J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y E f f e c t o f p r e b i o t i c ( G r o B i o t i c ® - A ) o n t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e a n d i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a o n r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s W a l b a u m ) K e y w o r d s : R a i n b o w t r o u t , p r e b i o t i c s , G r o B i o t i c ® - A a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) . A B S T R A C T : T h e u s e o f p r e b i o t i c s a s f e e d s u p p l e m e n t s t h a t i m p r o v e e f f i c i e n c y o f i n t e s t i n a l b a c t e r i a i s b e c o m i n g d e r i g u e u r i n a n i m a l h u s b a n d r y i n m a n y r e g i o n s w o r l d w i d e . W e t e s t e d t h e e f f e c t s o f a c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ( G r o B i o t i c ® - A ) i n c l u d i n g y e a s t a n d d a i r y f r a c t i o n s i n d i f f e r e n t l e v e l s o n s u r v i v a l , g r o w t h , c a r c a s s c o m p o s i t i o n a n d i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a o n r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s W a l b a u m ) . I n t h e p r e s e n t s t u d y , w e w e r e a b l e t o d e t e c t h i g h a m o u n t s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) i n t h e i n t e s t i n e a f t e r 1 2 w e e k s o f p r e b i o t i c s u p p l e m e n t a t i o n , c o n d u c t e d . U l t i m a t e l y , w h e n a l l s u p p l e m e n t a t i o n d i e t s a r e c o n s i d e r e d , G r o B i o t i c ® - A i n c l u s i o n t o d i e t s f o r a p p e a r i n g o n i n c r e a s e o n g r o w t h , s u r v i v a l , a n d c a r c a s s c o m p o s i t i o n o n O . m y k i s s . 3 2 5 - 3 3 4 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 5 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : A z a r i A H 1 , 2 , H a s h i m R 1 , A z a r i T a k a m i G 3 , F a r a b i S M V 2 , D a r v i s h M 4 a n d S a f a r i R 5 . I n s t i t u t i o n : 1 L a b o r a t o r y o f F e e d s a n d F e e d i n g M a n a g e m e n t , A q u a c u l t u r e R e s e a r c h G r o u p , S c h o o l o f B i o l o g i c a l S c i e n c e s , U n i v e r s i t i S a i n s M a l a y s i a , 1 1 8 0 0 P e n a n g , M a l a y s i a 2 D e p a r t m e n t o f A q u a c u l t u r e , C a s p i a n S e a R e s e a r c h I n s t i t u t e o f E c o l o g y , S a r i , I r a n 3 D e p a r t m e n t o f A q u a t i c s D i s e a s e a n d H e a l t h , F a c u l t y o f V e t e r i n a r y S c i e n c e , T e h r a n U n i v e r s i t y , T e h r a n , I r a n 4 D e p a r t m e n t o f M a r i n C h e m i s t r y S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y , I s l a m i c A z a d U n i v e r s i t y , N o r t h T e h r a n B r a n c h , T e h r a n , I r a n 5 D e p a r t m e n t o f B i o t e c h n o l o g y , C a s p i a n S e a R e s e a r c h I n s t i t u t e o f E c o l o g y , S a r i , I r a n . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : A b d o l h a m i d A z a r i E m a i l : a h a z a r i t a k a m i @ y a h o o . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 5 5 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 3 J u l 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 0 8 J u l 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 1 2 s e p 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : A z a r i A H , H a s h i m R , A z a r i T a k a m i G , F a r a b i S M V , D a r v i s h M a n d S a f a r i R . E f f e c t o f p r e b i o t i c ( G r o B i o t i c ® - A ) o n t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e a n d i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a o n r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s W a l b a u m ) . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N : T h e c u l t u r e o f s a l m o n i d s p a r t i c u l a r l y A t l a n t i c s a l m o n , S a l m o s a l a r a n d r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) i s o n e o f t h e m o s t i m p o r t a n t e x a m p l e s o f c o m m e r c i a l l y s u c c e s s f u l i n t e n s i v e a q u a c u l t u r e i n t h e w o r l d . R a i n b o w t r o u t i s a l a r g e e c o n o m i c f i s h i n I r a n a n d a r t i f i c i a l b r e e d i n g f a r m s o f t h i s f i s h s p e c i e s a r e i n c r e a s i n g a p p a r e n t l y . I t i s a l s o t h e s e c o n d c u l t u r e d f i s h s p e c i e s i n I r a n ( F A O , 2 0 0 6 ) . T h e i n c r e a s i n g e c o n o m i c a n d s o c i a l c o n c e r n s b y d e c r e a s i n g t h e u s e o f a n t i b i o t i c s a n d o t h e r c h e m i c a l s u s e d i n f i s h f a r m i n g h a v e e n c o u r a g e d m o r e e n v i r o n m e n t f r i e n d l y a p p r o a c h e s f o r i n c r e a s i n g g r o w t h ( V e r s c h u e r e e t a l . , 2 0 0 0 ) . P r e b i o t i c , u n l i k e p r o b i o t i c , i s n o t a n o r g a n i s m a n d h a s l e s s i n f l u e n c e i n n a t u r a l e n v i r o n m e n t . T h e s e s o - c a l l e d p r e b i o t i c c a r b o h y d r a t e s a r e d e f i n e d a s n o n d i g e s t i b l e f o o d i n g r e d i e n t ( s ) t h a t b e n e f i c i a l l y a f f e c t h o s t h e a l t h b y s e l e c t i v e l y s t i m u l a t i n g t h e g r o w t h a n d / o r a c t i v i t y o f o n e o r a l i m i t e d n u m b e r o f b a c t e r i a i n t h e c o l o n ( G i b s o n a n d R o b e r f r o i d 1 9 9 5 ) . T h e r e f o r e , t h e n e e d f o r a l t e r n a t i v e t e c h n i q u e s i s i n c r e a s i n g , a n d t h e c o n t r i b u t i o n o f p r e b i o t i c s s u c h a s x y l o o l i g o s a c c h a r i d e s ( X O S ) m a y b e c o n s i d e r a b l e . X O S , f r u c t o o l i g o s a c c h a r i d e s ( F O S ) , i n u l i n , a n d o t h e r r e l a t e d c a r b o h y d r a t e s h a v e r e c e i v e d c o n s i d e r a b l e a t t e n t i o n b e c a u s e o f t h e h e a l t h b e n e f i t s t h e y a r e b e l i e v e d t o c o n f e r o n t h e h o s t ( M u s s a t t o a n d M a n c i l h a 2 0 0 7 ; C e r e z u e l a e t a l . , 2 0 0 8 ) . H o w e v e r , i t i s e v i d e n t t h a t t h e y p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n g e n e r a t i n g a c o l o n i c m i c r o f l o r a t h a t c o m p r i s e s p r e d o m i n a n t l y b i f i d o b a c t e r i a i n y o u n g m a m m a l s ( H o u d i j k e t a l . , 1 9 9 8 ; E r n e y e t a l . 