J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y L a r v i c i d a l a c t i v i t y o f t h e a q u e o u s e x t r a c t o f t h e c l o v e ( E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a ) a g a i n s t A e d e s a e g y p t i ( D i p t e r a , C u l i c i d a e ) u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . K e y w o r d s : E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a , a q u e o u s e x t r a c t , l a r v i c i d e , b i o a s s a y , A e d e s a e g y p t i . A B S T R A C T : I n t h e s e a r c h f o r n e w a g e n t s c a p a b l e t o c o n t r o l t h e d e n g u e v e c t o r , A e d e s a e g y p t i , b i o a s s a y s w e r e p e r f o r m e d t o a s s e s s t h e l a r v i c i d a l a c t i v i t y o f a q u e o u s e x t r a c t o f c l o v e ( E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a ) u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . M o r t a l i t y d a t a o b t a i n e d a t 2 4 , 4 8 , a n d 7 2 h i n t e r v a l s w e r e s u b j e c t e d t o p r o b i t a n a l y s i s t o d e t e r m i n e t h e l e t h a l c o n c e n t r a t i o n s o f t h e e x t r a c t . L a r v a l m o r t a l i t y r a n g e d f r o m 4 3 t o 1 0 0 % a m o n g t h e c o n c e n t r a t i o n s w e r e s a m p l e d ( 2 5 x 1 0 3 , 5 0 x 1 0 3 , 1 0 0 x 1 0 3 , 1 5 0 x 1 0 3 , a n d 2 0 0 x 1 0 3 p p m ) . L C 5 0 a n d L C 9 0 v a l u e s w e r e : 2 9 . 7 x 1 0 3 a n d 6 3 . 5 x 1 0 3 p p m f o r 2 4 h ; 2 3 2 x 1 0 3 a n d 3 9 . 5 x 1 0 3 f o r 4 8 h ; a n d 2 2 . 0 x 1 0 3 a n d 3 3 . 7 x 1 0 3 p p m f o r 7 2 h , r e s p e c t i v e l y . T h e L C 5 0 v a l u e f o r t h e 2 4 h r e a d i n g d i f f e r e d f r o m t h e o t h e r s b y p r e s e n t i n g a h i g h c h i - s q u a r e v a l u e ; t h e r e f o r e , t h e L C 5 0 v a l u e f o r 4 8 h w a s u s e d a s r e f e r e n c e . T h e s e r e s u l t s s u g g e s t e d t h a t t h e c l o v e e x t r a c t p r e s e n t s b i o a c t i v e s u b s t a n c e s c a p a b l e o f k i l l i n g m o s q u i t o l a r v a e . 5 1 8 - 5 2 3 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 7 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : M e d e i r o s E S , C o s t a F M , R o d r i g u e s I B , T a d e i W P . I n s t i t u t i o n : I n s t i t u t o N a c i o n a l d e P e s q u i s a s d a A m a z ô n i a – I N P A / C P C S . L a b o r a t ó r i o d e M a l á r i a e D e n g u e . A v e n i d a A n d r é A r a ú j o , 2 9 3 6 P e t r ó p o l i s C E P 6 9 0 8 3 - 0 0 0 M a n a u s , A m a z o n a s , B r a s i l . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : M e d e i r o s E S E m a i l : m e d e i r o s . n i c e @ g m a i l . c o m ; t a d e i @ i n p a . g o v . b r T e l e p h o n e / f a x : 5 5 - 9 2 - 3 6 4 2 - 3 4 3 5 . