J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y S t u d i e s o n p h y t o c h e m i c a l s , a n t i b a c t e r i a l a n d A n t i o x i d a n t e f f e c t s o f l e a f e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m K e y w o r d s : L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m , p h y t o c h e m i c a l s , A n t i b a c t e r i a l , A n t i o x i d a n t A B S T R A C T : I n t h i s i n v e s t i g a t i o n , L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w a s a n a l y s e d f o r i t s p h y t o c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s q u a l i t a t i v e l y a n d q u a n t i t a t i v e l y . T h e a n t i b a c t e r i a l p r o p e r t y o f a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w a s s t u d i e d a g a i n s t d i f f e r e n t b a c t e r i a i n c l u d e E s c h e r i c h i a c o l i , P r o t e u s m i r a b i l i s , S a l m o n e l l a t y p h i , E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s , a n d S h i g e l l a f l e x i n e r i a n d s h o w e d g r o w t h i n h i b i t i o n a c t i v i t y a t c o n c e n t r a t i o n s i n t h e r a n g e o f 3 0 0 m g t o 5 0 0 m g . T h e a n t i o x i d a n t e f f e c t o f t h o s e e x t r a c t s w a s a l s o s t u d i e d a g a i n s t α - t o c o p h e r o l a s a c o n t r o l . F r o m t h e r e s u l t s , A l k a l o i d s , f l a v o n o i d s , s a p o n i n s , a n d t a n n i n s w e r e r e v e a l e d t o b e p r e s e n t i n L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m . E t h a n o l e x t r a c t a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f 5 0 0 μ g / m l s h o w e d 6 1 . 1 6 % a n t i o x i d a n t a c t i v i t y a g a i n s t 5 0 0 μ g / m l o f α - t o c o p h e r o l w h i c h s h o w e d 7 6 . 8 6 % a s a s t a n d a r d r e f e r e n c e . 2 7 9 - 2 8 4 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 4 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : * M o h a n a S u n d a r a m , S i v a k u m a r , K a r t h i k e y a n , M a g e s h , G o p i n a t h , S h e e l a d e v i , T h i r u m a l a i , P e n n a r a s i a n d P r a s a n n a . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f B i o t e c h n o l o g y , K a r p a g a V i n a y a g a C o l l e g e o f E n g i n e e r i n g a n d T e c h n o l o g y , M a d u r a n t h a g a m , T a m i l N a d u - 6 0 3 3 0 8 . * L e c t u r e r , D e p a r t m e n t o f B i o t e c h n o l o g y , K a r p a g a V i n a y a g a C o l l e g e o f E n g i n e e r i n g a n d T e c h n o l o g y , M a d u r a n t h a g a m , K a n c h i p u r a m D i s t r i c t , T a m i l N a d u - 6 0 3 3 0 8 , I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : M o h a n a S u n d a r a m E m a i l : s b m o h a n 2 0 0 7 @ g m a i l . c o m P h o n e N o : 0 4 4 - 2 7 5 6 5 4 8 6 W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 7 0 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 3 0 J u l 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 1 1 J u l 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : A r t i c l e C i t a t i o n : M o h a n a S u n d a r a m , S i v a k u m a r , K a r t h i k e y a n , M a g e s h , G o p i n a t h , S h e e l a d e v i , T h i r u m a l a i , P e n n a r a s i a n d P r a s a n n a . S t u d i e s o n p h y t o c h e m i c a l s , a n t i b a c t e r i a l a n d A n t i o x i d a n t e f f e c t s o f l e a f e x t r a c t s o f l a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m . . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h p a p e r

I N T R O D U C T I O N P l a n t s a r e e f f e c t i v e i n t h e t r e a t m e n t o f i n f e c t i o u s d i s e a s e s a n d m a n y p l a n t e x t r a c t s h a v e b e e n s h o w n t o p o s s e s s a n t i m i c r o b i a l p r o p e r t i e s i n v i t r o ( S o f o w o r a , 1 9 8 3 ) . T h e i n c r e a s e d p r e v a l e n c e o f a n t i b i o t i c - r e s i s t a n t b a c t e r i a d u e t o t h e e x t e n s i v e u s e o f a n t i b i o t i c s m a y r e n d e r t h e c u r r e n t a n t i m i c r o b i a l a g e n t s i n e f f i c i e n t t o c o n t r o l s o m e b a c t e r i a l d i s e a s e s ( T a n a k a e t a l . , 2 0 0 6 ) . H e r b a l m e d i c i n e i s f r e q u e n t l y a p a r t o f a l a r g e r t h e r a p e u t i c s y s t e m s