J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y B i o r e s t r a i n i n g p o t e n t i a l s o f m a r i n e m a c r o a l g a e c o l l e c t e d f r o m R a m e s h w a r a m , T a m i l n a d u K e y w o r d s : L a r v i c i d a l b i o a s s a y , L C 5 0 , a n t i b i o s i s . A B S T R A C T : T h e m a r i n e e c o s y s t e m i s t h e t r e a s u r e p l a c e f o r m a n y n a t u r a l r e s o u r c e s . I n t h i s s t u d y , a b o u t f i v e d i f f e r e n t m a r i n e m a c r o a l g a e w e r e c h o s e n t o s t u d y t h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a n d l a r v i c i d a l a c t i v i t y o f A e d e s s p . A b o u t f i v e d i f f e r e n t s t r a n d e d s t r a i n s o f b a c t e r i a h a v e b e e n s e l e c t e d t o d e t e c t t h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f c o l l e c t e d a l g a e . A m o n g t h e f i v e a l g a e c o l l e c t e d , G r a c i l a r i a c r a s s a a n d H y p n e a v a l e n t i a h a v e s h o w n m a x i m u m a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y i n m e t h a n o l i c e x t r a c t i o n b y a n t i b i o s i s o f K i r b y - B a u e r s m e t h o d . T h e a c t i v e b i o c o m p o u n d f r o m m e t h a n o l w a s d e t e r m i n e d b y u s i n g d i f f e r e n t s o l v e n t s y s t e m s i n T L C . T h e p a r t i a l l y p u r i f i e d a n t i b a c t e r i a l c o m p o u n d w a s i d e n t i f i e d a s s a p o n i n s b y p h y t o c h e m i c a l t e s t s . L a r v i c i d a l b i o a s s a y w a s c a r r i e d o u t w i t h t h e t w o a l g a e G r a c i l a r i a c r a s s a a n d H y p n e a v a l e n t i a . T h e L C 5 0 d e t e r m i n e d b y t h e G r a c i l a r i a c r a s s a a n d H y p n e a v a l e n t i a w a s n o t e d a s 5 2 . 2 a n d 5 3 . 4 r e s p e c t i v e l y . 3 8 5 - 3 9 2 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 5 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : A n a n d h a n S a n d S o r n a k u m a r i H . I n s t i t u t i o n : S r i S a n k a r a A r t s & S c i e n c e C o l l e g e - E n a t h u r , T a m i l n a d u . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : S o r n a k u m a r i H E m a i l : s o r n a s k @ g m a i l . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 0 0 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 9 S e p 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 1 6 S e p 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 2 3 S e p 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : A n a n d h a n S a n d S o r n a k u m a r i H . B i o r e s t r a i n i n g p o t e n t i a l s o f m a r i n e m a c r o a l g a e o l l e c t e d f r o m R a m e s h w a r a m , T a m i l n a d u . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 8 5 - 3 9 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N M a n r e l i e d o n n a t u r a l p r o d u c t s i n g e n e r a l a n d p l a n t s i n p a r t i c u l a r t o p r o m o t e a n d m a i n t a i n g o o d h e a l t h a n d f i g h t s i c k n e s s , p a i n a n d d i s e a s e s i n c e i n t i m e i m m e m o r i a l . I n d i a i s a n i m p o r t a n t c o u n t r y i n w o r l d w h e r e a m b i e n t s y s t e m o f m e d i c i n e s u c h a s a y u r v e d a , s i d d h a a n d u n a n i h a s b e e n i n p r a c t i c e f o r m a n y y e a r s . I n c o m m o n a l l t h e a b o v e m e n t i o n e d s y s t e m o f m e d i c i n e a r e d i r e c t l y d e p e n d e n t u p o n r e s o u r c e s s u c h a s p l a n t s w i t h t h e a d v a n c e s i n e x p e r i m e n t a l m e t h o d s i n p h y t o c h e m i s t r y a n d p h a r m a c o l o g y , s e v e r a l m e d i c i n a l p l a n t s w e r e s c r e e n e d f o r a c t i v e p r i n c i p l e s a n d b i o l o g i c a l a c t i v i t e s ( P r a s h a n t K u m a r e t a l . , 2 0 0 6 ) . M a r i n e e n v i r o n m e n t i s a r i c h s o u r c e o f b i o l o g i c a l a n d c h e m i c a l d i v e r s i t y . T h e d i v e r s i t y h a s b e e n a u n i q u e s o u r c e o f c h e m i c a l c o m p o u n d s o f p o t e n t i a l f o r p h a r m a c e u t i c a l s , c o s m e t i c s , d i e t a r y s u p p l e m e n t s a n d a g r o c h e m i c a l s ( C h a u V a n M i n h e t a l . , 2 0 0 5 ) . I n r e c e n t y e a r s , a s i g n i f i c a n t n u m b e r o f n o v e l m e t a b o l i t e s w i t h p o t e n t p h a r m a c o l o g i c a l p r o p e r t i e s h a v e b e e n d i s c o v e r e d f r o m t h e m a r i n e o r g a n i s m s . ( N a r i s n h e t a l . , 2 0 0 5 ) . M a r i n e a l g a e w e r e a l s o r e p o r t e d t o h a v e s o m e a n t i o x i d a n t p r o p e r t i e s ( F a t e n e t a l . , 2 0 0 9 ) C o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e v a r i e t i e s o f m a r i n e m a c r o a l g a e a r e c o m m o n l y r e f e r r e d t o a s s e a w e e d s . S e a w e e d s h a v e s o m e o f v a l u a b l e m e d i c i n a l v a l u e c o m p o u n d s s u c h a s a n t i b i o t i c s , l a x a t i v e s , a n t i c o a g u l a n t s , a n t i u l c e r p r o d u c t s a n d s u s p e n d i n g a g e n t s i n r a d i o l o g i c a l p r e p a r a t i o n ( R a j a s u l o c h a n a e t a l . , 2 0 0 9 ) . F r e s h a n d d r y s e a w e e d s a r e e x t e n s i v e l y c o n s u m e d b y p e o p l e e s p e c i a l l y l i v i n g i n c o a s t a l a r e a s . S e a w e e d s a r e c l a s s i f i e d a s r h o d o p h y t a ( r e d a l g a e ) o r p h a e o p h y t a ( b r o w n a l g a e ) o r c h l o r o p h y t a ( g r e e n a l g a e ) d e p e n d i n g o n t h e i r n u t r i e n t a n d c h e m i c a l c o m p o s i t i o n ( C o x e t a l . , 2 0 1 0 ) . A s a c o n s e q u e n c e o f a n i n c r e a s i n g d e m a n d i n s c r e e n i n g f o r n e w t h e r a p e u t i c d r u g s f r o m n a t u r a l p r o d u c t s , t h e r e i s a g r e a t e r i n t e r e s t t o w a r d s m a r i n e o r g a n i s m s . S e v e r a l m a r i n e o r g a n i s m s p r o d u c e b i o a c t i v e m e t a b o l i t e s i n r e s p o n s e t o e c o l o g i c a l p r e s s u r e s u c h a s c o m p e t i t i o n f o r s p a c e m a i n t e n a n c e o f u n f o l d e d s u r f a c e d e t e r r e n c e o f p r e d a t i o n a n d t h e a b i l i t y t o s u c c e s s f u l l y r e p r o d u c e ( F a n g m i n g K o n g e t a l . , 1 9 9 4 ) . T h e a n t i b a c t e r i a l a g e n t f o u n d