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 4 0 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 3 N o v 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 1 0 N o v 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 1 2 N o v 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : M e d e i r o s E S , C o s t a F M , R o d r i g u e s I B , T a d e i W P . L a r v i c i d a l a c t i v i t y o f t h e a q u e o u s e x t r a c t o f t h e c l o v e ( E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a ) a g a i n s t A e d e s a e g y p t i ( D i p t e r a , C u l i c i d a e ) u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 7 : 5 1 8 - 5 2 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N A e d e s a e g y p t i L , 1 7 6 2 i s t h e m o s t i m p o r t a n t d e n g u e v e c t o r a n d y e l l o w f e v e r t r a n s m i t t e r i n u r b a n i z e d a r e a s . P r o b a b l y , i t c a m e f r o m A f r i c a ( F o r a t t i n i , 2 0 0 2 ) a n d w a s i n t r o d u c e d i n A m e r i c a s w i t h t h e t r a f f i c o f s l a v e s f r o m t h a t c o n t i n e n t ( K e t t l e , 1 9 9 2 ) . N o w a d a y s , t h i s v e c t o r i s d i s t r i b u t e d i n t h e t r o p i c a l a n d s u b t r o p i c a l r e g i o n s c o m p r i s e d m a i n l y b e t w e e n t h e p a r a l l e l s ( l a t i t u d e s ) 4 5 º N a n d 3 5 º S ( C o n s o l i & L o u r e n ç o - d e - O l i v e i r a , 1 9 9 4 ) . T h e g l o b a l e x p a n s i o n o f A . a e g y p t i f a c i l i t a t e d t h e d i s p e r s a l o f t h e d e n g u e v i r u s , t u r n i n g t h e d i s e a s e i n t o o n e o f t h e m a i n c u r r e n t p u b l i c h e a l t h p r o b l e m s ( G u b l e r , 2 0 0 4 ) . D e m o g r a p h i c a n d s o c i a l f a c t o r s c o n t r i b u t e t o m a i n t a i n t h e d i s e a s e i n e p i d e m i c l e v e l s , w i t h e m p h a s i s o n t h e a c c e l e r a t e d p o p u l a t i o n g r o w t h i n u r b a n a r e a s . T h e a v a i l a b i l i t y o f d i s p o s a b l e c o n t a i n e r s o f t h e m o d e r n s o c i e t , a n d t h e i n e f f i c i e n c y o f g a r b a g e c o l l e c t i n g a n d t r e a t m e n t s y s t e m s p a v e s t h e w a y f o r i t s e a s y s p r e a d . ( B r a s i l - F u n a s a , 2 0 0 1 ) . T h e m o s q u i t o h a s p r e d o m i n a n t l y s y n a n t h r o p i c a n d a n t h r o p o p h i l i c h a b i t s , a n d a g r e a t a d a p t i v e c a p a c i t y t o a r t i f i c i a l b r e e d i n g g r o u n d s w i t h u n p o l l u t e d w a t e r . W o r l d w i d e c o n t r o l o f A . a e g y p t i h a s b e c o m e i n c r e a s i n g l y d i f f i c u l t d u e t o s e v e r a l f a c t o r s , m a i n l y t h e w i d e a v a i l a b i l i t y o f c o n t a i n e r s f o r t h e d e v e l o p m e n t o f t h e i m m a t u r e f o r m s ( P i n h e i r o a n d T a d e i , 2 0 0 2 a ) , t h e c o m p l e x i t y o f u r b a n c e n t r e s , t h a t m a x i m i z e t h e p r o b l e m s o f t h e s p a t i a l a p p l i c a t i o n o f i n s e c t i c i d e s ( S i l v a e t a l . , 2 0 0 1 ) , a n d t h e e m e r g e n c e o f p o p u l a t i o n s r e s i s t a n t t o i n s e c t i c i d a l p h o s p h o r o u s a n d p y r e t h r o y d c o m p o u n d s ( P i n h e i r o & T a d e i , 2 0 0 2 b ; L i m a e t a l . , 2 0 0 3 ; M a r c o r i s e t a l . , 2 0 0 3 ) . T h e r e f o r e , t h e r e i s a n e e d t o r e s e a r c h n e w i n s e c t i c i d a l s u b s t a n c e s c a p a b l e o f i n t e r f e r i n g i n t h e d e v e l o p m e n t o f t h e v e c t o r , k e e