J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y I n f l u e n c e o f c u l t u r e c o n d i t i o n s o n m y c e l i a l g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s ( b u l l . ) P . K a r s t . K e y w o r d s : B i o l u m i n e s c e n c e , P a n e l l u s s t i p t i c u s , c u l t u r e c o n d i t i o n s , m y c e l i a l g r o w t h . A B S T R A C T : P a n e l l u s s t i p t i c u s ( B u l l . ) P . K a r s t , a n a t u r a l l y b i o l u m i n e s c e n t t r o p i c a l f u n g u s , h a s b e e n s t u d i e d i n v i t r o f o r t h e o p t i m u m c u l t u r e c o n d i t i o n s v i z c u l t u r e m e d i a , t e m p e r a t u r e , p H a n d d a y s o f i n c u b a t i o n r e q u i r e d f o r l u m i n e s c e n c e . T e m p e r a t u r e a n d p H a f f e c t g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e t o a g r e a t e x t e n t . G l u c o s e - p e p t o n e m e d i u m h a s b e e n f o u n d t o b e t h e b e s t f o r o p t i m u m m y c e l i a l g r o w t h a s w e l l a s l u m i n e s c e n c e . T h e f u n g u s e x h i b i t s l u m i n e s c e n c e a t 2 0 - 2 4 ° C . T h e m a x i m u m m y c e l i a d r y w e i g h t ( m g / 2 5 m l o f t h e b a s a l m e d i a ) a n d l u m i n e s c e n c e o b s e r v e d a t p H 4 . 0 . T h e f u n g u s e x h i b i t s l u m i n e s c e n c e a f t e r e i g h t d a y s o f i n c u b a t i o n a t 2 4 ° C a n d p H 4 . 0 , w h e r e a s i t i n t e n s i f i e d t o m a x i m u m a f t e r 1 3 d a y s o f i n c u b a t i o n ( p H 4 . 0 a n d t e m p e r a t u r e 2 4 ° C ) . 1 5 2 - 1 5 9 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 3 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : P r a s h e r I B , C h a n d e l V C a n d A h l u w a l i a A S . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f B o t a n y , P a n j a b U n i v e r s i t y , C h a n d i g a r h - 1 6 0 0 1 4 . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : P r a s h e r I B . E m a i l : c h r o m i s t a @ y a h o o . c o . i n . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 9 0 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 1 J a n 2 0 1 2 / A c c e p t e d : 0 6 F e b 2 0 1 2 / P u b l i s h e d : 0 3 M a r 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : P r a s h e r I B , C h a n d e l V C a n d A h l u w a l i a A S . I n f l u e n c e o f c u l t u r e c o n d i t i o n s o n m y c e l i a l g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s ( b u l l . ) P . K a r s t . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h

I N T R O D U C T I O N D i s t r i b u t e d t h r o u g h o u t t h e w o r l d , t h e n u m e r i c a l s t r e n g t h o f b i o l u m i n e s c e n t f u n g i h a v e b e e n e s t i m a t e d t o b e 4 2 s p e c i e s w i t h i n n i n e g e n e r a b y W a s s i n k ( 1 9 7 8 ) a n d 6 4 s p e c i e s b e l o n g i n g t o t h r e e e v o l u t i o n a r y l i n e a g e s b y D e s j a r d i n e t a l . , ( 2 0 0 8 ) . M o r e t h a n a h a l f o f t h e s e s p e c i e s a r e n a t i v e t o A u s t r a l i a a n d A s i a , b e l o n g i n g t o t h e g e n u s M y c e n a . T h e b i o l u m i n e s c e n t b a s i d i o m y c e t e s c a n b e u s e d t o e v a l u a t e t h e a c u t e t o x i c i t y o f e i t h e r p u r e t o x i c a n t