J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y F i r s t r e p o r t o f a n t h r a c n o s e d i s e a s e o f A l o e v e r a c a u s e d b y C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s K e y w o r d s : A l o e v e r a , A n t h r a c n o s e , C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s . A B S T R A C T : A n e w d i s e a s e o f A l o e v e r a w a s f o u n d i n M a d h y a P r a d e s h , I n d i a h a v i n g r e d d i s h b r o w n t o b r o w n c o l o u r l e s i o n s o n l e a f s u r f a c e . T h e d i s e a s e w a s f o u n d t o b e c a u s e d b y a f u n g u s . T h e f u n g u s w a s e x c l u s i v e l y i s o l a t e d f r o m t h e d i s e a s e s p o t s , a n d t y p i c a l s y m p t o m s w e r e r e p r o d u c e d a f t e r i n o c u l a t i o n w i t h t h e i s o l a t e . T h e c a u s a l f u n g u s w a s i d e n t i f i e d a s C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s P e n z . & S a c c . 4 0 8 - 4 1 0 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 6 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : S h u b h i A v a s t h i 1 , A j a y K u m a r G a u t a m 2 a n d R e k h a B h a d a u r i a 1 . I n s t i t u t i o n : 1 S c h o o l o f S t u d i e s i n B o t a n y , J i w a j i U n i v e r s i t y , G w a l i o r - 4 7 4 0 1 1 ( M . P . ) I n d i a . 2 D e p a r t m e n t o f B o t a n y , A b h i l a s h i I n s t i t u t e o f L i f e S c i e n c e s , M a n d i - 1 7 5 0 0 8 , ( H . P . ) , I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : R e k h a B h a d a u r i a E m a i l : r e k h a b h a d a u r i a @ y a h o o . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 0 5 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 1 6 S e p 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 8 S e p 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 1 2 O c t 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : S h u b h i A v a s t h i , A j a y K u m a r G a u t a m a n d R e k h a B h a d a u r i a . F i r s t r e p o r t o f a n t h r a c n o s e d i s e a s e o f A l o e v e r a c a u s e d b y C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 6 : 4 0 8 - 4 1 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N A l o e b a r b a d e n s i s ( L . ) B u r m . F i l . p o p u l a r l y k n o w n a s A l o e v e r a , i s a p e r e n n i a l , d r o u g h t r e s i s t a n c e , s u c c u l e n t m e d i c i n a l h e r b b e l o n g s t o t h e f a m i l y A l o e a c e a e ( B a r c r o f t a n d M y s k j a , 2 0 0 3 ) . I t h a s a l o n g , f l e s h y s w o r d - s h a p e d l e a v e s , w i t h s h a r p p o i n t s a r r a n g e d i n a r o s e t t e p a t t e r n . A l o e v e r a i s b e l i e v e d t o h a v e o r i g i n a t e d i n A f r i c a n c o n t i n e n t s p e c i f i c a l l y i n E g y p t ( D a u d u , 2 0 0 0 ) . T h e c e n t r a l b u l k o f t h e l e a f c o n t a i n s c o l o u r l e s s m u c i l a g i n o u s p u l p ( A . v e r a g e l ) , m a d e u p o f l a r g e , t h i n w a l l e d m e s o p h y l l c e l l s . T h e p l a n t c o n t a i n s 9 5 9 6 % w a t e r a n d o v e r 7 5 o t h e r c o n s t i t u e n t s w h i c h i n c l u d e v i t a m i n s , m i n e r a l s , e n z y m e s , s u g a r s , p h e n o l i c c o m p o u n d s , s a p o n i n s a n d a m i n o a c i d s ( B o u d r e a u a n d B e l a n d , 2 0 0 6 ) . I t i s h i g h l y a p p r e c i a t e