2 0 0 0 ; C o s t a l o s e t a l . , 2 0 0 8 ) . A f u n c t i o n a l n u t r i e n t c a n b e f u r t h e r d e f i n e d a s a d i e t a r y i n g r e d i e n t t h a t e m p l o y s p o s s i b l e p o s i t i v e e f f e c t s o n h e a l t h i n a d d i t i o n t o i t s d i r e c t r o l e a s a n u t r i e n t . T h e r e f o r e , t h e p r e s e n t s t u d y w a s c o n d u c t e d t o e x p l o r e g r o w t h p e r f o r m a n c e , s u r v i v a l a n d m i c r o f l o r a i n t o i n t e s t i n e o f j u v e n i l e r a i n b o w t r o u t , t h a t f e e d t h e v a r i e t y l e v e l s o f d i e t a r y p r e b i o t i c , G r o B i o t i c ® - A w h i c h i s a c o m m e r c i a l m i x t u r e o f p a r t i a l l y a u t o l y z e d b r e w e r s y e a s t , d a i r y i n g r e d i e n t c o m p o n e n t s a n d d r i e d f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s ( w i t h 5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 , 2 5 a n d 3 0 g k g - 1 G r o B i o t i c ® - A ) . M A T E R I A L A N D M E T H O D S : S o u r c e a n d m a i n t e n a n c e o f f i s h T h e e x p e r i m e n t a l s y s t e m w a s u s e d h e r e f o r a n e x p e r i m e n t t o o p t i m i z e t h e f e e d i n g r e g i m e o f r a i n b o w t r o u t , O n c o r h y n c h u s m y k i s s . A p p a r e n t l y h e a l t h y O . m y k i s s w i t h a n a v e r a g e b o d y w e i g h t o f 4 . 5 g w e r e o b t a i n e d f r o m p r i v a t e f a r m a t H a r a z , N i y a k G h e z e l . T h e f i s h w e r e a c c l i m a t e d f o r o n e w e e k i n f o u r f i b e r g l a s s t a n k s ( 4 × 4 × 1 m , 8 m 3 ) t o f i s h h o u s e c o n d i t i o n s b e f o r e t h e s t a r t o f t h e t r i a l . F i s h w e r e k e p t i n f i b e r g l a s s t a n k s i n d i m e n s i o n o f 1 . 5 × 1 . 5 × 0 . 4 m , 1 m 3 w i t h a n o p e n s y s t e m o f s u p p l y l o c a t e d i n t h e n o r t h o f I r a n . F i s h e s r a n d o m l y w e r e d i v i d e d i n t o 7 g r o u p s w h i c h w e r e p l a c e d i n f i b e r g l a s s t a n k s a s d e s c r i b e d i n a b o v e a n d i n f r e s h w a t e r - f l o w a t 9 - 1 2 o C f o r 8 4 d a y s p r i o r t o u s e i n e x p e r i m e n t s . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e T h e p r e s e n t w o r k w a s p e r f o r m e d a t t h e D e p a r t m e n t o f A q u a c u l t u r e , E c o l o g i c a l A c a d e m y o f C a s p i a n S e a , S a r i , I r a n . T h e t r i a l w a s p e r f o r m e d f o r 1 2 - w e e k s u s i n g f i s h i n 3 r e p l i c a t e s p e r t r e a t m e n t . B e f o r e t h e s t a r t o f t h e f e e d i n g t r i a l , t h r e e f i s h w e r e r a n d o m l y s a c r i f i c e d w i t h a n o v e r d o s e o f c l o v e o i l , a n d t r i p l i c a t e p o o l e d s a m p l e s w e r e t a k e n f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f i n i t i a l w h o l e b o d y c o m p o s i t i o n . A t t h e e n d o f t h e t r i a l , a l l f i s h w e r e w e i g h e d a n d c o u n t e d a n d t h r e e f i s h e s f r o m e a c h f i b e r g l a s s t a n k w e r e c o l l e c t e d f o r r e s o l u t i o n o f w h o l e c a r c a s s c o m p o s i t i o n . E x p e r i m e n t a l d i e t s T h e f i s h w e r e f e d w i t h a s t a n d a r d c o m m e r c i a l f o o d ( C h i n e C o . ) a t a r a t e o f 2 - 5 % o f t h e b i o m a s s p e r d a y . C o m m e r c i a l d r y f o o d s e r v e d a s a b a s i s i n w h i c h t h e v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s o f p r e b i o t i c , G r o B i o t i c ® - A w e r e a d d e d , i n 2 0 m l o f s u n f l o w e r o i l , t o c o m m e r c i a l d r y f e e d f o l l o w e d b y m i x i n g w i t h a b l e n d e r o r b y h a n d y . S i x e x p e r i m e n t a l d i e t s w e r e f o r m u l a t e d w i t h i n c r e a s i n g l e v e l s o f G r o B i o t i c ® - A ( 1 , 1 . 