o v e r , t h e d r y s e a s o n i s o f t e n t h e c r i t i c a l p e r i o d f o r m a n y a n i m a l s , e s p e c i a l l y a q u a t i c a n i m a l s s u c h a s : f i s h a n d s h r i m p ( A d e d e j i e t a l . , 2 0 0 9 ) . P e s t i c i d e u s a g e a l l o v e r t h e w o r l d h a s i n c r e a s e d d r a m a t i c a l l y d u r i n g t h e p a s t f e w d e c a d e s , c o i n c i d i n g w i t h c h a n g e s i n f a r m i n g a n d i n t e n s i v e a g r i c u l t u r e p r a c t i c e s . H e n c e t h e e n v i r o n m e n t a l p o l l u t i o n c a u s e d b y p e s t i c i d e s , e s p e c i a l l y i n a q u a t i c e c o s y s t e m s , h a s b e c o m e a g r a v e p r o b l e m ( C h i l k e , 2 0 1 2 ) . D i r e c t o r i n d i r e c t c o n t a m i n a t i o n o f w a t e r b y p e s t i c i d e s c a n l e a d t o f i s h a n d s h r i m p d e a t h s , r e d u c e d p r o d u c t i v i t y o r e l e v a t e d c o n c e n t r a t i o n s o f u n d e s i r a b l e c h e m i c a l s i n e d i b l e f i s h t i s s u e , w h i c h c a n a f f e c t t h e h e a l t h o f h u m a n s e a t i n g t h e s e a q u a t i c a n i m a l s ( A d e d e j i e t a l . , 2 0 0 0 ) . T h e o r g a n o p h o s p h a t e i n s e c t i c i d e D i a z i n o n ( O , O - d i e t h y l O - [ 6 - m e t h y l - 2 - ( 1 - m e t h y l e t h y l ) - 4 - p y r i m i d i n y l ] p h o s p h o r o t h i o a t e ) h a s a g r i c u l t u r a l a n d c o m m e r c i a l u s e s a n d i t i s u s e d t o c o n t r o l a v a r i e t y o f i n s e c t s , p r i m a r i l y a p h i d s , b e e t l e s , s c a l e s a n d p i l l b u g s , i n t h e h o u s e h o l d e n v i r o n m e n t ( C o x , 1 9 9 2 ) . T r a d e n a m e s f o r D i a z i n o n i n c l u d e K n o x - o u t , D i a n o n a n d B a s u d i n ( E P A , 2 0 0 4 ) . T i l t , w i t h t h e c h e m i c a l n a m e o f P r o p i c o n a z o l , i s a s y s t e m i c f u n g i c i d e , w h i c h i n h i g h u s a g e i s a g a i n s t v a r i o u s k i n d s o f r i c e d i s e a s e s , s u c h a s s t e m r o t t e n n e s s a n d e t c ( M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 0 5 ) . G o l e s t a n p r o v i n c e i s a g r e a t p o l e o f a g r i c u l t u r e i n t h e n o r t h o f I r a n a n d a b o v e 1 . 5 m i l l i o n s h e c t a r e s o f a g r i c u l t u r a l f i e l d s i n a r e a s a r e s p e c i f i e d t o c u l t i v a t e v a r i o u s k i n d s o f f a r m i n g p r o d u c t s a n d d r y f a r m i n g . T h u s d i f f e r e n t k i n d s o f c h e m i c a l f e r t i l i z e r s a n d v e g e t a b l e p e s t i c i d e s a r e h i g h l y i n u s e i n G o l e s t a n . F r o m a t o t a l d e g r e e o f a r o u n d 3 5 0 0 0 m e t r i c t o n s o f v e g e t a b l e p e s t i c i d e s , w h i c h a r e d i s t r i b u t e d i n t h e I r a n , a r o u n d 2 5 0 0 0 m e t r i c t o n s o f a g r i c u l t u r a l t o x i n s a r e u s e d b y f a r m e r s i n a g r i c u l t u r a l f i e l d s o f G o l e s t a n p r o v i n c e ( M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 0 5 ) . T o x i c o l o g y o f e n v i r o n m e n t a l p a r a m e t e r s o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i m a i n l y f o c u s e d o n a m m o n i a , n i t r i t e , a n d s o m e h e a v y m e t a l i o n s ( L i e t a l , 2 0 0 8 ) , w h i l e t h e r e i s n o r e p o r t o n t h e t o x i c o l o g y o f D i a z i n o n a n d T i l t t o t h i s s p e c i e s a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s . A s G o m i s h a n a r e a i n G o l e s t a n p r o v i n c e i s o n l y r e p r o d u c i n g w e s t e r n w h i t e s h r i m p i n t h e n o r t h e r n p a r t o f I r a n , t h e a c u t e t o x i c i t y p e s t i c i d e s D i a z i n o n a n d T i l t , w h i c h i s u s e d a l o t i n G o l e s t a n d i s t r i c t , o n t h e L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e w e r e s t u d i e d . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S S h r i m p a n d c h e m i c a l s u p p l y T o d e t e r m i n e t h e a c u t e t o x i c i t y o f D i a z i n o n a n d T i l t f r o m L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r u s f r o m L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s o f G o m i s h a n s h r i m p b r o o d i n g a n d c u l t u r e c e n t e r i n G o l e s t a n p r o v i n c e ( n o r t h o f I r a n ) . I n s e v e r a l p r o c e s s e s s o m e o f t h e s e p o s t l a r v a e ( P L = 2 0 ) a n d p a l a e m o n a d s p e r s u s ( 1 - 2 g r ) h a v e b e e n t r a n s f e r r e d t o t a n k s t o a d a p t t o t h e n e w c o n d i t i o n f o r 5 - 7 d a y s . T h e e x p e r i m e n t s w e r e c a r r i e d o u t i n 2 0 l i t M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 1 6 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6

a q u a r i u m s ( 1 0 s h r i m p s f o r e a c h a q u a r i u m ) w i t h s t a t i c c o n d i t i o n b a s e d o n O . E . C . D m e t h o d ( T R C , 1 9 8 4 ) w i t h f i v e t r e a t m e n t s a n d o n e b l a n k w i t h t h r e e r e p e t i t i o n s . P h y s i c a l a n d c h e m i c a l f a c t o r s w e r e c o n t r o l l e d t h r o u g h t h e e x p e r i m e n t . D i s s o l v e d o x y g e n w a s f i x e d o n 8 m g / L , t e m p e r a t u r e : 2 5 ± 1 0 C , p H : 7 . 5 t o 8 a n d s a l i n i t y : 3 1 p p t . A c u t e t o x i c i t y t e s t s T h e f i r s t e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t s o f a c u t e t o x i c i t y ( L C 5 0 i n 9 6 h ) o f D i a z i n o n ( 6 0 E M ) a n d T i l t i n t w o g r o u p s ( L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e ) . F o r t h i s p u r p o s e , f i v e t r e a t m e n t s a n d o n e b l a n k w e r e u s e d t o t e s t t o x i c i t y ; e a c h t r e a t m e n t h a d t h r e e r e p l i c a t i o n s a n d 1 0 s h r i m p s p e r t a n k w i t h 2 0 l i t r e s w a t e r c a p a c i t y . M o r t a l i t y r e c o r d s w e r e t a k e n e v e r y 2 4 h ( 2 4 , 4 8 , 7 2 , 9 6 h ) . M o v e m e n t s a n d b e h a v i o r s o f t h e s h r i m p s w e r e i n v e s t i g a t e d a t t h e t i m e o f e x p e r i m e n t s . F i n a l l y , a f t e r e a r l y e x p e r i m e n t s , D i a z i n o n c o n c e n t r a t i o n o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e w a s d e t e r m i n e d t o b e 0 . 1 5 - 0 . 3 m g / L a n d 2 - 8 m g / L , c o n c e n t r a t i o n o f T i l t c a n a f f e c t o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e . T h e n , b a s e d o n t h i s e x p e r i m e n t s L C 1 0 , L C 5 0 a n d L C 9 0 i n 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e m e a s u r e d . A l s o , e a r l y e x p e r i m e n t s s h o w e d 0 . 2 - 0 . 4 m g / L c o n c e n t r a t i o n o f D i a z i n o n a n d 0 . 4 - 1 m g / L c o n c e n t r a t i o n o f T i l t c a n a f f e c t P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e . T h e n L C 1 0 , L C 5 0 a n d L C 9 0 i n 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h o f D i a z i n o n a n d T i l t w e r e m e a s u r e d f o r P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e . S t a t i s t i c a l A n a l y s i s A f t e r o b t a i n i n g t h e f i n a l r e s u l t s , t h e i n f o r m a t i o n w a s a n a l y s e d s t a t i s t i c a l l y b y p r o b i t p r o g r a m v e r s i o n 1 . 