u c h a s t r a d i t i o n a l a n d f o l k m e d i c i n e . I t i s n e c e s s a r y t o e v a l u a t e , i n a s c i e n t i f i c b a s e , t h e p o t e n t i a l u s e o f f o l k m e d i c i n e f o r t h e t r e a t m e n t o f i n f e c t i o u s d i s e a s e s p r o d u c e d b y c o m m o n p a t h o g e n s . M e d i c i n a l p l a n t s m i g h t r e p r e s e n t a n a l t e r n a t i v e t r e a t m e n t i n n o n - s e v e r e c a s e s o f i n f e c t i o u s d i s e a s e s . T h e y c a n a l s o b e a p o s s i b l e s o u r c e f o r n e w p o t e n t a n t i b i o t i c s t o w h i c h p a t h o g e n s t r a i n s a r e n o t r e s i s t a n t . T h e s e a r c h a n d u s e o f d r u g s a n d d i e t a r y s u p p l e m e n t s d e r i v e d f r o m p l a n t s h a v e b e e n a c c e l e r a t e d i n r e c e n t y e a r s . E t h n o p h a r m a c o l o g i s t , b o t a n i s t , m i c r o b i o l o g i s t a n d n a t u r a l p r o d u c t c h e m i s t a r e c o m b i n g t h e m e d i c i n a l f l o r a f o r b i o l o g i c a l s u b s t a n c e s t h a t c o u l d b e d e v e l o p e d f o r t h e t r e a t m e n t o f i n f e c t i o u s d i s e a s e s . L a m p r a c h a e n i u m i s a g e n u s o f f l o w e r i n g p l a n t s i n t h e A s t e r a c e a e f a m i l y a n d f o u n d i n m o s t o f t h e p a r t s o f s o u t h I n d i a . S o m e r u r a l p e o p l e o f s o u t h I n d i a , i n c l u d i n g t r i b a l s u s i n g t h i s p l a n t l e a f a s a n t i s e p t i c a g e n t ( G u r u d e v a M R a n d Y o g a n a r a s i m h a n S N , 2 0 0 9 ) . T h e a i m o f t h e p r e s e n t i n v e s t i g a t i o n i s t o a n a l y z e L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m q u a l i t a t i v e l y t o s t u d y t h e p h y t o c h e m i c a l s a n d a n t i b a c t e r i a l e f f e c t o f a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m a g a i n s t e n t e r i c p a t h o g e n s w i t h t h e a s s e s s m e n t o f i t s a n t i o x i d a n t p o t e n c y . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S P r e p a r a t i o n o f P l a n t E x t r a c t T h e l e a f s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m u s e d i n t h i s s t u d y w e r e c o l l e c t e d f r o m T h i r u k k a l u k u n d r a m v i l l a g e , K a n c h i p u r a m D i s t r i c t , T a m i l N a d u , a n d S o u t h I n d i a i n t h e m o n t h o f J u n e , 2 0 1 0 . T h e p l a n t w a s i d e n t i f i e d b y t h e e x p e r t s o f C e n t r e f o r A d v a n c e d S t u d i e s i n B o t a n y , U n i v e r s i t y o f M a d r a s , G u i n d y c a m p u s , C h e n n a i a n d a v o u c h e r s p e c i m e n ( N o . S A N - 2 4 0 3 / 1 0 ) w a s d e p o s i t e d i n o u r d e p a r t m e n t a l l a b o r a t o r y . T h e c o l l e c t e d p l a n t s a m p l e w a s r e f l u x e d i n r u n n i n g t a p e w a t e r f o r 1 - 2 h a n d s h a d e d r i e d a t r o o m t e m p e r a t u r e f o r 1 5 2 0 d a y s . A q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w a s p r e p a r e d u s i n g s o x h l e t a p p a r a t u s ( H o f f m a n e t a l . , 2 0 0 4 ) f o r a b o u t 2 4 h . T h e e x t r a c t w a s d i s t i l l e d a n d c o n c e n t r a t e d i n v a c u o w i t h a d d i t i o n o f C a C l 2 . L y o p h i l i z e d a q u e o u s f r a c t i o n s w e r e f u r t h e r u s e d t o t e s t f o r t h e a n t i f u n g a l , a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i o x i d a n t p r o p e r t i e s . C h e m i c a l s a n d m i c r o o r g a n i s m s : E s c h e r i c h i a c o l i , P r o t e u s m i r a b i l i s , S a l m o n e l l a t y p h i , E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s a n d S h i g e l l a f l e x i n e r i w e r e p u r c h a s e d f r o m I M T E C H , C h a n d i g a r , I n d i a . S o l v e n t a n d o t h e r c h e m i c a l s w h i c h w e r e u s e d d u r i n g t h i s s t u d y w e r e f r o m H i m e d i a , M e r c k a n d s . d . F i n e - C h e m i c a l s , M u m b a i . M E T H O D S P h y t o c h e m i c a l s c r e e n i n g p r o c e d u r e s c a r r i e d o u t w e r e a d o p t e d f r o m ( O l o y e d , 2 0 0 5 ) . T h i s a n a l y s i s d e t e r m i n e s t h e b i o l o g i c a l l y a c t i v e c o m p o u n d s t h a t c o n t r i b u t e t o t h e f l a v o u r , c o l o u r a n d o t h e r c h a r a c t e r i s t i c s o f l e a v e s . T e s t f o r a l k a l o i d s : A b o u t 2 g o f t h e g r o u n d s a m p l e w e r e p o u n d e d s e p a r a t e l y o n a m o r t a r . 