i n t h e a l g a e i n c l u d e t e r p e n o i d , p h l o r o t a n n i n s , a c r y l a c i d , p h e n o l i c c o m p o u n d s , s t e r o i d , h a l o g e n a t e d k e t o n e a n d a l k a l i n e , c y l i c p o l y s u l p h i d e s a n d f a t t y a c i d . I n a n u m b e r o f m a r i n e a l g a e a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t e s a r e a t t r i b u t e d t o t h e p r e s e n c e o f a c r y l a c i d ( J a m e s e t a l . , 1 9 7 5 ) . S e a w e e d s p r o v i d e a r i c h s o u r c e o f s t r u c t u r a l l y d i v e r s e s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s . T h e s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s o f f e r a d e f e n s e a g a i n s t h e r b i v o r e s , f o u l i n g o r g a n i s m a n d p a t h o g e n s . T h e y a l s o p l a y a r o l e i n r e p r o d u c t i o n , p r o t e c t i o n f r o m U V r a d i a t i o n a n d a s a l l e l o p a t h i c a g e n t . T h e r e i s a n u r g e n t n e e d t o s e a r c h f o r a l t e r n a t i v e s t o s y n t h e t i c a n t i b i o t i c s . T h e r e v a l u t i o n o f t h e d i s c o v e r y o f n e w g r o u p s a n t i m i c r o b i a l p e p t i d e s m a k e n a t u r a l a n t i b i o t i c s t h e b a s i c e l e m e n t s o f n o v e l g e n e r a t i o n d r u g s f o r t h e t r e a t m e n t o f b a c t e r i a l a n d f u n g a l i n f e c t i o n . M a r i n e a l g a e h a v e b e c o m e r e c o g n i z e d a s p o t e n t i a l s o u r c e o f a n t i b i o t i c s u b s t a n c e s ( Z h e n g Y i e t a l . , 2 0 0 1 ) . T h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f s i x m a r i n e a l g a e b e l o n g i n g R h o d o p h y c e a e a n d p h a e o p h y c e a e w e r e s t u d i e d a g a i n s t p a t h o g e n i c m i c r o b e s ( S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , E . c o l i , M i c r o c o c c u s , E n t e r o b a c t e r a e r o g e n s , E n t e r o c o c c u s f a e c a l i s w e r e s t u d i e d ( T a s k i n e t a l . , 2 0 0 7 ) . M o s q u i t o t r a n s m i t s s e r i o u s h u m a n d i s e a s e s l i k e M a l a r i a , F i l a r i a s i s , J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s , d e n g u e , h e m o r r h a g i c f e v e r a n d y e l l o w f e v e r c a u s i n g m i l l i o n s o f d e a t h e v e r y y e a r . E x t e n s i v e u s e o f c h e m i c a l i n s e c t i c i d e s f o r c o n t r o l o f v e c t o r b o r n e d i s e a s e s h a s c r e a t e d p r o b l e m s r e l a t e d t o p h y s i o l o g i c a l r e s i s t a n c e t o v e c t o r s , a d v e r s e e n v i r o n m e n t a l e f f e c t s , h i g h o p e r a t i o n a l c o s t a n d c o m m u n i t y a c c e p t a n c e , n u m e r o u s p l a n t p r o d u c t s h a v e b e e n r e p o r t e d e i t h e r a s i n s e c t i c i d e s f o r k i l l i n g l a r v a o r a d u l t m o s q u i t o e s o r a s r e p e l l e n t f o r m o s q u i t o b i t i n g a n d a r e o n e t h e b e s t a l t e r n a t i v e s f o r m o s q u i t o c o n t r o l ( R a j k u m a r e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e r e v o l u t i o n t h e r a p y o f i n f e c t i o n d i s e a s e b y t h e u s e o