5 ( U S E P A , 1 9 8 5 ) a n d m o r t a l i t y w a s a s s e s s e d a t 2 4 , 4 8 , 7 2 , a n d 9 6 h a f t e r t h e e a r l y a n d d e a d s h r i m p s r e m o v a l . F i n a l l y , L C 1 0 , L C 5 0 a n d L C 9 0 v a l u e s a t 2 4 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h , t h e m a x i m u m a l l o w a b l e c o n c e n t r a t i o n ( M A C ) v a l u e ( L C 5 0 i n 9 6 h d i v i d e d b y 1 0 ) ( T R C , 1 9 8 4 ) , t h e d e g r e e o f t o x i c i t y , m e a n o f i n e f f e c t i v e c o n c e n t r a t i o n ( L O E C ( L o w e s t O b s e r v e d E f f e c t C o n c e n t r a t i o n ) ) ( F i n n e y , 1 9 7 1 ) , o f D i a z i n o n a n d T i l t t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e w e r e d e t e r m i n e d . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f D i a z i n o n a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 2 9 8 , 0 . 2 5 5 , 0 . 2 3 7 , 0 . 2 2 6 m g / L , a n d t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f T i l t a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 9 . 0 2 1 , 4 . 2 2 7 , 4 . 0 3 2 , 3 . 6 3 5 m g / L , t o t h e L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e ( T a b l e . 1 a n d t a b l e . 2 ) . A l s o , M A C v a l u e o f D i a z i n o n a n d T i l t w e r e d e t e r m i n e d t o b e 0 . 0 2 2 6 a n d 0 . 3 6 3 5 m g / L t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f D i a z i n o n a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 3 9 1 , 0 . 3 3 0 , 0 . 2 9 4 , 0 . 2 7 7 m g / L , a n d t h e m e a n L C 5 0 v a l u e s o f T i l t a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h w e r e 0 . 7 8 9 , 0 . 7 6 3 , 0 . 6 7 4 , 0 . 6 1 1 m g / L , t o t h e P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s ( T a b l e . 3 a n d t a b l e . 4 ) . A l s o , M A C v a l u e o f D i a z i n o n a n d T i l t w e r e d e t e r m i n e d t o b e 0 . 0 2 7 7 a n d 0 . 0 6 1 1 m g / L t o P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e s , r e s p e c t i v e l y . A l s o , L O E C ( L o w e s t O b s e r v e d E f f e c t C o n c e n t r a t i o n ) w h i c h i s c a l l e d L C 1 0 i n 9 6 h f o r D i a z i n o n a n d T i l t w e r e d e t e r m i n e d 0 . 1 4 9 a n d 0 . 2 4 4 m g / L , r e s p e c t i v e l y t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i a n d t o P a l a e m o n a d s p e r s u s w e r e d e t e r m i n e d 0 . 2 1 2 a n d 0 . 3 7 7 m g / L , r e s p e c t i v e l y . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t h o w p e s t i c i d e s t e s t e d c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e s , s h r i m p s d i e d i n l e s s t i m e . I n f a c t , f o r 2 4 h o u r s t h e m o r t a l i t y o f s h r i m p i n t h e a m o u n t o f t o x i n i s n e e d e d M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6 1 6 2 9 6 h 7 2 h 4 8 h 2 4 h C o n c e n t r a t i o n 0 . 1 4 9 0 . 1 5 8 0 . 1 7 6 0 . 2 L C 1 0 0 . 2 2 6 0 . 2 3 7 0 . 2 5 5 0 . 2 9 8 L C 5 0 0 . 3 4 2 0 . 3 6 0 0 . 3 7 0 0 . 4 4 3 L C 9 0 T a b l e 1 . A c u t e t o x i c i t y o f D i a z i n o n i n 9 6 h o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e 9 6 h 7 2 h 4 8 h 2 4 h C o n c e n t r a t i o n ( m g / L ) 1 . 2 4 4 1 . 3 7 5 1 . 4 4 8 3 . 1 6 2 L C 1 0 3 . 6 3 5 4 . 0 3 2 4 . 2 2 7 9 . 0 2 1 L C 5 0 1 0 . 6 2 1 1 1 . 8 2 5 1 2 . 3 4 0 2 5 . 7 3 0 L C 9 0 T a b l e 2 . A c u t e t o x i c i t y o f T i l t i n 9 6 h o n L i t o p e n a e u s n n a m e i p o s t l a r v a e