0 . 2 g w a s b o i l e d w i t h 5 m l o f 2 % h y d r o c h l o r i c a c i d o n a s t e a m b a t h f o r 5 m i n . T h e m i x t u r e w a s a l l o w e d t o c o o l a n d f i l t e r e d a n d t h e f i l t r a t e w a s s h a r e d i n e q u a l p r o p o r t i o n i n t o 3 t e s t t u b e s a n d l a b e l e d A , B , C . O n e ( 1 ) m l p o r t i o n o f t h e f i l t r a t e w a s t r e a t e d w i t h 2 d r o p s o f t h e f o l l o w i n g r e a g e n t s r e s p e c t i v e l y . W i t h D r a g e n d r o f f s r e a g e n t a r e d p r e c i p i t a t e w a s s h o w n . W i t h M a y e r ' s r e a g e n t a c r e a m y w h i t e c o l o u r e d p r e c i p i t a t e i n d i c a t e d t h e p r e s e n c e o f a l k a l o i d ( H a r b o r n e , 1 9 7 3 ; T r e a s e a n d E v a n s , 1 9 8 9 ) . T e s t f o r f l a v o n o i d s : 0 . 5 g o f t h e m a c e r a t e d s a m p l e o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w a s i n t r o d u c e d i n t o 1 0 m l o f e t h y l a c e t a t e a n d h e a t e d i n b o i l i n g w a t e r f o r 1 m i n . T h e m i x t u r e w a s t h e n f i l t e r e d a n d t h e f i l t r a t e u s e d f o r t h e f o l l o w i n g t e s t . 4 m l o f t h e f i l t r a t e w a s s h a k e n w i t h 1 m l o f 1 % a l u m i n u m c h l o r i d e s o l u t i o n a n d k e p t . F o r m a t i o n o f a y e l l o w c o l o u r i n t h e p r e s e n c e o f 1 m l d i l u t e A m m o n i a s o l u t i o n i n d i c a t e d t h e p r e s e n c e o f f l a v o n o i d s ( H a r b o r n e , 1 9 7 3 ) . T e s t f o r s a p o n i n s : 0 . 1 g o f t h e s a m p l e w a s b o i l e d w i t h 5 m l o f d i s t i l l e d w a t e r f o r 5 m i n . M i x t u r e w a s f i l t e r e d w h i l e s t i l l h o t a n d t h e f i l t r a t e w a s t h e n u s e d f o r t h e f o l l o w i n g t e s t s ( T r e a s e a n d E v a n s , 1 9 8 9 ) . T o 1 m l o f t h e f i l t r a t e s , 2 d r o p s o f o l i v e o i l w a s a d d e d , t h e m i x t u r e w a s s h a k e n a n d o b s e r v e d f o r t h e f o r m a t i o n o f e m u l s i o n . 1 m l o f t h e f i l t r a t e w a s d i l u t e d w i t h 4 m l o f d i s t i l l e d w a t e r . T h e m i x t u r e w a s v i g o r o u s l y s h a k e n a n d t h e n o b s e r v e d o n a s t a n d f o r s t a b l e f r o t h ( T r e a s e a n d E v a n s , 1 9 8 9 ) . T e s t f o r t a n n i n s : I n t o 2 g o f t h e g r o u n d s a m p l e , 5 2 8 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1

m l o f 4 5 % e t h a n o l w a s a d d e d a n d b o i l e d f o r 5 m i n . T h e m i x t u r e w a s c o o l e d a n d f i l t e r e d . 1 m l o f t h e f i l t r a t e w a s a d d e d 3 d r o p s o f l e a d s u b a c e t a t e s o l u t i o n . A g e l a t i n o u s p r e c i p i t a t e s w e r e o b s e r v e d w h i c h i n d i c a t e s t h e p r e s e n c e o f T a n n i n s . A n o t h e r 1 m l o f t h e f i l t r a t e w a s a d d e d 0 . 5 m l o f b r o m i n e w a t e r . A p a l e b r o w n p r e c i p i t a t e s w e r e o b s e r v e d i n d i c a t i n g t h e p r e s e n c e o f T a n n i n s ( T r e a s e a n d E v a n s , 1 9 8 9 ) . T e s t f o r g l y c o s i d e s : 2 g o f t h e s a m p l e w a s m i x e d w i t h 3 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r a n d i t w a s h e a t e d f o r 5 m i n o n a w a t e r b a t h , f i l t e r e d a n d u s e d a s f o l l o w s : f i v e m l o f t h e f i l t r a t e w a s a d d e d t o 0 . 2 m l o f f e h l i n g s o l u t i o n A a n d f e h l i n g s o l u t i o n B u n t i l i t t u r n s a l k a l i n e a n d h e a t e d i n a w a t e r b a t h f o r 2 m i n . A l i g h t i s h b l u e c o l o u r a t i o n w a s o b s e r v e d ( i n s t e a d o f b r i c k r e d p r e c i p i t a t e ) w h i c h i n d i c a t e s t h e a b s e n c e o f g l y c o s i d e s ( O l o y e d , 2 0 0 5 ) . Q u a n t i t a t i v e A n a l y s i s o f P h y t o c h e m i c a l C o n s t i t u e n t s E s t i m a t i o n o f a l k a l o i d s : 0 . 5 g o f t h e s a m p l e w a s d i s s o l v e d i n 9 6 % e t h a n o l - 2 0 % H 2 S O 4 ( 1 : 1 ) m i x t u r e . 