p i n g i t u n d e r c o n t r o l a t l o w p o p u l a t i o n a l l e v e l s . R e c e n t l y , s e v e r a l p l a n t e x t r a c t s w e r e t e s t e d a g a i n s t A . a e g y p t i l a r v a e ( G u s m ã o e t a l . , 2 0 0 2 ; C a r v a l h o e t a l . , 2 0 0 3 ; L u n a e t a l . , 2 0 0 4 ; P o h l i t e t a l . , 2 0 0 4 ; S i l v a e t a l . , 2 0 0 4 ; S i m a s e t a l . , 2 0 0 4 ; F u r t a d o e t a l . , 2 0 0 5 ; M e n d o n ç a e t a l . , 2 0 0 5 ) , m o s t o f t h e m a l r e a d y i n u s e f o r t h e r a p e u t i c a l a p p l i c a t i o n s b y t h e g e n e r a l p o p u l a t i o n . I n t h i s s t u d y , t h e s p e c i e s E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a T h u m b e r g ( M y r t a c e a e ) , p o p u l a r l y k n o w n a s c l o v e , w a s s e l e c t e d t o s t u d y l a r v i c i d a l a c t i v i t y a g a i n s t A . a e g y p t i u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . T h i s p l a n t i s r o u t i n e l y u s e d f o r c o o k i n g w o r l d w i d e . I t s f l o r a l b u d s a r e h a r v e s t e d w h e n t h e i r c o l o r s h i f t s f r o m g r e e n t o c r i m s o n a n d a r e c a r e f u l l y s u n d r i e d . W h e n t h e f r u i t i s e v e n t u a l l y p r o d u c e d , t h e c o m m e r c i a l p a r t h a s a l r e a d y b e e n l o s t , s i n c e o n l y t h e d r i e d f l o r a l b u d i s v a l u a b l e . T h i s p a r t o f t h e p l a n t i s w i d e l y c o n s u m e d a s f l a v o u r , f o r c o o k i n g , a n d f o r t e a , b e c a u s e i t h a s c a r m i n a t i v e p r o p e r t i e s a n d i s a s t i m u l a n t f o r t h e d i g e s t i v e f u n c t i o n s ( C o s t a e t a l . , 2 0 0 5 ) . T h e g r e a t i m p o r t a n c e o f t h e c l o v e s t e m s a r e f r o m i t s e s s e n t i a l o i l s , e s p e c i a l l y e u g e n o l , w h i c h p o s s e s s e s a n a l g e s i c , a n t i - s e p t i c , a n t i p a r a s i t i c , a n d a n t i m i c r o b i a l a c t i o n ( K e l e c o m e t a l . , 2 0 0 2 ) . H o w e v e r , i n f o r m a t i o n o n t h i s m e t a b o l i t e ’ s b i o l o g i c a l a c t i v i t y o n i n s e c t s i s s c a n t . T h e l i t e r a t u r e a v a i l a b l e t h a t d e s c r i b e s A . a e g y p t i l a r v a l m o r t a l i t y c a u s e d b y E . c a r y o p h y l l a t a ’ s e s s e n c i a l o i l s w e r e n o t i c e d ( C o s t a e t a l . , 2 0 0 5 ) . T h e a c a r i c i d a l a c t i v i t y o f t h i s p l a n t ’ s a q u e o u s e x t r a c t h a s a l s o b e e n d e s c r i b e d b y G o n ç a l v e s e t a l . ( 2 0 0 1 ) . I n l a b o r a t o r y t e s t s w i t h i m m a t u r e M o n o n y c h e l l u s t a n a j o a B o n d a r , 1 9 3 8 ( A c a r i , T e t r a n y c h i d a ) , t h e a u t h o r s r e c o r d e d u p t o 1 0 % m o r t a l i t y a f t e r 4 8 h o u r s o f e x p o s u r e t o t h e e x t r a c t . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S O b t a i n i n g t h e a q u e o u s e x t r a c t T h e a q u e o u s e x t r a c t w a s o b t a i n e d f r o m c l o v e f l o r a l b u d s s e l e c t e d a t t h e f r e e c e n t r a l m a r k e t o f M a n a u s , A m a z o n a s S t a t e . I n i t i a l l y , 6 0 g w e r e w e i g h e d i n a n a n a l y t i c a l s c a l e s , a n d t h e n p u t i n 2 0 0 m L o f d i s t i l l e d w a t e r a n d g r o u n d i n a c o m m o n m i x e r f o r 2 m i n . T h e m i x t u r e o b t a i n e d w a s f i l t e r e d t h r o u g h a f i n e m e s h t i s s u e . D i s t i l l e d w a t e r w a s a d d e d t o t h e m i x t u r e u n t i l a 2 0 0 x 1 0 3 p p m s t o c k s o l u t i o n o f t h e e x t r a c t w a s o b t a i n e d . B i o a s s a y s F o r t h e l a b o r a t o r y b i o a s s a y s , w e u s e d t h i r d s t a g e A . a e g y p t i l a r v a e o b t a i n e d f r o m a c o l o n y f r o m t h e M a l a r i a a n d D e n g u e L a b o r a t o r y ’ s i n s e c t a r y o f t h e N a t i o n a l I n s t i t u t e o f A m a z o n i a n R e s e a r c h - I N P A , m a i n t a i n e d a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d d e s c r i b e d b y C o n s o l i a n d L o u r e n ç o - d e - O l i v e i r a ( 1 9 9 4 ) . T h e c o n d i t i o n s a t t h e i n s e c t a r y a n d t h e b i o a s s a y s r o o m w e r e : t e m p e r a t u r e 2 6 ± 2 ° C , r e l a t i v e h u m i d i t y a r o u n d 8 0 % , a n d a 1 2 h o u r s b r i g h t / 1 2 h o u r s d a r k p h o t o p h a s e . A s e r i e s o f b i o a s s a y s w a s i m p l e m e n t e d f o l l o w i n g t h e p r o t o c o l r e c o m m e n d e d b y t h e W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n - W H O ( 1 9 8 1 ) , a c c o r d i n g t o t h e c r i t e r i a i n D u l m a g e e t a l . ( 1 9 9 0 ) . T h e c o n c e n t r a t i o n s t e s t e d w e r e 2 5 x 1 0 3 , 5 0 x 1 0 3 , 1 0 0 x 1 0 3 , 1 5 0 x 1 0 3 , a n d 2 0 0 x 1 0 3 p p m , e a c h p r e p a r e d i n 5 1 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 7 : 5 1 8 - 5 2 3 M e d e i r o s e t a l . , 2 0 1 1

p l a s t i c v i a l s c o n t a i n i n g 1 0 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r , 2 0 A . a e g y p t i l a r v a e , t h e d e s i r e d c o n c e n t r a t i o n o f t h e e x t r a c t i v e , a n d 1 m l o f f o o d , i n f i v e r e p l i c a t e s . T h e b i o a s s a y s w e r e r e p e a t e d i n t h r e e d i s t i n c t m o m e n t s , t o t a l i n g 3 0 0 l a r v a e f o r e a c h c o n c e n t r a t i o n . A c o n t r o l g r o u p r e c e i v e d t h e s a m e t r e a t m e n t s , e x c e p t i n g t h e c o n c e n t r a t i o n o f t h e e x t r a c t i v e . T h e l a r v a l m o r t a l i t y r e a d i n g s w e r e p e r f o r m e d 2 4 , 4 8 , a n d 7 2 h o u r s a f t e r t h e o n s e t o f e a c h b i o a s s a y . D a t a a n a l y s i s T h e l a b o r a t o r y b i o a s s a y m o r t a l i t y d a t a w e r e l o g - p r o b i t t r a n s f o r m e d ( F i n n e y , 1 9 8 1 ) a n d a n a l y z e d b y l i n e a r r e g r e s s i o n w i t h t h e s t a t i s t i c a l p r o g r a m P o l o P C ( L e O r a S o f t w a r e , 1 9 8 7 ) . T h i s p r o g r a m t e s t e d t h e a d e q u a c y o f t h e d o s e - m o r t a l i t y r e l a t i o n ; t h e r e f o r e , a s s a y s w i t h v a l u e s P < 0 . 