m o r e t h a n 9 6 h o u r s . A l s o , a c c o r d i n g t o T a b l e 5 ( d e t e r m i n a t i o n o f t o x i c i t y i n d i f f e r e n t p e s t i c i d e s ) D i a z i n o n h a s h i g h t o x i c i t y a n d T i l t h a s m e d i u m t o x i c i t y t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i . A l s o , D i a z i n o n a n d T i l t h a v e h i g h t o x i c i t y t o P a l a e m o n a d s p e r s u s . T h e r e s u l t o f S h r i m p b e h a v i o r s i n d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f t o x i n s h o w e d t h a t b o t h s h r i m p s , i n h i g h c o n c e n t r a t i o n o f D i a z i n o n a n d T i l t , h a d f a s t s w i m m i n g , p e r m a n e n t l y t h e n g o t t i r e d a n d d i e d . W h i l e i n l o w c o n c e n t r a t i o n s , d u r i n g t h e f i r s t h o u r s , t h e r e w e r e n o o b v i o u s r e a c t i o n s , t h e n g r a d u a l l y f a i n t . T h e m a i n e f f e c t o f c o n c e n t r a t i o n s o f t o x i n s w a s n e r v o u s s y s t e m d i s o r d e r , o t h e r e x t e r n a l s i g n s s u c h a s : i m b a l a n c e , s p i r a l s w i m m i n g , a n d s k i n d a r k e n i n g w e r e r e c o r d e d t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e . S o f a r n o s t u d y h a s b e e n r e p o r t e d o n t h e e f f e c t s o f D i a z i n o n a n d T i l t f e a t u r e a n d o t h e r p o l l u t a n t s o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s i n I r a n . T h i s c o u l d b e d u e t o t h e r e c e n t e n t r y o f L i t o p e n a e u s v a n n a m e i i n t o I r a n a n d t h e r e a r e s t i l l m a n y s t u d i e s o n t h i s s h r i m p t h a t c a n b e m a d e b y r e s e a r c h e r s . B u t s i n c e t h e r e i s l i t t l e i n f o r m a t i o n o n t h e t o x i c e f f e c t s o f a g r i c u l t u r a l t o x i n s t o c r u s t a c e a n s , f u r t h e r s t u d i e s s h o u l d b e c o n d u c t e d t o u n d e r s t a n d t h e t o x i c e f f e c t a n d m e c h a n i s m s o f a g r i c u l t u r a l t o x i n s o n c r u s t a c e a n s . A s f a r a s w e k n o w , a g r i c a u l t u r a l t o x i n s u c h a s D i a z i n o n a n d T i l t c a n r a p i d l y b e a c c u m u l a t e d i n t h e w a t e r a n d r e a c h t o x i c c o n c e n t r a t i o n s v i a s e v e r a l p r o c e s s e s , s u c h a s a g r i c u l t u r a l c h e m i c a l s , l a u n d r y p r o d u c t s , i r r i g a t i o n d r a i n w a t e r , m i n i n g a n d p r o c e s s i n g , a n d c o a l b u r n i n g , s o i t p r e s e n t s a d a n g e r t o a q u a t i c o r g a n i s m s ( L i e t a l , 2 0 0 8 ) . T o x i c o l o g y o f e n v i r o n m e n t a l p a r a m e t e r s o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i m a i n l y f o c u s e d o n a m m o n i a , n i t r i t e , a n d s o m e h e a v y m e t a l i o n s w e r e s t u d i e d b y L i e t a l , ( 2 0 0 8 ) , w h i l e t h e r e i s n o r e p o r t o n t h e t o x i c o l o g y o f D i a z i n o n a n d T i l t t o P a l a e m o n a d s p e r s u s . T h e 9 6 h L C 5 0 v a l u e s o f a m m o n i a - N o n L . V a n n a m e i j u v e n i l e s w e r e 2 4 . 3 9 m g / L a t 1 5 p p t ; 3 5 . 4 m g / L a t 2 5 p p t ; 3 9 . 5 4 m g / L a t 3 5 p p t , r e s p e c t i v e l y . T h e 9 6 h L C 5 0 v a l u e s o f N H 3 - N ( u n - i o n i z e d a m m o n i a a s n i t r o g e n ) w e r e 1 . 2 0 m g / L a t 1 5 p p t ; 1 . 5 7 m g / L a t 2 5 p p t ; 1 . 6 0 m g / L a t 3 5 p p t , r e s p e c t i v e l y ( L i n a n d C h e n , 2 0 0 1 ) . T h e 9 6 h L C 5 0 v a l u e o f n i t r i t e - N o n L . v a n n a m e i j u v e n i l e s w a s 7 6 . 5 m g / L a t 1 5 p p t , 1 7 8 . 3 m g / L a t 2 5 p p t , 3 2 1 . 7 m g / L a t 3 5 p p t ( L i n a n d C h e n , 2 0 0 3 ) . T h e 9 6 h L C 5 0 v a l u e s o f b o r o n w e r e 2 5 . 0 5 m g / L a t 3 . 0 p p t a n d 8 0 . 0 6 m g / L a t 2 0 . 0 p p t f o r L i t o p e n a e u s v a n n a m e i ( L i e t a l , 2 0 0 8 ) . A c u t e t o x i c i t y o f o z o n e - p r o d u c e d o x i d a n t s ( O P O ) t o j u v e n i l e P a c i f i c w h i t e s h r i m p , L i t o p e n a e u s v a n n a m e i , w a s a s s e s s e d a n d f o u n d t o b e 0 . 