1 m l o f t h e f i l t r a t e w a s a d d e d t o 5 m l o f 6 0 % t e t r a o x o s u l p h a t e ( V I ) , a n d a l l o w e d t o s t a n d f o r 5 m i n . T h e n , 5 m l o f 0 . 5 % f o r m a l d e h y d e w a s a d d e d a n d a l l o w e d t o s t a n d f o r 3 h . T h e a b s o r b a n c e w a s m e a s u r e d a t 5 6 5 n m ( H a r b o r n e , 1 9 7 6 ) . E s t i m a t i o n o f f l a v o n o i d s : F l a v o n o i d i n t h e t e s t s a m p l e w a s d e t e r m i n e d b y t h e a c i d h y d r o l y s i s o f s p e c t r o p h o t o m e t r i c m e t h o d . 0 . 5 g o f p r o c e s s e d p l a n t s a m p l e w a s m i x e d w i t h 5 m l o f d i l u t e H C l a n d b o i l e d f o r 3 0 m i n . T h e b o i l e d e x t r a c t w a s a l l o w e d t o c o o l a n d f i l t e r e d . 1 m l o f t h e f i l t r a t e w a s a d d e d t o 5 m l o f e t h y l a c e t a t e a n d 5 m l o f 1 % N H 3 . T h i s w a s t h e n s c a n n e d 3 f r o m 4 2 0 n m - 5 2 0 n m f o r t h e a b s o r b a n c e . ( H a r b o r n e , 1 9 7 6 ) . E s t i m a t i o n o f s a p o n i n s : 0 . 5 g o f t h e s a m p l e w a s a d d e d t o 2 0 m l o f 1 N H C l a n d w a s b o i l e d f o r 4 h . A f t e r c o o l i n g i t w a s f i l t e r e d a n d 5 0 m l o f p e t r o l e u m e t h e r w a s a d d e d t o t h e f i l t r a t e f o r e t h e r l a y e r a n d e v a p o r a t e d t o d r y n e s s . 5 m l o f a c e t o n e e t h a n o l w a s a d d e d t o t h e r e s i d u e . 0 . 4 m l o f e a c h w a s t a k e n i n t o 3 d i f f e r e n t t e s t t u b e s . 6 m l o f F e r r o u s s u l p h a t e r e a g e n t w a s a d d e d i n t o t h e m f o l l o w e d b y 2 m l o f c o n c e n t r a t e d H 2 S O 4 . I t w a s t h o r o u g h l y m i x e d a f t e r 1 0 m i n a n d t h e a b s o r b a n c e w a s t a k e n a t 4 9 0 n m ( O l o y e d , 2 0 0 5 ) . E s t i m a t i o n o f t a n n i n s : 5 g o f t h e g r o u n d s a m p l e w a s s h a k e n c o n s t a n t l y f o r 1 m i n w i t h 3 m l o f m e t h a n o l i n a t e s t t u b e a n d t h e n p o u r e d i n t o a B u c h n e r f u n n e l w i t h t h e s u c t i o n a l r e a d y t u r n e d o n . T h e t u b e w a s q u i c k l y r i n s e d w i t h a n a d d i t i o n a l 3 m l o f m e t h a n o l a n d t h e c o n t e n t p o u r e d a t o n c e i n t o t h e f u n n e l . T h e f i l t r a t e w a s m i x e d w i t h 5 0 m l o f w a t e r a n d a n a l y z e d w i t h i n a n h o u r . F o r a q u e o u s e x t r a c t i o n s , 5 m l o f w a t e r w a s u s e d f o r t h e e x t r a c t i o n a n d f o r t h e r i n s e a n d t h e f i l t r a t e w a s a d d e d t o 5 0 m l o f w a t e r . 3 m l o f 0 . 1 m l F e C l 3 i n 0 . 1 N H 4 C l w a s a d d e d t o 5 m l o f t h e e x t r a c t a n d f o l l o w e d i m m e d i a t e l y b y t i m e d a d d i t i o n o f 3 m l o f 0 . 0 0 8 m l K 2 F e ( C N ) 6 . T h e a b s o r b a n c e w a s t a k e n a t 7 2 0 n m s p e c t r o p h o t o m e t r i c a l l y ( O n w u k a , 2 0 0 5 ) . A n t i b a c t e r i a l e f f e c t : T h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w a s e v a l u a t e d b y a g a r w e l l d i f f u s i o n m e t h o d ( C h u n g e t a l . , 1 9 9 0 ) . M u l l e r H i n t o n a g a r m e d i u m w a s p r e p a r e d a n d p o u r e d i n t o t h e p e t r i d i s h e s . T h e n i t w a s i n o c u l a t e d w i t h a s w a b o f b a c t e r i a l c u l t u r e ( m i d l o g p h a s e ) a n d s p r e a d t h r o u g h o u t t h e m e d i u m u n i f o r m l y w i t h a s t e r i l e c o t t o n s w a b . U s i n g a s t e r i l e c o r k b o r e r ( 1 0 m m d i a m e t e r ) w e l l s w e r e m a d e i n t h e a g a r m e d i u m . T h e t e s t c o m p o u n d w a s i n t r o d u c e d i n t o t h e w e l l s a n d a l l t h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d a t 3 7 º C f o r 2 4 h . T h e e x p e r i m e n t w a s p e r f o r m e d f i v e t i m e s u n d e r s t r i c t a s e p t i c c o n d i t i o n s . S e n s i t i v i t y o f t h e o r g a n i s m w a s d e t e r m i n e d b y m e a s u r i n g t h e d i a m e t e r o f t h e z o n e o f i n h i b i t i o n . E a c h a s s a y w a s r e p e a t e d f o r f i v e t i m e s a n d t h e m e a n v a l u e w a s t a k e n f o r a n a l y s e s . T h e c o n t r o l e x p e r i m e n t w a s c a r r i e d o u t w i t h t h e a n t i b i o t i c s s u c h a s s t r e p t o m y c i n a n d c h l o r a m p h e n i c a l ( S . S h o b a n a e t a l , 2 0 0 9 ) . A n t i o x i d a n t e f f e c t : T h e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w e r e d e t e r m i n e d b y f e r r i c t h i o c y n a t e m e t h o d ( M i s t u d a e t a l . , 1 9 9 6 ) . 