d d u e t o i t s s h o r t g r o w t h p e r i o d a n d h i g h l y e c o n o m i c v a l u e . I n I n d i a t h e p l a n t i s m a i n l y c u l t i v a t e d i n R a j a s t h a n , A n d h r a P r a d e s h , G u j a r a t , M a d h y a P r a d e s h a n d M a h a r a s h t r a . T o t a l p r o d u c t i o n o f A . v e r a i n I n d i a h a s b e e n e s t i m a t e d t o b e 1 , 0 0 , 0 0 0 t o n n e s ( D u b e y a n d P a n d e y , 2 0 0 9 ) . I t i s u s e d f o r i t s l a x a t i v e , a n t i - i n f l a m m a t o r y , i m m u n o s t i m u l a n t a n d a n t i s e p t i c e f f e c t ( C a p a s s o e t a l , 1 9 9 8 ) . I t i s v e r y m u c h e f f e c t i v e f o r t h e t r e a t m e n t o f s o r e a n d w o u n d s , s k i n d i s e a s e s , r e d u c e b l o o d s u g a r i n d i a b e t e s , a r t h r i t i c s w e l l i n g , c o n s t i p a t i o n a n d p i l e ( R a j e n d r a n e t a l , 2 0 0 7 ) . O c c u r r e n c e a n d s y m p t o m s D u r i n g t h e s u r v e y o f v a r i o u s n u r s e r i e s o f G w a l i o r c i t y , I n d i a , a t y p i c a l a n t h r a c n o s e s y m p t o m o n t h e l e a f s u r f a c e o f A . v e r a w a s o b s e r v e d i n A u g u s t , 2 0 1 0 . T h e s y m p t o m s o f a n t h r a c n o s e w e r e b e g a n a s a s m a l l r o u n d t o o v a l , w a t e r - s o a k e d d a r k g r e e n a r e a a b o u t 1 - 2 m m i n d i a m e t e r . T h e s e a r e a i n c r e a s e i n t o c i r c u l a r s p o t s w i t h t a n t o l i g h t b r o w n c e n t r e b o r d e r e d b y w a t e r s o a k e d t i s s u e . A s t h e s e s p o t s e x p a n d , c e n t r e o f t h e l e s i o n b e c o m e r e d d i s h b r o w n t o b r o w n c o l o r . T h e a v e r a g e d i a m e t e r o f t h e s p o t s w a s 3 - 3 0 m m a n d t h e s i z e o f t h e n e c r o t i c a r e a s i n c r e a s e s a s s p o t s c o a l e s c e ( F i g u r e 1 A & B ) . T h e a c e r v u l i o n i n f e c t e d l e a v e s p r o d u c e d b l a c k c o l o u r e d s p o r e m a s s u n d e r h i g h h u m i d c o n d i t i o n ( F i g u r e 1 C ) . I n t h e a d v a n c e s t a g e o f i n f e c t i o n , s p o t s a p p e a r e d o n b o t h t h e s u r f a c e s o f l e a f , a f f e c t e d a r e a l o s t t h e m u c i l a g i n o u s g e l a n d l e a d s t h e d e a t h o f i n f e c t e d l e a v e s . I s o l a t i o n a n d I d e n t i f i c a t i o n o f t h e f u n g u s I s o l a t i o n o f t h e p a t h o g e n w a s d o n e b y c o l l e c t i n g d i s e a s e d p l a n t s a m p l e s f r o m v a r i o u s n u r s e r i e s . L e a v e s s h o w i n g t h e t y p i c a l s y m p t o m s w e r e t h o r o u g h l y w a s h e d i n t a p w a t e r a n d c u t i n t o s m a l l p i e c e s . T h e s e p i e c e s w e r e s u r f a c e s t e r i l i z e d w i t h 1 % s o d i u m h y p o c h l o r i t e ( N a O C l ) f o r 2 m i n a n d w a s h e d 3 - 4 t i m e s i n s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r . T h e s u r f a c e s t e r i l i z e d l e a f p i e c e s w e r e t h e n a s e p t i c a l l y t r a n s f e r r e d t o p e t r i p l a t e s c o n t a i n i n g P o t a t o D e x t r o s e A g a r m e d i a . P l a t e s w e r e i n c u b a t e d a t 2 5 ± 2 º f o r 4 t o 5 d a y s a n d t h e i s o l a t e w a s p u r i f i e d b y s i n g l e s p o r e i s o l a t i o n a n d m a i n t a i n e d o n P D A m e d i u m t o k e e p t h e c u l