0 5 w e r e n o t c o n s i d e r e d f o r t h e f i n a l c a l c u l a t i o n o f L C 5 0 a n d L C 9 0 . L C 5 0 v a l u e s f o r t h e t h r e e r e a d i n g i n t e r v a l s w e r e c o m p a r e d a t t h e 5 % p r o b a b i l i t y l e v e l . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N T h e d a t a o n p e r c e n t m o r t a l i t y f o r t h e t e s t e d a n d c o n t r o l c o n c e n t r a t i o n s i n t h e r e a d i n g i n t e r v a l s s a m p l e d a r e a v a i l a b l e i n T a b l e 1 . T h e c l o v e a q u e o u s e x t r a c t s h o w e d l a r v i c i d a l a c t i v i t y a t a l l t e s t e d c o n c e n t r a t i o n s , c a u s i n g b e t w e e n 4 3 % t o 1 0 0 % m o r t a l i t y i n t h e s a m p l e d p e r i o d s . I n t h e 2 4 h o u r s i n t e r v a l , p e r c e n t m o r t a l i t y f o r t h e 2 5 x 1 0 3 a n d 5 0 x 1 0 3 p p m c o n c e n t r a t i o n s w a s 4 3 . 0 a n d 7 3 . 6 % , r e s p e c t i v e l y . I n t h e 4 8 h o u r s i n t e r v a l , i t w a s 5 7 . 3 a n d 6 5 . 0 % , r e s p e c t i v e l y , f o r t h e s a m e c o n c e n t r a t i o n s . I n t h e 7 2 h o u r s r e a d i n g , i t w a s 6 5 . 0 a n d 9 9 . 3 % , r e s p e c t i v e l y , a g a i n f o r t h e s a m e c o n c e n t r a t i o n s . F o r t h e r e m a i n i n g c o n c e n t r a t i o n s ( 1 0 0 x 1 0 3 , 1 5 0 x 1 0 3 , a n d 2 0 0 x 1 0 3 ) , m o r t a l i t y w a s 1 0 0 % i n t h e t h r e e i n t e r v a l s . F o r t h e c o n t r o l , m o r t a l i t y w a s 0 . 3 % . T h e d a t a o n l e t h a l c o n c e n t r a t i o n s L C 5 0 a n d L C 9 0 i n t h e t h r e e r e a d i n g i n t e r v a l s c o n s i d e r e d a n d t h e i r r e s p e c t i v e c o n f i d e n c e i n t e r v a l s a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 2 . I n t h e 2 4 h o u r s r e a d i n g , t h e l e t h a l c o n c e n t r a t i o n s L C 5 0 a n d L C 9 0 w e r e 2 9 . 7 x 1 0 3 a n d 6 3 . 5 x 1 0 3 p p m r e s p e c t i v e l y . I n t h e 4 8 h o u r s i n t e r v a l , a L C 5 0 o f 2 3 . 2 x 1 0 3 p p m a n d a L C 9 0 o f 3 9 . 5 x 1 0 3 p p m w e r e r e c o r d e d . I n t h e 7 2 h o u r s r e a d i n g , L C 5 0 a n d L C 9 0 w e r e 2 2 . 0 x 1 0 3 p p m a n d 3 3 . 7 x 1 0 3 p p m s r e s p e c t i v e l y ( T a b l e 2 ) . T h e r e w e r e d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e L C 5 0 o f t h e 2 4 a n d 4 8 h o u r s , a n d 2 4 a n d 7 2 h o u r s r e a d i n g i n t e r v a l s . N o d i f f e r e n c e w e r e d e t e c t e d b e t w e e n 4 8 a n d 7 2 h o u r s . T h e c h i - s q u a r e v a l u e o b t a i n e d i n t h e 2 4 h o u r s i n t e r v a l w a s h i g h ( χ 2 = 2 0 . 3 ; d f 3 ; P < 0 . 0 0 1 ) i n r e l a t i o n t o t h o s e o f 4 8 h o u r s ( χ 2 = 0 . 0 7 ; d f 3 ; P > 0 . 0 5 ) a n d 7 2 h o u r s ( χ 2 = 0 . 0 0 ; d f 3 ; P > 0 . 