1 0 m g o f e a c h e x t r a c t w a s d i s s o l v e d s e p a r a t e l y i n 9 9 . 5 % o f e t h a n o l a n d v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s ( 1 0 0 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 & 5 0 0 μ g / m l ) w e r e p r e p a r e d . A m i x t u r e o f a 2 m l o f s a m p l e i n 9 9 . 5 % e t h a n o l , 2 . 0 5 2 m l o f 2 . 5 1 % l i n o l e i c a c i d i n 9 9 . 5 % e t h a n o l , 4 m l o f 0 . 0 5 M p h o s p h a t e b u f f e r ( p H 7 . 0 ) a n d 1 . 9 4 8 m l o f w a t e r w a s p l a c e d i n a v i a l w i t h a s c r e w c a p a n d p l a c e d i n a n o v e n a t 6 0 o C i n t h e d a r k . T o 0 . 1 m l o f t h i s s a m p l e s o l u t i o n 9 . 7 m l o f 7 5 % e t h a n o l a n d 0 . 1 m l o f 3 0 % a m m o n i u m t h i o c y n a t e w a s a d d e d . A f t e r t h e a d d i t i o n o f 0 . 1 m l o f 2 x 1 0 - 2 M f e r r o u s c h l o r i d e i n 3 . 5 % h y d r o c h l o r i c a c i d t o t h e r e a c t i o n m i x t u r e , t h e a b s o r b a n c e o f t h e r e d c o l o r d e v e l o p e d w a s m e a s u r e d i n 3 m i n a t 5 0 0 n m ( M a t o o k a n d H a s h i n a g a , 2 0 0 5 ) . T h e c o n t r o l a n d s t a n d a r d w e r e s u b j e c t e d t o t h e s a m e p r o c e d u r e s a s t h e s a m p l e , e x c e p t t h a t f o r t h e c o n t r o l , o n l y s o l v e n t w a s a d d e d , J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 2 8 1 M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1

a n d f o r t h e s t a n d a r d , s a m p l e w a s r e p l a c e d w i t h t h e s a m e a m o u n t o f α - t o c o p h e r o l ( r e f e r e n c e c o m p o u n d ) ( A l i Y i l d i r i m e t a l . , 2 0 0 1 ) . T h e i n h i b i t i o n o f l i p i d p e r o x i d a t i o n i n p e r c e n t a g e ( T a b l e 3 . 0 ) w a s c a l c u l a t e d b y f o l l o w i n g e q u a t i o n : % I n h i b i t i o n = 1 - ( A 1 / A 2 ) x 1 0 0 W h e r e , A 1 - a b s o r b a n c e o f t h e t e s t s a m p l e A 2 - a b s o r b a n c e c o n t r o l r e a c t i o n R E S U L T S & D I S C U S S I O N P h y t o c h e m i c a l a n a l y s i s i s v e r y u s e f u l i n t h e e v a l u a t i o n o f s o m e a c t i v e b i o l o g i c a l c o m p o n e n t s o f m e d i c i n a l p l a n t s . T h e q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e a n a l y s e s w e r e c a r r i e d o u t i n b o t h d r y a n d w e t s a m p l e s . A l k a l o i d s , f l a v o n o i d s , s a p o n i n s , t a n n i n s , w e r e r e v e a l e d t o b e p r e s e n t i n L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m ( T a b l e 1 . 1 ) . T h i s s h o w s h i g h l e v e l o f i t s p o s s i b l e m e d i c i n a l a n d d i e t a r y v a l u e s ( O l o y e d , 2 0 0 5 ) . A l t h o u g h , s o m e o f t h e s e a n a l y z e d c o n s t i t u e n t s o f t h e v e g e t a b l e s p e c i e s m a y b e c o m p l e t e l y h a r m f u l t o b o t h m a n a n d f a r m a n i m a l s a n d s o m e a r e s p e c i e s s p e c i f i c a s o b s e r v e d i n t h e c a s e o f t a n n i n s ( O d e b i y i a n d S o f o w o r a , 1 9 7 9 ) . S o m e o f t h e s e a c t i v e c o m p o n e n t s h a v e b e e n d e m o n s t r a t e d t o p o s s e s s a n t i n u t r i t i o n a l e f f e c t s , f o l l o w i n g t h e i r a b i l i t y t o r e d u c e p a l a t a b i l i t y a n d d i g e s t i b i l i t y o f f e e d s t u f f ( O d e b i y i a n d S o f o w o r a , 1 9 7 9 ) . I n T a b l e 1 . 2 , t h e l e v e l s o f t h e s e p h y t o c h e m i c a l s ( b i o a c t i v e c o m p o u n d s ) w e r e s h o w n . G e n e r a l l y , t h e d r y s a m p l e s h o w e d h i g h e r l e v e l s o f t h e s e b i o a c t i v e c o m p o u n d s t h a n t h e w e t s a m p l e . T h e r e a s o n m a y b e t h a t t h e b i o a c t i v e c o m p o u n d s a r e n o t v o l a t i l e c o m p o u n d s a n d h e n c e h a v e a h i g h d r i e d w e i g h t . H i g h l e v e l s o f f l a v o n o i d s ( 6 9 . 