f a n t i b a c t e r i a l d r u g s h a s c e r t a i n l i m i t a t i o n d u e t o c h a n g i n g p a t t e r n o f r e s i s t a n c e i n p a t h o g e n s a n d s i d e e f f e c t s t h e y p r o d u c e d . T h e s e l i m i t a t i o n d e m a n d s f o r s e a r c h o f n e w a n t i m i c r o b i a l c o m p o u n d s f o r d e v e l o p m e n t o f d r u g s . S e a w e e d s a r e u s e d a l t e r n a t i v e a n d t r a d i t i o n a l r e m e d i e s i n m a n y p a r t s o f t h e w o r l d . T h e p r o d u c t i o n o n i n h i b i t o r s u b s t a n c e b y s e a w e e d s h a s a n t i b a c t e r i a l a c t i o n s a n d s o m e o f t h e i r s u b s t a n c e s h a v e p o t e n t i a l u s e i n m o s q u i t o c o n t r o l ( N a g i e t a l . , 2 0 1 0 ) . U s e o f s y n t h e t i c i n s e c t i c i d e s t o c o n t r o l v e c t o r m o s q u i t o e s h a s c a u s e d p h y s i o l o g i c a l r e s i s t a n c e a n d a d v e r s e e n v i r o n m e n t a l e f f e c t s i n a d d i t i o n t o h i g h o p e r a t i o n a l c o s t ( V i r e n d r a e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e t r e a t m e n t o f t h i s d i s e a s e b e c o m i n g m o r e d i f f i c u l t s i n c e P l a s m o d i u m f a l c i p a r u m p a r a s i t e h a s d e v e l o p e d r e s i s t a n c e t o w i d e r a n g e o f a n t i m a l a r i a l d r u g s ( A n n e P l a t t M c G i n n e t a l . , 2 0 0 2 ) . S e c o n d a r y m e t a b o l i t e s o f m a n y m a r i n e a l g a e s p e c i e s i s o l a t e d f r o m C a n a r i a I s l a n d w e r e s h o w n t o h a v e a w i d e a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y ( A n t o n i o G o n z a l e z e t a l . , 2 0 0 1 ) . T h u s t h e s c r e e n i n g o f m a r i n e o r g a n i s m f o r a 3 8 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 8 5 - 3 9 2 A n a n d h a n e t a l . , 2 0 1 1

v a r i e t y o f b i o l o g i c a l a c t i v i t i e s w i t h i n a i m i d e n t i f y i n g n o v e l w i t h i n t e r e s t i n g a n d p o t e n t i a l l y t h e r a p e u t i c a c t i v i t i e s c o n t i n u e s t i l l t h i s d a t e . ( S r e e n i v a s a n S a s i d h a r a n e t a l . , 2 0 1 0 ) . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S C o l l e c t i o n o f a l g a e s a m p l e s M a r i n e a l g a e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e c o a s t a l r e g i o n o f R a m e s h w a r a m . A l g a e w e r e w a s h e d w i t h s e a w a t e r t o r e m o v e e x t r a n e o u s m a t e r i a l s a n d b r o u g h t t o t h e l a b o r a t o r y i n p l a s t i c b a g c o n t a i n i n g s e a w a t e r t o p r e v e n t e v a p o r a t i o n . S a m p l e p r e p a r a t i o n A f t e r c o l l e c t i o n o f s a m p l e , i t w a s b r o u g h t t o t h e l a b o r a t o r y . A l g a l s a m p l e s w e r e w a s h e d i n r u n n i n g t a p w a t e r t o r e m o v e a n y a s s o c i a t e d d e b r i s a n d t h e n w i t h t h e d i s t i l l e d w a t e r . A f t e r w a s h i n g , t h e s a m p l e s w e r e d r i e d i n a b l o t t i n g p a p e r f o r t w o w e e k s . A f t e r d r y i n g , t h e s a m p l e s w a s g r i n d e d i n t o p o w d e r