s o r e n v i r o n m e n t a l s a m p l e s ( W e i t z e t a l . , 2 0 0 2 ) . F o r t h e a b o v e p u r p o s e a n d t o i m p r o v e t h e s e n s i t i v i t y o f t h e m e t h o d , c u l t u r e c o n d i t i o n s m u s t b e i n v e s t i g a t e d t o e n s u r e m a x i m a l e m i s s i o n . A n a t t e m p t h a s b e e n m a d e t o f i n d o u t t h e e f f e c t o f c u l t u r e c o n d i t i o n s f o r t h e o p t i m u m m y c e l i a g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s ( B u l l . ) P . K a r s t . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S C u l t u r e a n d C u l t u r e c o n d i t i o n s : T h e c u l t u r e s o f P a n e l l u s s t i p t i c u s ( B u l l i a r d e x F r . ) K a r s t h a v e b e e n o b t a i n e d f r o m t h e L u x B i o t e c h . L t d . U . K . T h e p u r e c u l t u r e s o f P a n e l l u s s t i p t i c u s h a v e b e e n m a i n t a i n e d o n m a l t y e a s t a g a r m e d i u m . ( m a l t e x t r a c t 3 g , y e a s t e x t r a c t 3 g , p e p t o n e 5 g , g l u c o s e 1 0 g , a g a r 2 0 g i n d i s t i l l e d w a t e r t o m a k e 1 l i t r e ) . F o r a l l e x p e r i m e n t s , t h e f u n g i a r e s u b - c u l t u r e d o n t o t h e a b o v e m e n t i o n e d m e d i a a n d s t o r e d f o r u p t o o n e m o n t h a t ± 4 ° C i n t h e r e f r i g e r a t o r . P r o c e d u r e : E a c h f l a s k , c o n t a i n i n g 2 5 m l o f t h e b a s a l m e d i u m w a s i n o c u l a t e d w i t h o n e m l o f t h e s t a n d a r d i z e d m y c e l i a l s u s p e n s i o n , s h a k e n w e l l a n d a l l o w e d t o g e r m i n a t e f o r f i v e h o u r s a t o p t i m u m t e m p e r a t u r e o f e a c h f u n g u s t o r e m o v e l a g e f f e c t a n d t h e n i n c u b a t e d a t t h e r e s p e c t i v e o p t i m u m t e m p e r a t u r e o f e a c h f u n g u s f o r o p t i m u m d a y s i n s t i l l c u l t u r e . F o r s o l i d m e d i a e x p e r i m e n t s , a m y c e l i a l d i s c w a s s e e d e d i n 5 0 m l o f t h e s o l i d m e d i u m i n 2 5 0 m l E r l e n m e y e r c o n i c a l f l a s k . T h r e e r e p l i c a t e s w e r e k e p t f o r e a c h v a r i a b l e . P r e p a r a t i o n o f c u l t u r e m e d i a a n d i n o c u l a t i o n : G l u c o s e - p e p t o n e m e d i u m ( G l u c o s e 1 0 . 0 g / l , P e p t o n e 2 . 0 g / l , p o t a s s i u m d i h y d r o g e n o r t h o p h o s p h a t e 1 . 0 g / l , m a g n e s i u m s u l p h a t e 0 . 5 g / l a n d d i s t i l l e d w a t e r t o m a k e 1 0 0 0 m l ) w a s u s e d i n a l l t h e e x p e r i m e n t s f o r P a n e l l u s s t i p t i c u s a s t h e m e d i u m g a v e t h e o p t i m u m l u m i n e s c e n c e o f t h e f u n g u s . T h e i n o c u l u m f o r e x p e r i m e n t s o n g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e i n r e l a t i o n t o t e m p e r a t u r e , p H a n d d a y s o f i n c u b a t i o n w a s p r e p a r e d b y g r i n d i n g m y c e l i u m ( 5 d a y s o l d ) g r o w i n g i n o p t i m a l b a s a l m e d i u m u n d e r o p t i m u m c o n d i t i o n s o f e a c h f u n g u s a s e p t i c a l l y t o g e t c o n c e n t r a t e d m y c e l i a s u s p e n s i o n w h i c h w a s d i l u t e d t o g e t 2 . 