3 3 ± 4 . 1 4 a n d 5 6 . 1 8 ± 3 . 1 9 ) i n T a b l e 1 . 2 s h o w e d t h a t t h e v e g e t a b l e i s g o o d f o r t h e m a n a g e m e n t o f c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e s a n d o x i d a t i v e s t r e s s , s i n c e f l a v o n o i d s a r e b i o l o g i c a n t i o x i d a n t s . A n t i o x i d a n t s a r e c o m p o u n d s t h a t p r o t e c t c e l l s a g a i n s t t h e d a m a g i n g e f f e c t s o f r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s , s u c h a s s i n g l e t o x y g e n , s u p e r o x i d e , p e r o x y l r a d i c a l s , h y d r o x y l r a d i c a l s a n d p e r o x y n i t r i l e . A n i m b a l a n c e b e t w e e n a n t i o x i d a n t s a n d r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s r e s u l t s i n o x i d a t i v e s t r e s s , l e a d i n g t o c e l l u l a r d a m a g e ( B u r l o n a n d I n g o l d , 1 9 8 4 ) . O x i d a t i v e s t r e s s e s h a v e b e e n l i n k e d t o c a n c e r , a g i n g , a t h e r o s c l e r o s i s , i n f l a m m a t i o n , i s c h e m i c i n j u r y a n d n e u r o d e g e n e r a t i v e d i s e a s e s ( P a r k i n s o n s a n d A l z h e i n e r s ) ( P a l o z z a , 1 9 9 8 ) . F l a v o n o i d m a y h e l p p r o v i d e p r o t e c t i o n a g a i n s t t h e s e d i s e a s e s b y c o n t r i b u t i n g a l o n g w i t h a n t i o x i d a n t v i t a m i n s a n d e n z y m e s , t o t h e t o t a l a n t i o x i d a n t d e f e n s e s y s t e m t o t h e h u m a n b o d y . E p i d e m i o l o g i c a l s t u d i e s h a v e s h o w n t h a t f l a v o n o i d s a n d c a r o t e n o i d s i n t a k e a r e i n v e r s e l y r e l a t e d t o m o r t a l i t y f r o m c o r o n a r y h e a r t d i s e a s e s a n d t o t h e i n c i d e n c e o f h e a r t a t t a c k s ( D o n a l d a n d C r i s t o b a l , 2 0 0 6 ) . A n t i b a c t e r i a l P r o p e r t y F r o m T a b l e 2 . 0 , i t i s v e r y c l e a r t h a t t h e a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m s h o w e d g r o w t h i n h i b i t i o n a c t i v i t y o n l y a t h i g h e r c o n c e n t r a t i o n s i n t h e r a n g e o f 3 0 0 m g t o 5 0 0 m g . E . a e r o g e n s a n d P . m i r a b i l i s w e r e s e n s i t i v e t o a q u e o u s e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m r a t h e r t h a n 2 8 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1 S . N o N a m e o f t h e p h y t o c h e m i c a l D i f f e r e n t e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m A q u e o u s e x t r a c t E t h a n o l i c e x t r a c t H e x a n e e x t r a c t 1 . A l k a l o i d s + v e + v e + v e 2 . F l a v o n o i d s + v e + v e + v e 3 . S a p o n i n s + v e + v e + v e 4 . T a n n i n s + v e + v e + v e 5 . G l y c o s i d e s - v e - v e - v e T a b l e 1 . 1 : Q u a l i t a t i v e a n a l y s i s o f d i f f e r e n t e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m f o r p h y t o c h e m i c a l s + v e p r e s e n c e - v e - a b s e n c e S . N o N a m e o f t h e p h y t o c h e m i c a l L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m D r y s a m p l e W e t s a m p l e 1 . A l k a l o i d s ( m g / 1 0 0 g ) 4 6 . 6 8 ± 3 . 2 1 2 1 . 3 9 ± 2 . 1 7 2 . F l a v o n o i d s ( m g / 1 0 0 g ) 6 9 . 3 3 ± 4 . 1 4 5 6 . 1 8 ± 3 . 1 9 3 . S a p o n i n s ( m g / 1 0 0 g ) 0 3 . 7 7 ± 0 . 5 4 0 1 . 2 1 ± 0 . 8 4 4 . T a n n i n s ( m g / 1 0 0 g ) 0 2 . 3 7 ± 0 . 7 6 0 1 . 6 7 ± 0 . 4 6 T a b l e 1 . 2 : Q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m f o r p h y t o c h e m i c a l s

e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s . S . t y p i s h o w e d m o d e r a t e r e s i s t a n c e t o a l l t h e e x t r a c t s w h e n c o m p a r e d t o o t h e r s ( T a b l e 2 . 0 ) . I t w a s o b s e r v e d t h a t i n b o t h e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m , b a c t e r i a l s t r a i n s a r e n o t h i g h l y s u s c e p t i b l e e v e n a t h i g h c o n c e n t r a t i o n t h a n a q u e o u s e x t r a c t . T h e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f t h e a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m w e r e d e t e r m i n e d b y f e r r i c t h i o c y n a t e ( F T C ) a n d t h e v a l u e s a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 3 . 