5 0 m g / L ( S c h r o e d e r e t a l , 2 0 1 0 ) . A l s o , t h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y a n d i t s c o m p a r i s o n t o t h e l i t e r a t u r e f i n a l l y s h o w e d t h a t t h e r a n g e o f s e n s i t i v i t y t o a g r i c u l t u r a l t o x i n s ( e . g : D i a z i n o n a n d T i l t ) , i s m o r e t h a n t h a t t o t h e a m m o n i a a n d n i t r i t e t o x i c i t y . B u t a s t o t h e p e s t i c i d e D i a z i n o n t h e r e h a s b e e n m a n y s t u d i e s o n d i f f e r e n t s p e c i e s o f f i s h . I n o t h e r s t u d i e s , 9 6 h L C 5 0 v a l u e o f D i a z i n o n w e r e d e t e r m i n e d f o r t h e f o l l o w i n g s p e c i e s : A n g u i l l a A n g u i l l a : 0 . 0 8 m g / L , B l u e g i l l : 0 . 4 6 m g / L , F a t h e a d m i n n o w s ( P i m e p h a l e s p r o m e l a s ) : 7 . 8 m g / L a n d z e b r a f i s h ( B r a c h y d a n i o r e r i o ) : 2 . 1 2 m g / L ( A n s a r i e t a l . , M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 1 6 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6 9 6 h 7 2 h 4 8 h 2 4 h C o n c e n t r a - t i o n ( m g / L ) 0 . 2 1 2 0 . 2 1 4 0 . 2 4 3 0 . 2 7 5 L C 1 0 0 . 2 7 7 0 . 2 9 4 0 . 3 3 0 0 . 3 9 1 L C 5 0 0 . 3 6 2 0 . 4 0 4 0 . 4 4 7 0 . 5 5 7 L C 9 0 T a b l e 3 . A c u t e t o x i c i t y o f D i a z i n o n i n 9 6 h o n P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e 9 6 h 7 2 h 4 8 h 2 4 h C o n c e n t r a t i o n ( m g / L ) 0 . 3 7 7 0 . 4 4 7 0 . 5 2 5 0 . 5 3 9 L C 1 0 0 . 6 1 1 0 . 6 7 4 0 . 7 6 3 0 . 7 8 9 L C 5 0 0 . 9 8 9 1 . 0 1 8 1 . 0 6 6 1 . 1 5 7 L C 9 0 T a b l e 4 . A c u t e t o x i c i t y o f T i l t i n 9 6 h o n P a l a e m o n a d s p e r s u s j u v e n i l e L C 5 0 ( m g / L ) D e g r e e o f t o x i c i t y U p t o 1 0 0 N e a r l y n o p o i s o n 1 0 - 1 0 0 t o x i c i t y L o w 1 - 1 0 t o x i c i t y M e d i u m 0 . 1 - 1 t o x i c i t y H i g h L e s s t o 0 . 1 t o x i c i t y V e r y h i g h T a b l e 5 . D e t e r m i n a t i o n o f t o x i c i t y i n d i f f e r e n t p e s t i c i d e s ( P i r i Z i r k o o h i a n d O r f o g , 1 9 9 7 )

1 9 8 7 ) . A l s o , 9 6 h L C 5 0 v a l u e o f D i a z i n o n w e r e d e t e r m i n e d f o r s i l v e r c a r p ( H y p o p h t h a l m i c h t h y s m o l i t r i x ) a n d A b r a m i s b r a m a , 1 . 9 m g / L a n d 8 . 1 m g / L , r e s p e c t i v e l y ( N a s r i T a j a n , 1 9 9 6 ) ; A c i p e n s e r p e r s i c u s : 4 . 3 8 m g / L ( P a j a n d , 1 9 9 9 ) ; A c i p e n s e r n u d i v e n t r i s : 4 . 6 m g / L ( K h o s h b a v a r - R o s t a m i a n d S o l t a n i , 2 0 0 2 ) ; A c i p e n s e r g u e l d e n s t a d t i i : 6 . 0 9 m g / L ( S o l t a n i a n d K h o s h b a v a r - R o s t a m i , 2 0 0 2 ) ; H u s o h u s o : 4 . 9 9 m g / L ( K h o s h b a v a r - R o s t a m i e t a l . , 2 0 0 4 ) ; A c i p e n s e r s t e l l a t u s : 4 . 9 8 m g / L ( K h o s h b a v a r - R o s t a m i e t a l . , 2 0 0 5 ) ; g r a s s c a r p ( C t e n o p h a r y n g o d o n i d e l l a ) : 1 5 . 1 3 m g / L ( P o u r g h o l a m e t a l . , 2 0 0 6 ) ; S i l u r u s g l a n i s : 4 . 1 4 2 m g / L ( K p r ü c ü e t a l . , 2 0 0 6 ) ; A f r i c a n c a t f i s h ( C l a r i a s g a r i e p i n u s ) : 6 . 6 m g / L ( A d e d e j i e t a l . , 2 0 0 9 ) , B u f o r e g u l a r i s : 0 . 4 4 m g / L ( L a w r e n c e a n d I s i o m a , 2 0 1 0 ) . T h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y a n d i t s c o m p a r i s o n t o t h e l i t e r a t u r e f i n a l l y s h o w t h a t r a n g e o f s e n s i t i v i t y t o d i a z i n o n t o x i c a n t i s , a s s h o w n b e l o w : A n g u i l l a a n g u i l l a > L i t o p e n a e u s v a n n a m e i > P a l a e m o n a d s p e r s u s > B u f o r e g u l a r i s > b l u e g i l l > H y p o p h t h a l m i c h t h y s m o l i t r i x > B r a c h y d a n i o r e r i o > S i l u r u s g l a n i s > A . p e r s i c u s > A n u d i v e n t r i s > A . s t e l l a t u s > H u s o h u s o > A . g u e l d e n s t a e d t i i > C l a r i a s g a r i e p i n u s > P i m e p h a l e s p r o m e l a s > A b r a m i s b r a m a > C t e n o p h a r y n g o d o n i d e l l a A l s o , 9 6 h L C 5 0 v a l u e s o f T i l t w a s d e t e r m i n e d a s 3 . 