5 m g o f d r y w e i g h t o f m y c e l i u m / m l o f t h e s u s p e n s i o n . B a s a l m e d i a : T h e f u n g u s w a s g r o w n i n t w e l v e d i f f e r e n t l i q u i d b a s a l m e d i a ( v i z . R a u l i n s , R i c h a r d s , D o x s , C o o n s , C z a p e k s - I , C z a p e k s - I I , B r o w n , s - I , B r o w n , s - I I , G l u c o s e - n i t r a t e , G l u c o s e - p e p t o n e , A s t h a n a & H a w k e r s a n d E l l i o t s m e d i u m ) t o k n o w t h e b e s t m e d i u m f o r t h e i r g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e . T h e i n i t i a l p H o f a l l t h e d i f f e r e n t m e d i a w a s n o t c h a n g e d a n d c h e c k e d b e f o r e a n d a f t e r a u t o c l a v i n g a t 1 5 l b s p s i s t e a m p r e s s u r e f o r 1 5 m i n u t e s . T w e n t y f i v e m l o f t h e b a s a l m e d i a w e r e a p p o r t i o n e d i n e a c h 1 0 0 m l s t e r i l i z e d E r l e n m e y e r c o n i c a l f l a s k a s e p t i c a l l y a n d s e e d e d w i t h o n e m l o f t h e s t a n d a r d i z e d m y c e l i a l s u s p e n s i o n a n d i n c u b a t e d f o r 1 5 d a y s ( t a k e n t e n t a t i v e l y ) . T h r e e r e p l i c a t e s w e r e k e p t f o r e a c h b a s a l m e d i u m a n d t h e f u n g u s . T h e s e f u n g i w e r e i n c u b a t e d a t 2 2 ° C . T e m p e r a t u r e : T h e e f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n m y c e l i a g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e w a s s t u d i e d b y g r o w i n g t h e f u n g u s o n b a s a l m e d i u m ( g l u c o s e - p e p t o n e ) a t 1 6 ° C , 2 0 ° C , 2 4 ° C , 2 8 ° C a n d 3 2 ° C . T h e t e m p e r a t u r e o f t h e i n c u b a t o r w a s c h e c k e d a n d r e c o r d e d e v e r y d a y . H - i o n c o n c e n t r a t i o n s : A h y d r o g e n - i o n c o n c e n t r a t i o n r a n g e o f 3 . 0 - 9 . 0 w a s s e l e c t e d t o o b s e r v e t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 1 5 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9

t h e f u n g u s w i t h a d i f f e r e n c e o f u n i t p H . T h e b a s a l m e d i u m w a s a p p o r t i o n e d i n t o 7 a l i q u o t s a n d s t e r i l i z e d a t 1 5 l b s p s i s t e a m p r e s s u r e f o r 1 5 m i n u t e s i n s e p a r a t e f l a s k s . T h e p H o f e a c h a l i q u o t w a s a d j u s t e d t o a s e p a r a t e u n i t v a l u e a s e p t i c a l l y w i t h s t e r i l i z e d s o l u t i o n o f N - H C l a n d N - K O H a n d c h e c k e d o v e r P / L P h i l i p s p r e c i s i o n i n s t r u m e n t s P R 9 0 4 5 M . T w e n t y f i v e m l o f t h e b a s a l m e d i a w e r e a p p o r t i o n e d i n e a c h 1 0 0 m l s t e r i l i z e d E r l e n m e y e r c o n i c a l f l a s k a s e p t i c a l l y a n d s e e d e d w i t h o n e m l o f t h e s t a n d a r d i z e d m y c e l i a l s u s p e n s i o n a n d i n c u b a t e d a t c o r r e s p o n d i n g o p t i m u m t e m p e r a t u r e s 2 4 ° C f o r 1 5 d a y s ( t a k e n t e n t a t i v e l y ) . T h r e e r e p l i c a t e w e r e k e p t f o r e a c h H - i o n c o n c e n t r a t i o n s . D a y s o f I n c u b a t i o n : A p e r i o d o f 3 0 d a y s w a s s e l e c t e d t o o b s e r v e t h e o p t i m u m d a y s o f i n c u b a t i o n f o r t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f t h e f u n g u s . T h e b a s a l m e d i u m ( G l u c o s e - p e p t o n e ) w a s a d j u s t e d t o a n o p t i m u m p H o f 4 . 