5 , 2 , 2 . 5 a n d 3 % o f b a s a l d i e t ) a n d n o n - s u p p l e m e n t e d d i e t ( c o n t r o l ) : a s d i e t 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 a n d 7 c o n t a i n i n g 4 3 . 3 0 ± 0 . 0 7 % a n d 4 0 . 5 6 ± 0 . 0 6 % p r o t e i n , 1 3 . 5 7 ± 0 . 1 5 % a n d 1 5 . 1 9 ± 0 . 0 4 % l i p i d a n d a n e s t i m a t e d g r o s s e n e r g y l e v e l o f 2 0 . 3 1 ± 0 . 0 3 a n d 2 0 . 6 1 ± 0 . 0 4 k j . g - 1 ( F F T , F i n g e r l i n g F e e d R a i n b o w T r o u t a n d G F T 1 , G r o w t h F e e d R a i n b o w T r o u t ) , r e s p e c t i v e l y . A n a l y t i c a l m e t h o d s C h e m i c a l a n a l y s e s T h e f o o d , e x p e r i m e n t a l d i e t s a n d f i s h c a r c a s s w e r e a n a l y s e d f o r p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f d r y m a t t e r , c r u d e p r o t e i n , c r u d e l i p i d , f i b r e a n d a s h u s i n g s t a n d a r d A O A C m e t h o d s ( 1 9 9 7 ) . B r i e f l y , d r y m a t t e r w a s d e t e r m i n e d b y d r y i n g a t 1 0 0 0 C t o c o n s t a n t w e i g h t ; c r u d e p r o t e i n w a s d e t e r m i n e d b y t h e K j e l d a h l p r o c e d u r e ( N i t r o g e n × 6 . 2 5 ) ; c r u d e f a t b y c h l o r o f o r m m e t h a n o l e x t r a c t i o n ( 2 : 1 , v / v ) ; c r u d e a s h c o n t e n t b y d e t e r m i n i n g t h e r e s i d u e a f t e r h e a t i n g i n a m u f f l e f u r n a c e a t 5 5 0 0 C f o r 5 h a n d c r u d e f i b r e 3 2 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1

b y l o s s o n i g n i t i o n o f d r i e d r e s i d u e a f t e r s u c c e s s i v e d i g e s t i o n w i t h 5 % H 2 S O 4 . N i t r o g e n f r e e e x t r a c t ( N F E ) w a s c a l c u l a t e d b y s u b t r a c t i n g t h e s u m o f c r u d e p r o t e i n , c r u d e f a t , a s h , a n d c r u d e f i b r e f r o m t h e t o t a l d r y m a t t e r c o n t e n t . P r o x i m a t e a n a l y s e s o f t h e t r i a l d i e t s a r e d e s c r i b e d i n T a b l e 1 . B a c t e r i a l a n a l y s i s T h e m i c r o b i a l a n a l y s e s w e r e d o n e t w i c e ; b e f o r e t h e t r i a l a n d a t t h e e n d o f t h e f o u r t h w e e k . T e n f i s h f r o m e a c h g r o u p w e r e s a c r i f i c e d b y i m m e r s i o n i n a t a n k c o n t a i n i n g M S - 2 2 2 a t a c o n c e n t r a t i o n o f 1 5 0 m g L - 1 o f w a t e r f o r 1 5 m i n , a n d t h e y w e r e e v i s c e r a t e d a s e p t i c a l l y a n d t h e w h o l e i n t e s t i n e w a s r e m o v e d . T h e i n t e s t i n e w a s d i s s e c t e d a n d t h e c o n t e n t s w e r e c o l l e c t e d b y c a r e f u l l y s c r a p i n g w i t h a r u b b e r s p a t u l a a n d w e i g h e d . T h e m i c r o b i a l a n a l y s e s w e r e p e r f o r m e d b y s p r e a d i n g a p p r o p r i a t e d i l u t i o n s i n P B S f r o m 1 0 1 t o 1 0 6 o n t r y p t i c s o y a g a r ( T S