9 m g / L a t A n u d i v e n t r i s ( M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 0 5 ) . C O N C L U S I O N T h e s u r v e y r e s u l t s i n d i c a t e d t h a t t h e D i a z i n o n a n d T i l t a r e v e r y t o x i c t o L i t o p e n a e u s v a n n a m e i a n d P a l a e m o n a d s p e r s u s a n d e n d a n g e r s t h e i r h e a l t h . T h e r e f o r e , t h e s h r i m p f a r m s i n t h e v i c i n i t y o f t h e p e s t i c i d e u s e a r e i n d a n g e r . I n f a c t , L . v a n n a m e i s h r i m p f a r m s i n t h e v i c i n i t y o f t h e u s e o f p e s t i c i d e s c a n c a u s e h a r m t o t h e i r h e a l t h a n d a f f e c t t h e s h r i m p i n d u s t r y . A C K N O W L E D G E M E N T T h i s r e s e a r c h w a s s u p p o r t e d b y t h e G o l e s t a n P r o v i n c e F i s h e r y O r g a n i z a t i o n , G o r g a n , G o l e s t a n , I r a n a n d D e p a r t m e n t o f F i s h e r y , B a n d a r G a z B r a n c h , I s l a m i c A z a d U n i v e r s i t y , B a n d a r G a z , I r a n . A l s o , W i t h a f f e c t i o n a n d d e e p a p p r e c i a t i o n w e a c k n o w l e d g e i n d e b t e d n e s s t o o u r f r i e n d s a n d c o l l e a g u e s : E n g i n e e r A b d o l l a t i f E i m e r i , E n g i n e e r A l i A k b a r P a s s a n d i , E n g i n e e r V o s h t a i e , E n g i n e e r S a g h a l i , E n g i n e e r K i a a n d M r . J a l a l y . R E F E R E N C E S A d e d e j i O B , T a i w o V O a n d A g b e d e S A . 2 0 0 0 . C o m p a r a t i v e h a e m a t o l o g y o f f i v e N i g e r i a n f r e s h w a t e r f i s h s p e c i e s . N i g . V e t . J . , 2 1 : 7 5 - 8 4 . A d e d e j i O B , A d e y e m o O K a n d A g b e d e S A . 2 0 0 9 . E f f e c t s o f d i a z i n o n o n b l o o d p a r a m e t e r s i n t h e A f r i c a n c a t f i s h ( C l a r i a s g a r i e p i n u s ) , A f r i c a n J o u r n a l o f B i o t e c h n o l o g y 8 ( 1 6 ) : 3 9 4 0 - 3 9 4 6 . A n s a r i B A , A s l a m M a n d K u m a r K . 1 9 8 7 . D i a z i n o n t o x i c i t y : a c t i v i t i e s o f a c e t y l c h o l i n e s t e r a s e a n d p h o s p h a t a s e s i n t h e n e r v o u s t i s s u e o f Z e b r a D a n i o , B r a c h y d a n i o r e r i o ( C y p r i n i d a e ) . A c t a H y d r o c h i m . H y d r o b i o l . , 1 5 : 3 0 1 - 3 0 6 . B a d e n S P , P i h l L . 1 9 8 4 . A b u n d a n c e , b i o m a s s a n d p r o d u c t i o n o f m o b i l e e p i b e n t h i c f a u n a i n Z o s t e r a m a r i n a ( L . ) m e a d o w s , w e s t e r n S w e d e n . O p h e l i a 2 3 : 6 5 - 9 0 . B e r g l u n d A . 1 9 8 0 . N i c h e d i f f e r e n t i a t i o n b e t w e e n t w o l i t t o r a l p r a w n s i n G u l l m a r F j o r d , S w e d e n : P a l a e m o n a d s p e r s u s a n d P . s q u i l l a . H o l a r c t i c E c o l o g y 3 : 1 1 1 - 1 1 5 . C o x C . 1 9 9 2 . D i a z i n o n f a c t s h e e t . J . P e s t i c . R e f o r m 1 2 : 3 0 - 3 5 . E P A ( E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y ) . 2 0 0 4 . I n t e r i m R e r e g i s t r a t i o n E l i g i b i l i t y D e c i s i o n , D i a z i n o n . U n i t e d S t a t e s E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y , O f f i c e o f P r e v e n t i o n , P e s t i c i d e s a n d T o x i c S u b s t a n c e s 7 5 0 8 C . F i n n e y D . 1 9 7 1 . P r o b i t a n a l y s i s . C a m b r i d g e U n i v , P r e s s 1 - 2 2 2 . M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6 1 6 4