0 w i t h s t e r i l i z e d s o l u t i o n o f 1 N K O H a f t e r s t e r i l i z a t i o n a t 1 5 l b s p s i s t e a m p r e s s u r e f o r 1 5 m i n u t e s . T w e n t y f i v e m l o f t h e b a s a l m e d i a w e r e a p p o r t i o n e d i n e a c h 1 0 0 m l s t e r i l i z e d E r l e n m e y e r c o n i c a l f l a s k a s e p t i c a l l y a n d s e e d e d w i t h o n e m l o f t h e s t a n d a r d i z e d m y c e l i a l s u s p e n s i o n a n d i n c u b a t e d f o r 3 0 d a y s a t t h e i r c o r r e s p o n d i n g o p t i m u m t e m p e r a t u r e s 2 4 ° C . T h r e e r e p l i c a t e w e r e k e p t f o r e a c h v a r i a b l e . D e t e r m i n a t i o n o f m y c e l i a l d r y w e i g h t a n d f i n a l p H : A t t h e e n d o f e a c h e x p e r i m e n t , t h e m y c e l i u m o f e a c h r e p l i c a t e w a s f i l t e r e d t h r o u g h a g o o s c h c r u c i b l e o f k n o w n w e i g h t ( c o n t a i n i n g a d i s c o f W h a t m a n f i l t e r p a p e r N o . 1 ) . T h e m y c e l i u m w a s d r i e d a t 6 0 ° C i n a h o t a i r o v e n t o a c o n s t a n t w e i g h t a n d t h e w e i g h t o f t h e i n d i v i d u a l r e p l i c a t e w a s r e c o r d e d . T h e f i n a l p H o f t h e c u l t u r e f i l t r a t e o f t h e i n d i v i d u a l r e p l i c a t e w a s c h e c k e d o v e r P h i l i p s p r e c i s i o n i n s t r u m e n t P R 9 0 4 5 M a n d r e c o r d e d . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s o f t h e d a t a : T h e d a t a o n g r o w t h o f a l l t h e e x p e r i m e n t s w e r e a n a l y s e d s t a t i s t i c a l l y w i t h r e s p e c t t o d r y w e i g h t o f t h e m y c e l i u m o f i n d i v i d u a l r e p l i c a t e w i t h v a r i a b l e s b y a p p l y i n g o n e - w a y A n o v a i n t e r m s o f s i g n i f i c a n c e a n d n o n - s i g n i f i c a n c e o f t h e d a t a . T h e s i g n i f i c a n c e i s d e n o t e d b y s t a t i s t i c a l e r r o r ( S . E . ) a n d S t a t i s t i c a l e r r o r o f d i f f e r e n c e ( S . E d . ) B i o l u m i n e s c e n c e m e a s u r e m e n t : B i o l u m i n e s c e n c e h a s b e e n m e a s u r e d b y u s i n g a T D 2 0 / 2 0 ( V e r s i o n 2 . 2 ) l u m i n o m e t e r w i t h t h e s e n s i t i v i t y s e t a t 3 5 % a n d r e c o r d e d a s R e l a t i v e L i g h t U n i t s ( R L U ) . A l l b i o l u m i n e s c e n c e m e a s u r e m e n t s h a v e b e e n m a d e a t t h e s a m e t i m e . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N L i q u i d / s o l i d b a s a l m e d i a e x p e r i m e n t : I n t h e p r e s e n t s t u d y , G l u c o s e - p e p t o n e m e d i u m h a s b e e n f o u n d t o b e a n o p t i m u m m e d i u m f o r t h e l u m i n e s c e n c e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s ( P l a t e - 1 ) . T h e f i n a l H - i o n c o n c e n t r a t i o n o f t h e b a s a l m e d i a d i d n o t c h a n g e s i g n i f i c a n t l y w i t h t h e g r o w t h o f t h e f u n g u s . T h e f u n g u s w a s o b s e r v e d t o f o r m i n c o m p l e t e , s u b m e r g e d , d u l l w h i t e m y c e l i a l