t u r e s v i a b l e . T h e f u n g a l c o l o n y a p p e a r e d o n i n o c u l a t e d t i s s u e w e r e w h i t e t o g r e y w i t h p u f f y m y c e l i u m a n d d a r k o r a n g e c o l o u r , s u r r o u n d e d b y w h i t e z o n e o n t h e r e v e r s e s i d e ( F i g u r e 1 D ) . A c e r v u l i w e r e f o r m e d a f t e r 1 5 - 2 0 d a y s o f i n o c u l a t i o n . C o n i d i o p h o r e s w e r e s i m p l e , s h o r t a n d e r e c t . T h e c o n i d i a w e r e h y a l i n e , o n e c e l l e d , o v o i d t o o b l o n g a n d d u m b b e l l s h a p e d . T h e s i z e o f c o n i d i a v a r i e d f r o m 1 2 . 5 - 1 8 × 3 - 5 µ m ( F i g . 1 F ) . S e t a e w e r e 1 - 4 s e p t a t e , b r o w n a n d r a n g e d i n s i z e f r o m 4 2 - 1 5 0 × 4 - 5 µ m ( F i g u r e 1 E ) . B a s e d o n t h e s y m p t o m s , m y c e l i a a n d c o n i d i a l c h a r a c t e r s , t h e f u n g u s w a s i d e n t i f i e d a s C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s ( P e n z . ) P e n z . & S a c c . , w h i c h w a s f u r t h e r c o n f i r m e d a t I n d i a n A g r i c u l t u r a l R e s e a r c h I n s t i t u t e , N e w D e l h i ( # I T C C - 7 8 0 0 . 1 0 ) . P a t h o g e n i c i t y o f t h e f u n g u s P a t h o g e n i c i t y o f t h e f u n g u s w a s c a r r i e d o u t b y p i n p r i c k m e t h o d o n d e t a c h e d l e a v e s . S m a l l 5 - 6 m o n t h o l d p l a n t s o f A l o e v e r a w e r e p l a n t e d i n p o t s f i l l e d w i t h f e r t i l i z e d s o i l a n d c u l t i v a t e d f o r 6 - 8 w e e k s i n a g l a s s h o u s e . H e a l t h y l e a v e s w e r e s e l e c t e d a n d a s u s p e n s i o n ( 1 0 5 c o n i d i a / m l ) o f 7 - 8 d a y s o l d c u l t u r e o f C . g l o e o s p o r i o i d e s w a s s p r a y e d o n t o p i n p r i c k e d l e a v e s i n p e t r i d i s h e s l i n e d w i t h m o i s t s t e r i l e b l o t t i n g p a p e r . D e t a c h e d p i n p r i c k e d l e a v e s s p r a y e d w i t h s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r w e r e s e r v e d a s c o n t r o l . T h e p e t r i d i s h e s w e r e i n c u b a t e d a t 2 5 ± 2 º C f o r 6 - 7 d a y s u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . T h e p a t h o g e n w a s a p p e a r e d o n t h e i n o c u l a t e d l e a v e s a n d t h e f u n g u s w a s c o n s i s t e n t l y r e - i s o l a t e d f r o m i n f e c t e d l e a f o n t o P o t a t o D e x t r o s e A g a r m e d i a . N o s y m p t o m s w e r e o b s e r v e d i n c o n t r o l l e a v e s . C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s h a s p r e v i o u s l y b e e n r e p o r t e d a s a n a n t h r a c n o s e p a t h o g e n o f o l i v e s ( O l e a e u r o p a e a ) i n A u s t r a l i a ( S e r g e e v a e t a l , 2 0 0 8 ) , o n o n i o n ( A l l i u m c e p a ) i n B e n i n ( S i k i r o u e t a l , 2 0 1 1 ) a n d i n K o k u m ( G a r c i n i a i n d i c i a ) ( J a d h a v e t a l , 2 0 0 9 ) a n d c l o v e ( S y z y g i u m a r o m a t i c u m ) ( J a d h a v e t a l , 2 0 0 8 ) f r o m I n d i a . T o t h e b e s t o f o u r k n o w l e d g e ; t h i s i s t h e f i r s t r e p o r t o f a n t h r a c n o s e d i s e a s e o f A l o e v e r a i n I n d i a . A C K N O W L E D G E M E N T T h e a u t h o r s a r e t h a n k f u l t o H e a d , S c h o o l o f S t u d i e s i n B o t a n y , J i w a j i U n i v e r s i t y , G w a l i o r , 4 0 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 6 : 4 0 8 - 4 1 0 A v a s t h i e t a l . , 2 0 1 1