0 . F T C m e t h o d w a s u s e d t o d e t e r m i n e t h e a m o u n t o f p e r o x i d e f o r m e d a n d t h a t r e a c t w i t h f e r r o u s c h l o r i d e ( F e C l 2 ) t o f o r m a r e d d i s h f e r r i c c h l o r i d e ( F e C l 3 ) p i g m e n t . I n t h i s m e t h o d , t h e c o n c e n t r a t i o n o f p e r o x i d e d e c r e a s e s a s t h e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f e x t r a c t i n c r e a s e s . A q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s a t v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n ( 1 0 0 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 a n d 5 0 0 i n μ g / m l ) , s h o w e d a n t i o x i d a n t a c t i v i t i e s i n a c o n c e n t r a t i o n d e p e n d e n t m a n n e r . E t h a n o l e x t r a c t a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f 5 0 0 μ g / m l s h o w e d 6 1 . 1 6 % , a n a n t i o x i d a n t a c t i v i t y a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f 5 0 0 μ g / m l o f α - t o c o p h e r o l 7 6 . 8 6 % , t h e r e f e r e n c e c o m p o u n d . T h e a q u e o u s a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m a l s o h a v e s h o w e d s o m e s i g n i f i c a n t l e v e l o f i n h i b i t i o n o f l i p i d p e r o x i d a t i o n . I t h a s b e e n o b s e r v e d t h a t t h e e x t r a c t e x h i b i t e d m o d e r a t e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y . C O N C L U S I O N B a s e d o n t h e r e s u l t s o f t h e p r e s e n t s t u d y , i t w a s c o m m e n t e d t h a t d i f f e r e n t e x t r a c t s o f t h i s p l a n t l e a f p o s s e s s a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i o x i d a n t p r o p e r t y . B u t , f u r t h e r s t u d i e s a r e n e e d e d t o g e t t h e c l e a r m e c h a n i s m f o r s u c h p r o p e r t y w h i c h w o u l d b e i n t e r e s t i n g t o l e a r n . A C K N O W L E D G E M E N T T h e a u t h o r s a r e g r a t e f u l t o M r s . M e e n a k s h i A n n a m a l a i , D i r e c t o r , K a r p a g a V i n a y a g a C o l l e g e o f E n g i n e e r i n g a n d T e c h n o l o g y f o r t h e c o m p l e t e s u p p o r t t h r o u g h o u t t h e w o r k w i t h t i m e l y a n d v a l u a b l e d i s c u s s i o n s . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 2 8 3 M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1 A g e n t U s e d f o r s t u d y C o n c e n t r a t i o n i n µ g A q u e o u s e x t r a c t E t h a n o l i c e x t r a c t H e x a n e e x t r a c t E . c o l i P . m i r a b i l i s S . t y p h i E . a e r o g e n e s E . c o l i P . m i r a b i l i s S . t y p h i E . a e r o g e n e s E . c o l i P . m i r a b i l i s S . t y p h i E . a e r o g e n e s L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m 1 0 0 N S N S N I N I N S N I N I N S N I N I N I N S 2 0 0 N S 1 0 . 1 N S N S N S N S N I N S N S N I N S N S 3 0 0 1 0 . 3 1 2 . 6 N S 1 0 . 2 1 2 . 7 1 1 . 2 1 0 . 2 1 1 . 1 1 1 . 5 1 0 . 4 1 0 . 8 1 0 . 3 4 0 0 1 3 . 1 1 6 . 1 1 1 . 8 1 4 . 7 1 4 . 6 1 3 . 7 1 1 . 6 1 3 . 4 1 3 . 1 1 2 . 8 1 2 . 3 1 1 . 9 5 0 0 1 6 . 5 1 9 . 3 1 5 . 6 1 9 . 7 1 5 . 3 1 6 . 2 1 4 . 4 1 6 . 3 1 6 . 2 1 4 . 7 1 5 . 7 1 4 . 2 S t r e p t o m y c i n 1 0 0 2 1 . 6 2 0 . 8 1 9 . 1 2 2 . 1 2 0 . 8 1 9 . 5 1 8 . 9 1 9 . 1 1 9 . 9 2 0 . 1 1 8 . 9 2 1 . 4 C h l o r a m p h e n i c a l 1 0 0 2 2 . 3 1 9 . 6 2 0 . 7 1 9 . 8 2 0 . 1 1 8 . 6 1 9 . 3 2 0 . 7 1 9 . 1 1 9 . 9 2 0 . 1 2 0 . 1 T a b l e 2 . 0 : A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m N S N o n s i g n i f i c a n t v a l u e ( < 1 0 m m ) N I N o I n h i b i t i o n