A , M e r c k , D a r m s t a d t , G e r m a n y ) , a g e n e r a l m e d i a f o r f a c u l t a t i v e a e r o b i c b a c t e r i a . T h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d a e r o b i c a l l y a t 3 0 ° C f o r 2 d a y s . F o r d e t e r m i n a t i o n o f a n a e r o b i c b a c t e r i a w a s u s e d f r o m a n a e r o b i c j a r s w i t h d i s p o s a b l e A n a e r o c u l t A b a g s ( M e r c k , D a r m s t a d t , G e r m a n y ) f o r t h e g e n e r a t i o n o f a n a n a e r o b i c m e d i u m . F o r l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) d e t e r m i n a t i o n , d i l u t e d s a m p l e s w e r e p l a t e d o n d e M a n , R o g o s a , a n d S h a r p e ( M R S ) a g a r ( M e r c k , D a r m s t a d t , G e r m a n y ) a n d i n c u b a t e d a t 3 0 ° C f o r 2 3 d a y s i n a n a n a e r o b i c j a r s w i t h d i s p o s a b l e A n a e r o c u l t C b a g s ( M e r c k , D a r m s t a d t , G e r m a n y ) ( J o n e s e t a l . , 2 0 0 8 ) . C a l c u l a t i o n a n d S t a t i s t i c a l A n a l y s i s T h e f o l l o w i n g f o r m u l a e w e r e a p p l i e d t o t h e d a t a : F e e d i n t a k e ( F I ) = [ t o t a l f e e d i n t a k e / n u m b e r o f f i s h ( g ) ] S p e c i f i c g r o w t h r a t e ( S G R % ) = [ ( ( l n W f l n W i ) / T ) × 1 0 0 ] F e e d e f f i c i e n c y ( F E ) = [ t o t a l w e t w e i g h t g a i n ( g ) / t o t a l f e e d i n t a k e ( g ) ] P r o t e i n E f f i c i e n c y R a t i o ( P E R ) = [ w e t w e i g h t g a i n ( g ) / t o t a l p r o t e i n i n t a k e ] A v e r a g e D a i l y G r o w t h ( A D G = [ ( ( w f w i ) / w i ) × ( T f - T i ) ] S u r v i v a l r a t e ( % ) = [ ( N u m b e r o f f i s h w h i c h s u r v i v e d / i n i t i a l n u m b e r o f f i s h ) × 1 0 0 ] W h e r e W f r e f e r s t o t h e m e a n f i n a l w e i g h t , W i i s t h e m e a n i n i t i a l w e i g h t o f f i s h , T i s t h e f e e d i n g t r i a l p e r i o d i n d a y s . A l l d a t a a r e e x p r e s s e d a s m e a n ± S D , w h e r e n r e p r e s e n t s t h e n u m b e r o f f i s h . T h e d i f f e r e n c e s i n p a r a m e t e r s w e r e t e s t e d f o r s i g n i f i c a n c e u s i n g a o n e - w a y a n a l y s i s o f v a r i a n c e ( A N O V A ) w h i c h w a s p e r f o r m e d u s i n g S P S S . V 1 1 . 5 S u b s e q u e n t s i g n i f i c a n c e b e t w e e n g r o u p s w a s d e l i n e a t e d b y D u n c a n s t e s t . A v a l u e o f P < 0 . 0 5 w e r e t a k e n f o r s i g n i f i c a n c e i n a l l s t a t i s t i c a l t e s t s . R E S U L T S : G r o w t h , S u r v i v a l a n d F e e d P e r f o r m a n c e N o e x t e r n a l c l i n i c a l s i g n o c c u r r e d i n a n y t r e a t m e n t d u r i n g t h e p e r i o d o f t h i s e x p e r i m e n t . T h e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s o f d i f f e r e n t g r o w t h p a r a m e t e r s o f O n c o r h y n c h u s m y k i s s a t t h e e n d o f e x p e r i m e n t a l p e r i o d ( T a b l e 2 ) i n d i c a t e d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n b o d y w e i g h t g a i n p e r c e n t ( W G % ) b e t w e e n t h e s i x d i f f e r e n t g r o u p s a n d c o n t r o l d i e t ( P < 0 . 