K h o s h b a v a r - R o s t a m i H A a n d S o l t a n i M . 2 0 0 2 . A c u t e t o x i c i t y o f d i a z i n o n o n A c i p e n s e r n u d i v e n t r i s . S e c o n d S y m p o s i u m o n s t u r g e o n s . R a s h t , I r a n , B o o k o f A b s t r a c t s 7 2 - 7 5 . ( I n P e r s i a n ) . K h o s h b a v a r - R o s t a m i H , S o l t a n i M a n d H a s s a n H M D . 2 0 0 4 . A c u t e t o x i c i t y a n d s o m e h e m a t o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a n g e s i n g i a n t s t u r g e o n ( H u s o h u s o ) e x p o s e d t o d i a z i n o n . B u l l . E u r . A s s o c . F i s h P a t h o l . , 2 4 ( 2 ) : 9 2 - 9 9 . K h o s h b a v a r - R o s t a m i H , S o l t a n i M a n d Y e l g h i S . 2 0 0 5 . E f f e c t s o f d i a z i n o n o n t h e h e m a t o l o g i c a l p r o f i l e s o f A c i p e n s e r s t e l l e t u s a n d d e t e r m i n a t i o n o f L C 5 0 . J . A g r i c . S c i . N a t u r e . R e s u r e 1 2 ( 5 ) . ( I n P e r s i a n ) . K p r ü c ü S O , K p r ü c ü K , M e v l ü t S , I s p i r E U a n d P a l a M . 2 0 0 6 . A c u t e t o x i c i t y o f o r g a n o p h o s p h o r o u s p e s t i c i d e d i a z i n o n a n d i t s e f f e c t s o n b e h a v i o r a n d s o m e h e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s o f f i n g e r l i n g E u r o p e a n c a t f i s h ( S i l u r u s g l a n i s ) , P e s t i c i d e B i o c h e m i s t r y a n d P h y s i o l o g y 8 6 : 9 9 - 1 0 5 . J a n a s U , Z a n z y c k i T , K o z i k P . 2 0 0 4 . P a l a e m o n e l e g a n s a n e w c o m p o n e n t o f t h e G u l f o f G d a n s k m a c r o f a u n a . O c e a n o l o g i a 4 6 : 1 4 3 - 0 1 4 6 . L a w r e n c e E a n d I s i o m a T o n g o . 2 0 1 0 . A c u t e t o x i c e f f e c t s o f E n d o s u l f a n a n d D i a z i n o n p e s t i c i d e s o n a d u l t a m p h i b i a n s ( B u f o r e g u l a r i s ) . J o u r n a l o f E n v i r o n m e n t a l C h e m i s t r y a n d E c o t o x i c o l o g y 2 ( 5 ) : 7 3 - 7 8 . L i E , X i o n g Z , C h e n L , Z e n g C a n d L i K . 2 0 0 8 . A c u t e t o x i c i t y o f b o r o n t o j u v e n i l e w h i t e s h r i m p , L i t o p e n a e u s v a n n a m e i , a t t w o s a l i n i t i e s . A q u a c u l t u r e 2 7 8 : 1 7 5 - 1 7 8 . L i n Y C a n d C h e n J C . 2 0 0 1 . A c u t e t o x i c i t y o f a m m o n i a o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i B o o n e J u v e n i l e s a t d i f f e r e n t s a l i n i t y l e v e l s . J . E x p . M a r . B i o l . E c o l . , 2 5 9 : 1 0 9 - 1 1 9 . L i n Y C a n d C h e n J C . 2 0 0 3 . A c u t e t o x i c i t y o f n i t r i t e o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i ( B o o n e ) j u v e n i l e s a t d i f f e r e n t s a l i n i t y l e v e l s . A q u a c u l t u r e 2 2 4 : 1 9 3 - 2 0 1 . M e n z A a n d B l a k e B F . 1 9 8 0 . E x p e r i m e n t s o n t h e g r o w t h o f P e n a e u s v a n n a m e i B o o n e . J . E x p . M a r . B i o l . E c o l . , 4 8 : 9 9 - 1 1 1 . M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i M . 2 0 0 5 . A c c u t e T o x i c i t y o f h e a v y m e t a l s ( P b , C d a n d Z n ) a n d a g r i c u l t u r a l t o x i n s ( D i a z i n o n , H i n o s a n a n d T i l t ) L C 5 0 i n 9 6 h t o A c i p e n s e r n u d i v e n r t i s . M S c T h e s i s o f L a h i j a n I s l a m i c A z a d U n i v e r s i t y . 1 - 4 . ( I n P e r s i a n ) . P e ´ r e z F a r f a n t e I a n d K e n s l e y B . 1 9 9 7 . P e n a e i d a n d s e r g e s t o i d s h r i m p s a n d p r a w n s o f t h e w o r l d : k e y s a n d d i a g n o s e s . M e ´ m o i r e s d u M u s e ´ u m N a t i o n a l D H i s t o i r e N a t u r e l l e , P a r i s . 