m a s s w i t h R a u l i n s a n d R i c h a r d s m e d i u m ; i n c o m p l e t e , s u b m e r g e d , c o t t o n y w h i t e m y c e l i a l m a s s w i t h D o x s , C o o n s , C z a p e k s - I , C z a p e k s - I I , G l u c o s e - n i t r a t e a n d A s t h a n a & H a w k e r s m e d i u m ; B r o w n s - I a n d B r o w n s - I I m e d i u m s h o w e d d i r t y w h i t e m y c e l i a l m a s s . I t f o r m s i n c o m p l e t e , s u p e r f i c i a l a s w e l l a s s u b m e r g e d , y e l l o w i s h w h i t e m y c e l i a l m a s s w i t h G l u c o s e - p e p t o n e m e d i u m . T h e f u n g u s s h o w s n o g r o w t h i n E l l i o t s m e d i u m . T h e d a t a o n a v e r a g e m y c e l i a l d r y w e i g h t p l o t t e d a g a i n s t d i f f e r e n t b a s a l m e d i a a r e d e p i c t e d i n F i g . 1 . T h e d a t a o n g r o w t h o f e a c h f u n g u s w e r e a n a l y s e d s t a t i s t i c a l l y i n t e r m s o f s t a n d a r d e r r o r ( S . E . ) a n d s t a n d a r d e r r o r o f d i f f e r e n c e ( S . E d . ) T e m p e r a t u r e r e l a t i o n s h i p : A t e m p e r a t u r e o f 2 4 ° C i s o p t i m u m f o r t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e ( P l a t e - 2 ) . T h e f i n a l p H o f t h e b a s a l m e d i u m d o e s n o t c h a n g e t o a s i g n i f i c a n t l e v e l b y t h e m y c e l i a g r o w t h . T h e f u n g u s f o r m s i n c o m p l e t e , s u p e r f i c i a l a s w e l l a s s u b m e r g e d , c o t t o n y w h i t e m y c e l i a l m a s s a t 1 6 ° C , 2 0 ° C , 2 4 ° C , a n d 2 8 ° C w h e r e a s i t f o r m s P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 1 5 4

s m a l l , s u b m e r g e d , d i r t y w h i t e m y c e l i a l m a s s a t 3 2 ° C . T h e d a t a o n a v e r a g e m y c e l i a l d r y w e i g h t / m y c e l i a l d i a m e t e r a n d l u m i n e s c e n c e p l o t t e d a g a i n s t d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e a r e d e p i c t e d i n F i g s . 3 & 4 . I t h a s b e e n n o t e d t h a t t e m p e r a t u r e a f f e c t s m y c e l i a g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e o f n a t u r a l l y b i o l u m i n e s c e n t f u n g i ( B e r m u d e s e t a l . , 1 9 9 0 ; B e r l i n e r , 1 9 6 1 ; B u l l e r , 1 9 2 4 ; Y a - l i L v , e t a l . , 2 0 1 0 a n d A i r t h e t a l . , 1 9 6 6 ) . B u l l e r 1 9 2 4 f o u n d a n o p t i m u m t e m p e r a t u r e b e t w e e n 1 0 ° C a n d 2 5 ° C a n d a m a x i m u m t e m p e r a t u r e o f 3 5 - 3 7 ° C f o r t h e l u m i n e s c e n c e o f P . s t i p t i c u s . B e r m u d e s e t a l . , 1 9 9 0 a n d B e r l i n e r , 1 9 6 1 r e p o r t e d t h e o p t i m u m P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 1 5 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 C o o n s B r o w n s - I B r o w n s - I I G l u c o s e - n i t r a t e A s t h a n a & H a w k e r s E l l i o t s R a u l i n s R i c h a r d s D o x s C z a p e k s - I C z a p e k s - I C z a p e k s - I P l a t e N o . 1 L u m i n e s c e n c e ( R L U s ) i n n a t u r a l l i g h t e x p o s u r e a n d d a r k c o n d i t i o n o f P a n e l l u s s t i p t i c u s w i t h d i f f e r e n t s o l i d b a s a l m e d i a a t 2 2 ° C a f t e r 1 5 d a y s o f i n c u b a t i o n .