f o r m , w h i c h w a s t h e n s t o r e d i n 4 º C f o r f u r t h e r s t u d i e s . ( R a j a s u l o c h a n a e t a l . , 2 0 0 9 ) . P r e p a r a t i o n o f d i f f e r e n t s o l v e n t e x t r a c t s O n e g r a m o f e a c h a l g a l s a m p l e w a s e x t r a c t e d w i t h d i f f e r e n t s o l v e n t s s y s t e m s 1 0 m l o f m e t h a n o l , H e x a n e , a n d e t h y l a c e t a t e i n a b e a k e r f o r 2 4 h o u r s a t r o o m t e m p e r a t u r e . T h e n t h e s o l v e n t p o r t i o n w a s c e n t r i f u g e a t 5 0 0 0 r p m f o r 1 0 m i n u t e s . T h e s u p e r n a t a n t w a s c o l l e c t e d f r o m t h e c e n t r i f u g e t u b e a n d t h e s o l v e n t w e r e e v a p o r a t e d . F i n a l l y c r u d e e x t r a c t w a s o b t a i n e d . T h e e x t r a c t s w e r e c o l l e c t e d i n p l a s t i c v i a l s a n d s t o r e d i n t h e r e f r i g e r a t o r f o r f u r t h e r s t u d i e s . ( A s e e r e t a l . , 2 0 0 9 ) D i s c p r e p a r a t i o n T h e s o l v e n t e x t r a c t s w e r e u s e d f o r d i s c d i f f u s i o n a s s a y t o t e s t f o r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y . T h e d i s c s w e r e p r e p a r e d b y u s i n g W h a t m a n f i l t e r p a p e r a p p r o x i m a t e l y 5 m m i n d i a m e t e r a n d t h e n i t w a s s o a k e d i n e x t r a c t s a n d t h e n d r i e d . T h e n t h e d i s c s w e r e s t o r e d a n d u s e d f o r f u r t h e r w o r k s . A n t i b a c t e r i a l a s s a y T h e s t r a n d e d s t r a i n s o f B a c i l l u s s u b t i l i s , S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e , P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a a n d E . c o l i c u l t u r e s w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e D e p a r t m e n t o f M i c r o b i o l o g y , S r i S a n k a r a A r t s a n d S c i e n c e C o l l e g e , E n a t h u r , K a n c h i p u r a m . T h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f a l g a e e x t r a c t s w e r e s t u d i e d b y d i s c d i f f u s i o n m e t h o d s b y u s i n g M u l l e r H i n t o n A g a r ( M H A ) . 1 8 h o u r s o l d b r o t h c u l t u r e w a s p r e p a r e d a n d i n o c u l a t e d o n M u l l e r H i n t o n a g a r p l a t e s b y u s i n g s t e r i l e c o t t o n s w a b . A f t e r t h e s w a b b i n g , 2 0 μ l o f c r u d e e x t r a c t d i s c w e r e a d d e d i n t o s t e r i l e f i l t e r p a p e r d i s c a p p r o x i m a t e l y 5 m m i n d i a m e t e r a n d a l l o w e d a t r o o m t e m p e r a t u r e f o r f e w m i n u t e s . A f t e r t h a t t h e d i s c w e r e p l a c e d o n t h e M u l l e r H i n t o n a g a r p l a t e s b y u s i n g s t e r i l e f o r c e p s . A l l t h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d a t 3 7 º C f o r 2 4 h o u r s . A f t e r i n c u b a t i o n o f 2 4 h o u r s a t 3 7 ° C a c l e a n z o n e a r o u n d t h e d i s c w a s e v i d e n c e o f a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y ( R a j a s u l o c h a n a e t a l . , 2 0 0 9 ) P a r t i a l p u r i f i c a t i o n o f s e l e c t e d a l g a e e x t r a c t B a s e d o n t