2 3 3 . N a s r i T a j a n M . 1 9 9 6 . D e t e r m i n i n g o f L C 5 0 i n 9 6 h G r a n o l d i a z i n o n 5 % a n d e m u l s i o n 6 0 % t o W e t l a n d A n z a l i A b r a m i s b r a m a . M S c T h e s i s o f L a h i j a n A z a d U n i v e r s i t y . L a h i j a n , I r a n : 9 - 2 0 . ( I n P e r s i a n ) . P a j a n d Z . 1 9 9 9 . A c u t e t o x i c i t y o f d i a z i n o n o n A . S t e l l a t u s a n d A . p e r s i c u s F i n g e r l i n g s . M S c T h e s i s o f L a h i j a n A z a d U n i v e r s i t y . L a h i j a n . I r a n . 4 5 - 6 0 . ( I n P e r s i a n ) . P i r i Z i r k o o h i M a n d O r f o g V . 1 9 9 7 . E f f e c t o f s o m e p e s t i c i d e s C o m m o n l y i n I r a n i a n a g r i c u l t u r e o n a q u a t i c f o o d c h a i n . T e s i s f o r p H - D d e g r e e s u b m i t t e d f o r t h e a c a d e m y o f a g r i c u l t u r a l S c i e n c e s G o d o l l o - H u n g a r y . 1 - 3 1 . P o u r g h o l a m R , S o l t a n i M , H a s s a n D M , G h o r o g h i A , N a h a v a n d i R a n d P o u r g h o l a m H . 2 0 0 6 . D e t e r m i n a t i o n o f d i a z i n o n L C 5 0 i n G r a s s c a r p ( C t e n o p h a r y n g o d o n i d e l l a ) a n d t h e e f f e c t o f s u b l e t h a l c o n c e n t r a t i o n o f t o x i n o n s o m e h e m a t o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l i n d i c e s . I r a n i a n J o u r n a l o f F i s h e r i e s S c i e n c e s 5 ( 2 ) : 6 7 - 8 2 . S c h r o e d e r J P , G ä r t n e r A , W a l l e r U a n d H a n e l R . 2 0 1 0 . T h e t o x i c i t y o f o z o n e - p r o d u c e d o x i d a n t s t o t h e P a c i f i c w h i t e s h r i m p L i t o p e n a e u s v a n n a m e i . A q u a c u l t u r e M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 1 6 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6

3 0 5 : 6 - 1 1 . S o l t a n i M a n d K h o s h b a v a r - R o s t a m i H . 2 0 0 2 . T h e s t u d y e f f e c t s o f d i a z i n o n o n t h e s o m e h e m a t o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a n g e s o f A c i p e n e s e r g u l d e n s t a d t i . J o u r n a l o f M a r i n e S c e i e n c e s a n d T e c g n o l o g y 4 ( 1 ) : 6 5 - 7 5 . ( I n P e r s i a n ) . T R C . 1 9 8 4 . O . E . C . D . G u i d e l i n e s f o r t e s t i n g o f c h e m i c a l s . S e c t i o n 2 . E f f e c t s o n b i o t i c s y s t e m s 1 - 3 9 . U d e k e m d A c o z C D . 1 9 9 9 . I n v e n t a i r e e t d i s t r i b u t i o n d e s c r u s t a c e ´ s d e ´ c a p o d e s d e l A t l a n t i q u e n o r d - o r i e n t a l , d e l a M e ´ d i t e r r a n e ´ e e t d e s e a u x c o n t i n e n t a l s a d j a c e n t e s a u n o r d d e 2 5 _ N . C o l l e c t i o n P a t r i m o i n e s N a t u r e l s . M u s e ´ u m n a t i o n a l d H i s t o i r e n a t u r e l l e , P a r i s . 3 8 3 . U S E P A ( U n i t e d S t a t e s E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y ) . 1 9 8 5 . M e t h o d s f o r m e a s u r i n g t h e a c u t e t o x i c i t y o f e f f l u e n t s t o f r e s h w a t e r a n d m a r i n e o r g a n i s m s . 3 r d E d . E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y , E n v i r o n m e n t a l M o n i t o r i n g a n d S u p p o r t L a b o r a t o r y , C i n c i n n a t i , O H . E P A - 6 0 0 / 4 - 8 5 / 0 1 3 . M o h a m m a d N e j a d S h a m o u s h a k i , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 6 0 - 1 6 6 1 6 6 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t F i c u s p u b l i s h e r s . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g O p e n A c c e s s a n d Q u i c k s p r e a d i n g Y o u r e t a i n s y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m / s u b m i t 1 . a s p x .