R E F E R E N C E S A l i Y i l d i r i m , M a n i r O k t a y , V a h i t b i l a l o g l u . 2 0 0 1 . T h e a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f t h e l e a v e s o f C y d o n i a v u l g a n i s . T r . J . M e d . S c i . , 3 1 : 2 3 - 2 7 . B u r l o n G W a n d I n g o l d K U . 1 9 8 4 . B - C a r o t e n e , a n u n u s u a l t y p e o f l i p i d a n t i o x i d a n t . J . S c i . , 2 2 4 : 5 7 3 . C h u n g K T , T h o m a s s o n W R a n d W u - Y u a n C D . 1 9 9 0 . G r o w t h i n h i b i t i o n o f s e l e c t e d f o o d - b o r n e b a c t e r i a , p a r t i c u l a r l y L i s t e r i a m o n o c y t o g e n e s , b y p l a n t e x t r a c t s . J . A p p l . B a c t e r i o l . , 6 9 : 4 9 8 - 5 0 3 . D o n a l d R B a n d C r i s t o b a l M . 2 0 0 6 . A n t i o x i d a n t a c t i v i t i e s o f f l a v o n o i d s , J . A g r i c . , 5 2 : 1 2 5 - 7 5 7 . G u r u d e v a M R a n d Y o g a n a r a s i m h a n S . B i b l i o g r a p h y o f M e d i c i n a l p l a n t s o f I n d i a ( P h a r m a c o g n o s y a n d P h a r m a c o l o g y ) , 2 0 0 9 , D i v y a c h a n d r a P r a k a s h a n a , B a n g a l o r e . 6 2 1 - 6 2 2 , 7 0 3 - 7 1 2 . H a r b o r n e J B . 1 9 7 3 . T e x t b o o k o f p h y t o c h e m i c a l m e t h o d s , 1 s t E d n , C h a m p r a a n a n d H a l l L t d . L o n d o n . 1 1 0 - 1 1 3 . H a r b o r n e J B . 1 9 7 6 . P h y t o c h e m i c a l m e t h o d s , S e c o n d E d i t i o n , C h a p m a n a n d H a l l L t d , L o n d o n . 5 2 - 5 5 . H o f f m a n B R , D e l a s A t l a s H , B l a n c o K , W i e d e r h o l d N , L e w i s R E , W i l l i a m s L . 2 0 0 4 . S c r e e n i n g o f a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i f u n g a l a c t i v i t i e s o f t e n m e d i c i n a l p l a n t s f r o m G h a n a . J . P h a r m . B i o l . 1 ( 4 2 ) : 1 3 - 1 7 . M a t o o k S a i t M o k b e l . 2 0 0 5 . H a s h i n a g a . A n t i o x i d a n t a c t i v i t i e s o f B a n a n a ( M u s a A A A c v . C a v e n d i s h ) f r u i t s p e e l . A m . J . B i o c h e m . B i o t e c h n o l . , 1 ( 3 ) : 1 2 6 - 1 3 2 . M i s t u d a H , Y u a s u m o t o K , I w a m i . 1 9 9 6 . A n t i o x i d a t i o n a c t i o n o f I n d o l e c o m p o u n d s d u r i n g t h e a u t o x i d a t i o n o f l i n o l i e c a c i d . N i h o n E i y o S h o k u r y o G a k k a i - S h i . , 1 9 : 2 1 0 - 2 1 4 . O d e b i y i O O a n d S o f o w o r a E A . 1 9 7 9 . P h y t o c h e m i c a l s c r e e n i n g o f N i g e r i a n M e d i c i n a l p l a n t s 2 n d O A U / S T R C I n t e r - A f r i c a n S y m p o s i u m o n t r a d i t i o n a l P h a m a c o p o e i a a n d A f r i c a n M e d i c i n a l 2 1 6 - 2 2 0 . O l o y e d O I . 2 0 0 5 . C h e m i c a l p r o f i l e o f u n r i p e p u l p o f C a r i c a p a g a y a . P a k . J . N u t r . , 4 : 3 7 9 - 3 8 1 . O n w u k a G I . 2 0 0 5 . F o o d A n a l y s i s a n d I n s t r u m e n t a t i o n t h e o r y a n d P a r a c t i c e , 1 s t E d n , N a p h t h a l i p r i n t s , L a g o s . 1 1 4 - 1 6 9 . P a l o z z a P . 1 9 9 8 . P r o - o x i d a n t a c t i o n s o f C a r o t e n o i d s i n B i o l o g i c S y s t e m s . N u t r . R e v o l u t i o n 5 6 : 2 5 7 - 2 5 6 . S o f o w o r a E A . 1 9 8 3 . P r o c e e d i n g s o f t h e 5 t h I n t e r n a t i o n a l S y m p o s i u m o n m e d i c i n a l p l a n t s . U n i v e r s i t y o f I l e - I f e , N i g e r i a . 7 . S h o b a n a S , V i d h y a V G a n d R a m y a M . 2 0 0 9 . A n t i b a c t e r i a l A c t i v i t y o f G a r l i c V a r i e t i e s ( O p h i o s c o r d o n a n d S a t i v u m ) o n E n t e r i c P a t h o g e n s , C u r r . R e s . J . B i o l . S c i . , 1 ( 3 ) : 1 2 3 - 1 2 6 . T a n a k a J C A , D a S i l v a C C , D e O l i v e i r a A J B , N a k a m u r a C , D i a s F i l h o B P . 2 0 0 6 . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f i o d o l e a l k a l o i d s f r o m A s p i d o s p e r m a r a m i f l o r a m . B r . J . M e d . B i o l . R e s . , 3 9 ( 3 ) : 3 8 7 - 3 9 1 . T r e a s e G E a n d E v a n s W C . 1 9 8 9 . P h a r m a c o g n o s y . 2 n d E d n , B r a i l l e T i r i d e l a n d M a c m i l l a n p u b l i s h e r s . 2 8 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 4 : 2 7 9 - 2 8 4 M o h a n a S u n d a r a m e t a l . , 2 0 1 1 S . N o E x t r a c t % o f i n h i b i t i o n o f l i p i d p e r o x i d a t i o n 1 0 0 µ g / m l 2 0 0 µ g / m l 3 0 0 µ g / m l 4 0 0 µ g / m l 5 0 0 µ g / m l 1 . W a t e r 1 2 . 3 1 2 1 . 1 2 3 5 . 7 3 4 5 . 3 4 5 7 . 7 5 2 . E t h a n o l 1 8 . 1 7 2 4 . 6 3 4 3 . 0 8 5 0 . 6 7 6 1 . 1 6 3 . H e x a n e 1 4 . 7 1 2 0 . 3 2 2 8 . 6 3 3 9 . 3 4 4 8 . 5 5 4 . α - T o c o p h e r o l 2 7 . 4 3 3 9 . 7 1 4 7 . 8 7 6 2 . 7 8 7 6 . 8 6 T a b l e : 3 . 0 A n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f a q u e o u s , e t h a n o l i c a n d h e x a n e e x t r a c t s o f L a m p r a c h a e n i u m m i c r o c e p h a l u m