M a d h y a P r a d e s h , I n d i a , f o r p r o v i d i n g n e c e s s a r y l a b o r a t o r y f a c i l i t i e s a n d c o n s t a n t s u p p o r t . R E F E R E N C E S S i k i r o u R , B e e d F , H o t è g n i F , W i n t e r S , A s s o g b a - K o m l a n F , R e e d e r R M i l l e r S A . 2 0 1 1 . F i r s t r e p o r t o f a n t h r a c n o s e c a u s e d b y C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s o n o n i o n ( A l l i u m c e p a ) i n B e n i n . N e w D i s . R e p o r t s 2 3 : 7 . S e r g e e v a V , S p o o n e r - H a r t R , N a i r N G . 2 0 0 8 . C o l l e t o t r i c h u m a c u t a t u m a n d C . g l o e o s p o r i o i d e s c a u s i n g l e a f s p o t s o f o l i v e s ( O l e a e u r o p a e a ) i n A u s t r a l i a . A u s . P l . D i s . N o t e s 3 : 1 4 3 - 1 4 4 . J a d h a v S K , D i w a k a r M P , S a w a n t U K , K a d a m J J . 2 0 0 8 . M a n a g e m e n t o f l e a f s p o t d i s e a s e o f K o k u m ( G a r c i n i a i n d i c a ) i n c i t e d b y C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s P e n z . J . P l . D i s . S c . , 3 . J a d h a v S N , G a d r e U A , K a d a m J J , J o s h i M S , S a w a n t U K . 2 0 0 9 . I n v i t r o e v a l u a t i o n o f b i o a g e n t s a g a i n s t C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s P e n z . c a u s i n g l e a f s p o t o f c l o v e . J . P l . D i s . S c . 4 : 1 0 4 - 1 0 6 . B a r a c r o f t A , M y s k j a A . 2 0 0 3 . A l o e v e r a n a t u r e s s i l e n t h e a l e r . B A A M P u b . L t d . 2 8 - 4 5 . D a o d u T . 2 0 0 0 . A l o e v e r a , t h e m i r a c l e h e a l i n g p l a n t . H e a l t h f e i l d C o r p o r a t i o n , L a g o s , 3 6 . B o u d r e a u M D , B e l a n d F A . 2 0 0 6 . A n e v a l u a t i o n o f t h e b i o l o g i c a l a n d t o x i c o l o g i c a l p r o p e r t i e s o f A l o e b a r b a d e n s i s ( M i l l e r ) . J . E n v i r o n . S c i . H e a l t h 2 4 : 1 0 3 - 1 5 4 . C a p a s s o F , B o r r e l l i F , C a p a s s o R , D i C a r l o G , I z z o A A , P i n t o L , M a s c o l o N , C a s t a l d o S , L o n g o , R . 1 9 9 8 . A l o e a n d i t s t h e r a p e u t i c u s e . P h y t o t h e r . R e s . , 1 2 : S 1 2 4 . D u b e y R , P a n d e y A K . 2 0 0 9 . A n e w r e p o r t o n c o l l a r a n d r o o t r o t d i s e a s e o f A l o e v e r a c a u s e d b y S c l e r o t i u m r o l f s i i . J . M y c o l . P l . P a t h o l . , 3 9 : 3 0 0 - 3 0 1 . R a j e n d r a n A , N a r a y a n a n V , G n a n a v e l I . 2 0 0 7 . S e p r a t i o n a n d C h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e P h e n o l i c A n t h r a q u i n o n e s f r o m A l o e v e r a . J . A p p . S c i . R e s . , 3 : 1 4 0 7 - 1 4 1 5 . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 6 : 4 0 8 - 4 1 0 4 1 0 A v a s t h i e t a l . , 2 0 1 1 F i g . 1 . ( A ) : L e a f s h o w i n g i n i t i a t i o n o f a n t h r a c n o s e a n d c o a l e s c e s y m p t o m ( B ) T y p i c a l a n t h r a c n o s e s y m p t o m ( C ) A c e r v u l i o f C . g l o e o s p o r i o i d e s o n l e a f ( D ) S e v e n - d a y o l d C u l t u r e o f C . g l o e o s p o r i o i d e s ( E ) A c e r v u l i w i t h d a r k b r o w n s e t a e ( F ) C o n i d i a o f C . g l o e o s p o r i o i d e s .