t e m p e r a t u r e f o r l u m i n e s c e n c e o f P . s t i p t i c u s a t 2 2 ° C a n d 1 8 - 2 6 ° C , r e s p e c t i v e l y . W e i t z e t a l . , 2 0 0 1 , 2 0 0 2 , r e p o r t e d 2 2 ° C a s t h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e f o r b o t h m y c e l i a g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f P . s t i p t i c u s . T h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e f o r t h e g r o w t h o f b a s i d i o m y c e t e s h a s b e e n r e p o r t e d b e t w e e n 2 0 ° C a n d 3 0 ° C ( B o d d y , L , 1 9 8 3 ) . T h e t e m p e r a t u r e o p t i m a f o r m y c e l i a g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e t h a t w e r e f o u n d i n t h i s s t u d y f o r P . s t i p t i c u s w e r e s i m i l a r t o t h o s e i n p r e v i o u s s t u d i e s , b u t t h e y h a v e n o t p r e v i o u s l y b e e n d o n e o n l i q u i d m e d i u m . H y d r o g e n - i o n c o n c e n t r a t i o n r e l a t i o n s h i p s : T h e s t u d y r e v e a l s t h a t t h e o p t i m u m H - i o n c o n c e n t r a t i o n s f o r t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e i s r e c o r d e d a t 4 . 0 . T h e m e a n f i n a l p H o f t h e c u l t u r e f i l t r a t e d o e s n o t c h a n g e t o a s i g n i f i c a n t l e v e l w i t h t h e g r o w t h o f t h e f u n g u s . T h e f u n g u s f o r m s i n c o m p l e t e , s u b m e r g e d a s w e l l a s s u p e r f i c i a l , c o t t o n y w h i t e m y c e l i a l m a s s a t p H 3 . 0 - 6 . 0 w h e r e a s i t s h o w s n o g r o w t h a t p H 7 . 0 - 9 . 0 . T h e d a t a o n a v e r a g e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e p l o t t e d a g a i n s t H - i o n c o n c e n t r a t i o n s a r e d e p i c t e d i n F i g s . 5 & 6 . B e r m u d e s e t a l . , 1 9 9 0 r e p o r t e d t h a t P . s t i p t i c u s h a d a b i o l u m i n e s c e n c e o p t i m u m o f p H 3 . 8 , w i t h p o o r g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e b e l o w p H 3 . 6 o r a b o v e p H 4 . 4 a n d n o g r o w t h o r l u m i n e s c e n c e a t p H 6 . 0 o r a b o v e . W e i t z e t a l . , 2 0 0 1 r e p o r t e d o p t i m u m p H 3 . 5 - 4 . 0 f o r t h e g r o w t h o f P . s t i p t i c u s a n d p o o r m y c e l i a l g r o w t h a t p H 4 . 5 a n d a b o v e . T h e o p t i m u m p H f o r m y c e l i a l g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e w e r e f o u n d t o b e s i m i l a r t o t h o s e i n p r e v i o u s s t u d y b u t t h e s e s t u d i e s h a v e b e e n r e p o r t e d o n l y o n s o l i d m e d i u m a n d n o t o n d e f i n e d m e d i u m . D a y s o f i n c u b a t i o n r e l a t i o n s h i p : M a x i m u m l u m i n e s c e n c e i s e x h i b i t e d b y t h e f u n g u s a f t e r 1 3 d a y s o f i n c u b a t i o n i n l i q u i d m e d i u m w h e r e a s i n s o l i d m e d i u m a f t e r 1 3 d a y s o f i n c u b a t i o n i t d e c r e a s e s a n d t h e n i n c r e a s e s a f t e r 1 8 d a y s a n d o p t i m u m l u m i n e s c e n c e i s a t t a i n e d a f t e r 2 4 d a y s o f i n c u b a t i o n . P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 1 5 6 P l a t e N o . 2 B i o l u m i n e s c e n c e ( R L U s ) o f P a n e l l u s s t i p t i c u s w i t h s e l e c t e d t e m p e r a t u r e a f t e r 1 5 d a y s o f i n c u b a t i o n ( S o l i d ) . 1 6 ° C 2 0 ° C 2 4 ° C 2 8 ° C 3 2 ° C

T h e g r o w t h w a s d e c l i n e d a f t e r o p t i m u m d a y s o f i n c u b a t i o n i n t h e f u n g u s . T h e f i n a l p H o f t h e m e d i u m d o e s n o t c h a n g e t o a s i g n i f i c a n t l e v e l u p t o t h e o p t i m u m d a y s o f i n c u b a t i o n , t h e r e a f t e r i t s t a r t s i n c r e a s i n g i n i t s g r o w t h . T h e f u n g u s f o r m s i n c o m p l e t e , s u b m e r g e d , w h i t e m y c e l i a l m a s s u p t o t h e 7 t h d a y o f i n c u b a t i o n . I t f o r m s s u p e r f i c i a l a s w e l l a s s u b m e r g e d , c o t t o n y w h i t e m y c e l i a l m a s s f r o m 8 t h 1 8 t h d a y s o f i n c u b a t i o n a n d c o m p l e t e , t h i c k , s u p e r f i c i a l a s w e l l a s s u b m e r g e d , y e l l o w i s h w h i t e m y c e l i a l m a s s f r o m 1 9 t h 3 0 t h d a y o f i n c u b a t i o n . T h e d a t a o n a v e r a g e m y c e l i a l g r o w t h a n d b i o l u m i n e s c e n c e p l o t t e d a g a i n s t d a y s o f i n c u b a t i o n a r e d e p i c t e d i n F i g s . 