0 5 ) . T h e m o s q u i t o A e d e s a e g y p t i i s m e d i c a l l y i m p o r t a n t a s a t r a n s m i t t e r , e s p e c i a l l y o f t h e d e n g u e v i r u s ; f u r t h e r m o r e , t h i s s p e c i e s i s h i g h l y v a l u a b l e a s a b i o l o g i c a l m o d e l f o r t h e t e s t i n g o f b i o a c t i v e s u b s t a n c e s , e s p e c i a l l y p l a n t e x t r a c t s . I n t h e l a s t f e w y e a r s , s e v e r a l e x t r a c t s f r o m t h e B r a z i l i a n f l o r a h a v e b e e n t e s t e d f o r i n s e c t i c i d a l a c t i v i t y f o r t h i s m o s q u i t o s p e c i e s , m o s t o f t h e m g i v i n g p r o m i s i n g r e s u l t s ( G u s m ã o e t a l . , 2 0 0 2 ; C a r v a l h o e t a l . , 2 0 0 3 ; L u n a e t a l . , 2 0 0 4 ; P o h l i t e t a l . , 2 0 0 4 ; S i l v a e t a l . , 2 0 0 4 ; S i m a s e t a l . , 2 0 0 4 ; F u r t a d o e t a l . , 2 0 0 5 ; M e n d o n ç a e t a l . , 2 0 0 5 ) . C o n s i d e r i n g t h e s t u d i e s w i t h e s s e n t i a l o i l s o f M y r t a c e a e s p e c i e s , d a t a b y C o s t a e t a l . ( 2 0 0 5 ) w i t h t h e s p e c i e s E . c a r y o p h y l l a t a s h o w e d l a r v i c i d a l a c t i v i t y f o r A . a e g y p t i , w i t h a n L C 5 0 o f 2 1 . 4 p p m , r e a c h i n g 1 0 0 % m o r t a l i t y a t t h e 1 0 0 , 2 5 0 , 5 0 0 , a n d 1 , 0 0 0 p p m c o n c e n t r a t i o n s . T h e s t u d i e s b y A g u i l e r a e t a l . ( 2 0 0 3 ) w i t h E . m e l a n a d e n i a K r u g & U r b . f o u n d h i g h e r v a l u e s o f L C 5 0 f o r A . a e g y p t i l a r v a e – n e a r l y f o u r t i m e s h i g h e r – 8 5 p p m . T h e d a t a b y C a v a l c a n t i e t a l . ( 2 0 0 4 ) f o r S y z y g i u m j a m b o l a n a D C – 4 3 3 p p m – w e r e m u c h h i g h e r . T a k i n g i n t o a c c o u n t t h e s t u d i e s w i t h m e t h a n o l i c e x t r a c t o f t h e s e M y r t a c e a e , H a n e t a l . ( 2 0 0 6 ) f o u n d w i t h E . c a r y o p h y l l a t a , u s i n g l a r v a e o f A t t a g e n u s u n i c o l o r j a p o n i c u s R t t , 1 8 7 7 ( C o l e o p t e r a , D e r m e s t i d a e ) , 4 0 % t o 5 0 % m o r t a l i t y a f t e r s e v e n d a y s o f a p p l i c a t i o n i n l a b o r a t o r y b i o a s s a y s . T h e a u t h o r s u s e d a 1 . 3 t o 5 . 2 m g / c m 2 d o s a g e , a n d 1 4 d a y s a f t e r e x p o s u r e m o r t a l i t y r o s e t o v a l u e s b e t w e e n 6 7 % a n d 1 0 0 % . I n t h e s t u d i e s w i t h a q u e o u s e x t r a c t s o f E . c a r y o p h y l l a t a , G o n ç a l v e s e t a l . ( 2 0 0 1 ) r e c o r d e d b e t w e e n 2 . 5 a n d 1 0 % m o r t a l i t y i n t h e 2 4 a n d 4 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 7 : 5 1 8 - 5 2 3 5 2 0 M e d e i r o s e t a l . , 2 0 1 1 C o n c e n t r a t i o n s ( p p m ) n R e a d i n g i n t e r v a l s ( h o u r s ) 2 4 4 8 7 2 C o n t r o l 3 0 0 0 0 . 3 0 0 . 3 0 0 . 3 2 5 x 1 0 3 3 0 0 4 3 . 0 5 7 . 3 6 5 . 0 5 0 x 1 0 3 3 0 0 7 3 . 6 9 6 . 6 9 9 . 3 1 0 0 x 1 0 3 3 0 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 5 0 x 1 0 3 3 0 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 2 0 0 x 1 0 3 3 0 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 T a b l e 1 . P e r c e n t m o r t a l i t y p e r c o n c e n t r a t i o n o f t h e a q u e o u s e x t r a c t o f t h e c l o v e ( E u g e n i a c a r y o p h y l l a t a ) f o r t h e t h i r d s t a g e l a r v a e o f A e d e s a e g y p t i i n t h e 2 4 , 4 8 , a n d 7 2 h o u r s r e a d i n g i n t e r v a l s u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s .