h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f p o t e n t i a l a l g a e e x t r a c t s f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n s l i k e p a r t i a l p u r i f i c a t i o n b y t h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y w e r e d o n e . P a r t i a l p u r i f i c a t i o n o f c r u d e e x t r a c t b y t h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y ( T L C ) A n a l y t i c a l T L C T h e c r u d e e x t r a c t w a s p u r i f i e d b y u s i n g t h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y . F o r d e t e r m i n i n g t h e b e s t s o l v e n t s y s t e m f o r g o o d s e p a r a t i o n o f c r u d e c o m p o u n d , s o l v e n t s s u c h a s m e t h a n o l , c h l o r o f o r m , n - h e x a n e , d i e t h y l e t h e r , n - b u t a n o l , e t h y l a c e t a t e a n d a c e t i c a c i d w e r e u s e d i n t h e f o l l o w i n g r a t i o . B u t a n o l : A c e t i c a c i d : w a t e r [ 3 0 : 4 5 : 2 5 , 4 5 : 3 0 : 2 5 , 5 0 : 3 5 : 1 5 ] , h e x a n e : e t h y l a c e t a t e [ 9 0 : 1 0 , 8 0 : 2 0 , 7 0 : 3 0 , 6 0 : 4 0 , 5 0 : 5 0 ] , h e x a n e : d i e t h y l e t h e r : a c e t i c a c i d [ 8 0 : 1 0 : 1 0 , 7 0 : 2 0 : 1 0 , 6 0 : 3 0 : 1 0 ] , h e x a n e : m e t h a n o l [ 7 0 : 3 0 , 6 0 : 4 0 , 5 0 : 5 0 ] , m e t h a n o l : e t h y l a c e t a t e : h e x a n e [ 7 0 : 2 0 : 1 0 , 6 0 : 3 0 : 1 0 , 7 5 : 2 0 : 5 ] . T h e c r u d e e x t r a c t w a s d i s s o l v e d i n 2 0 0 μ l o f m e t h a n o l . W i t h t h e h e l p o f c a p i l l a r y t u b e t h e s a m p l e w a s s p o t t e d o n t h e s i l i c a g e l c o a t e d s l i d e a n d p l a c e d i n t h e d e v e l o p i n g c h a m b e r w h i c h c o n t a i n s o l v e n t m o b i l e p h a s e , c o v e r e d w i t h t h e w a t c h g l a s s i n o r d e r t o p r e v e n t t h e e v a p o r a t i o n o f s o l v e n t s . T h e s o l v e n t w a s a l l o w e d t o r u n t i l l i t r e a c h e s a b o u t h a l f a c m b e l o w t h e t o p o f t h e p l a t e . A f t e r r u n n i n g t h e s l i d e w a s k e p t i n r o o m t e m p e r a t u r e f o r t h e c o m p l e t e d r y i n g o f t h e p l a t e . T h e n t h e s l i d e w a s k e p t c l o s e d i n i o d i n e c h a m b e r t o v i s u a l i z e t h e s e p a r a t e d c o m p o u n d a s c l e a r s p o t s ( J e b a k u m a r S o l o m o n e t a l . , 2 0 0 8 ) . T h e R F v a l u e w e r e d e t e r m i n e b y R F = M o v e m e n t o f t h e s o l u t e f r o m t h e o r i g i n / m o v e m e n t o f s o l v e n t f r o m t h e o r i g i n . P r e p a r a t i v e T L C P r e p a r a t i v e T L C w a s p e r f o r m e d t o g e t p a r t i a l l y p u r i f i e d c o m p o u n d . T L C p l a t e w a s p r e p a r e d b y s p r e a d i n g t h e s l u r r y o f s i l i c a g e l e v e n l y o n t h e p l a t e . T h e p l a t e w a s a c t i v a t e d a t 1 0 0 º C f o r 1 5 m i n u t e s . C r u d e e x t r a c t w a s a p p l i e d o n t h e p l a t e a s a s i n g l e l i n e a n d t h e c h r o m a t o g r a m w a s p e r f o r m e d w i t h t h e s o l v e n t s y s t e m H e x a n e : J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 8 5 - 3 9 2 3 8 7 A n a n d h a n e t a l . , 2 0 1 1