7 & 8 . W e i t z e t a l . , 2 0 0 1 , r e p o r t e d t h a t t h e l u m i n e s c e n c e o c c u r a f t e r 8 d a y s i n P . s t i p t i c u s o n s o l i d m e d i u m . C O N C L U S I O N : T h e n a t u r a l l y b i o l u m i n e s c e n t t r o p i c a l f u n g u s P a n e l l u s s t i p t i c u s h a s b e e n s t u d i e d f o r t h e o p t i m i z a t i o n o f c u l t u r e c o n d i t i o n s ( c u l t u r e m e d i a , t e m p e r a t u r e , p H a n d d a y s o f i n c u b a t i o n ) . P u r e c u l t u r e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s w a s o b t a i n e d f r o m L u x B i o t e c h . L t d . U . K . a n d s t o c k c u l t u r e h a s b e e n m a i n t a i n e d o n m a l t y e a s t a g a r m e d i u m a t 0 - 4 ° C a n d r e v i v e d a f t e r t w o m o n t h s . G l u c o s e - p e p t o n e m e d i u m c o n t a i n i n g g / l : G l u c o s e 1 0 . 0 P e p t o n e 2 . 0 , p o t a s s i u m d i h y d r o g e n o r t h o p h o s p h a t e 1 . 0 , m a g n e s i u m s u l p h a t e 0 . 5 , h a s b e e n u s e d f o r t h e s t u d i e s o n t h e l u m i n e s c e n c e o f P a n e l l u s s t i p t i c u s i n a l l t h e e x p e r i m e n t s . T h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e f o r t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f t h e f u n g u s i s 2 4 ° C . T h e o p t i m u m H - i o n c o n c e n t r a t i o n f o r t h e g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f t h e f u n g u s i s 4 . 0 . T h e f u n g u s a t t a i n s m a x i m u m l u m i n e s c e n c e a f t e r 1 3 d a y s o f i n c u b a t i o n i n l i q u i d m e d i u m w h e r e a s i n s o l i d m e d i u m a f t e r 1 3 d a y s o f i n c u b a t i o n i t d e c r e a s e s a n d t h e n i n c r e a s e s a f t e r 1 8 d a y s o f i n c u b a t i o n a n d a t t a i n s o p t i m u m l u m i n e s c e n c e a f t e r 2 4 d a y s o f i n c u b a t i o n . A C K N O W L E D G E M E N T S : T h i s w o r k w a s f u n d e d b y D e p a r t m e n t o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y , G o v t . o f I n d i a w i d e g r a n t l e t t e r N o . P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 1 5 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9

I D P / S e n / 7 5 / 0 4 d a t e d 1 6 . 0 1 2 0 0 6 . T h e c u l t u r e o f P . s t i p t i c u s w a s p u r c h a s e d f r o m L u x B i o t e c h . L t d . U . K . T h e a u t h o r s a r e t h a n k f u l t o C h a i r p e r s o n , D e p a r t m e n t o f B o t a n y f o r p r o v i d i n g t h e n e c e s s a r y l a b f a c i l i t i e s a n d t o U G C , ( S A P , D R S - I I ) f o r t h e n e c e s s a r y e q u i p m e n t a n d i n f r a s t r u c t u r e . R E F E R E N C E S A i r t h R L , F o e r s t e r G E , B e h r e n s P Q . 1 9 6 6 . T h e l u m i n o u s f u n g i . I n : B i o l u m i n e s c e n c e i n P r o g r e s s ( J o h n s o n , F . H . a n d H a n e d a , Y . , E d s . ) , P r i n c e t o n U n i v e r s i t y P r e s s , P r i n c e t o n , N J 2 0 3 - 2 2 3 . B e r m u d e s D , G e r l a c h V L , N e a l s o n K H . 1 9 9 0 . E f f e c t s P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 1 5 8 5 p H 6 p H P l a t e N o . 3 L u m i n e s c e n c e ( R L U s ) o f P a n e l l u s s t i p t i c u s w i t h s e l e c t e d H - i o n c o n c e n t r a t i o n a f t e r 1 5 d a y s o f i n c u b a t i o n a t 2 4 ° C . 4 p H 3 p H 7 p H 8 p H 9 p H P l a t e . 4 P h o t o o f L u m i n e s c e n c e f u n g u s P . s t i p t i c u s d u r i n g d a y l i g h t e x p o s u r e a n d n i g h t c o n d i t i o n s a f t e r 2 4 d a y s o f i n c u b a t i o n .

o f c u l t u r e c o n d i t i o n s o n m y c e l i a l g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e i n P a n e l l u s s t y p t i c u s . M y c o l o g i a 8 2 : 2 9 5 - 3 0 5 . B e r l i n e r M D . 1 9 6 1 . S t u d i e s i n f u n g a l l u m i n e s c e n c e . M y c o l o g i a 5 3 : 8 4 - 9 0 . B o d d y L . 1 9 8 3 . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d w a t e r p o t e n t i a l o n g r o w t h r a t e o f w o o d - r o t t i n g b a s i d i o m y c e t e s . T r a n s . B r . M y c o l . S o c . , 8 0 : 1 4 1 - 1 4 9 . B u l l e r A H R . 1 9 2 4 . T h e b i o l u m i n e s c e n c e o f P a n u s s t i p t i c u s . I n : R e s e a r c h e s o n F u n g i , L o n g m a n s , G r e e n a n d C o . , L o n d o n . 3 : 3 5 7 - 4 3 1 . D e s j a r d i n D E , O l i v e i r a A G , S t e v a n i C V . 2 0 0 8 . F u n g i b i o l u m i n e s c e n c e r e v i s i t e d . P h o t o c h e m P h o t o b i o l S c i . , 7 : 1 7 0 - 1 8 2 . W a s s i n k E C . 1 9 7 8 . L u m i n e s c e n c e i n f u n g i . B i o l u m i n e s c e n c e i n A c t i o n ( H e r r i n g P J , e d ) , A c a d e m i c P r e s s , L o n d o n . 1 7 1 - 1 9 5 . W e i t z H J , B a l l a r d A L , C a m p b e l l C D , K i l l h a m K . 2 0 0 1 . T h e e f f e c t o f c u l t u r e c o n d i t i o n s o n t h e m y c e l i a l g r o w t h a n d l u m i n e s c e n c e o f n a t u r a l l y b i o l u m i n e s c e n t f u n g i . F E M S M i c r o b i o l L e t t . , 2 0 2 : 1 6 5 - 1 7 0 . W e i t z H J , C a m p b e l l C D , K i l l h a m K . 2 0 0 2 . D e v e l o p m e n t o f a n o v e l , b i o l u m i n e s c e n c e - b a s e d , f u n g a l b i o a s s a y f o r t o x i c i t y t e s t i n g . E n v i r o n M i c r o b i o l . , 4 : 4 2 2 - 4 2 9 . Y a - l i L v , L i - h u a S u n , F u - s h e n g Z h a n g , Y u e Z h a o , S h u n - x i n g G u o . 2 0 1 0 . T h e e f f e c t o f c u l t i v a t i o n c o n d i t i o n s o n t h e m y c e l i a l g r o w t h o f a d a r k - s e p t a t e e n d o p h y t i c i s o l a t e . A f r i c a n J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y R e s e a r c h 4 ( 8 ) : 6 0 2 - 6 0 7 . P r a s h e r e t a l . , 2 0 1 2 1 5 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 3 : 1 5 2 - 1 5 9 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t F i c u s p u b l i s h e r s . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g O p e n A c c e s s a n d Q u i c k s p r e a d i n g Y o u r e t a i n s y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m / s u b m i t 1 . a s p x .