0 5 ) . O . m y k i s s i n g r o u p G - A 5 k e p t o n d i e t s u p p l e m e n t e d w i t h ( G r o B i o t i c ® - A 2 . 5 % ) w e r e t h e f a s t g r o w e r f o l l o w e d b y t h e O . m y k i s s i n t h e g r o u p s G - A 4 a n d G - A 6 r e c e i v e d d i e t s u p p l e m e n t e d w i t h ( G r o B i o t i c ® - A 2 a n d 3 % r e s p e c t i v e l y ) i n c o m p a r i s o n t o o t h e r g r o u p s . T h e s p e c i f i c g r o w t h r a t e ( S G R ) t a k e s a l m o s t t h e s a m e p a t t e r n o f W G % i n w h i c h O . m y k i s s i n t h e g r o u p G - A 5 ( 2 . 5 % ) h a v e t h e h i g h e s t S G R f o l l o w e d b y O . m y k i s s i n g r o u p s G - A 4 ( 2 % ) a n d G - A 6 ( 3 % ) i n c o m p a r i s o n t o o t h e r g r o u p s . A v e r a g e d a i l y g r o w t h ( A D G ) o f f i s h u n d e r G - A ( 2 , 2 . 5 a n d 3 % ) f e e d i n g w e r e s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r ( P < 0 . 0 5 ) t h a n t h e b a s a l d i e t a n d o t h e r g r o u p s . S u r v i v a l a l s o w a s a f f e c t e d s i g n i f i c a n t l y ( P < 0 . 0 5 ) b y d i e t a r y t r e a t m e n t s a s t h e f i s h f e d c o n t r o l d i e t h a d l o w e r s u r v i v a l 9 3 . 3 3 ± 2 . 3 1 c o m p a r e d t o a n o v e r a l l s u r v i v a l r a t e o f 9 8 . 6 7 ± 2 . 3 1 a m o n g G - A 5 a n d G - A 6 f e d t h e r e m a i n i n g d i e t s ( T a b l e 2 ) . A p p a r e n t P r o t e i n U t i l i z a t i o n P r o t e i n u t i l i z a t i o n e f f i c i e n c y , m e a s u r e d i n t e r m o f p r o t e i n e f f i c i e n c y r a t i o ( P E R ) a n d n e t p r o t e i n u t i l i z a t i o n ( N P U ) i s s u m m a r i z e d i n T a b l e 3 . T h e s e w e r e t h e s a m e f o r p r o t e i n e f f i c i e n c y r a t i o ( P E R ) i n w h i c h t h e O . m y k i s s i n t h e g r o u p s t r e a t e d w i t h p r e b i o t i c 2 , 2 . 5 a n d 3 % s u p p l e m e n t e d d i e t s e x c e e d e d t h e v a l u e o f o t h e r g r o u p s a n d e v e n c o n t r o l . T h e f e e d e f f i c i e n c y ( F E ) o f O . m y k i s s t a k e s a l m o s t t h e s a m e p a t t e r n s o f P E R i n w h i c h i n t h e g r o u p G - A 5 ( 2 . 5 % ) h a v e t h e h i g h e s t F E f o l l o w e d b y O . m y k i s s i n g r o u p G - A 2 a n d G - A 3 % i n c o m p a r i s o n t o o t h e r g r o u p s a n d b a s a l d i e t . A p p a r e n t n e t p r o t e i n u t i l i z a t i o n ( N P U ) t h e g r o u p s J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 3 2 7 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1

3 2 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1 P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n T r e a t m e n t s E x p e r i m e n t D i e t s M o i s t u r e ( % ) P r o t e i n ( % ) L i p i d ( % ) F i b e r ( % ) A s h ( % ) N F E 9 ( % ) G E 1 0 ( k j . g - 1 ) C o n t r o l F F T 1 5 . 8 3 ± 0 . 1 4 b 4 3 . 3 0 ± 0 . 0 7 a 1 3 . 5 7 ± 0 . 1 5 b 6 . 5 7 ± 0 . 0 9 b 9 . 1 2 ± 0 . 0 3 a 2 7 . 4 4 ± 0 . 1 3 b 2 0 . 3 1 ± 0 . 0 3 g G F T 1 2 6 . 8 5 ± 0 . 1 5 a 4 0 . 5 6 ± 0 . 0 6 b 1 5 . 1 9 ± 0 . 0 4 a 6 . 5 9 ± 0 . 0 7 a 9 . 2 2 ± 0 . 0 2 b 2 8 . 4 4 ± 0 . 0 7 a 2 0 . 6 1 ± 0 . 0 4 b G - A 1 3 F F T + G 1 5 . 7 9 ± 0 . 1 2 b 4 3 . 1 9 ± 0 . 1 1 a 1 3 . 7 0 ± 0 . 1 5 b 6 . 5 2 ± 0 . 1 1 b 9 . 1 2 ± 0 . 1 7 a 2 7 . 4 7 ± 0 . 4 4 b 2 0 . 3 4 ± 0 . 0 6 f g G F T 1 + G 1 6 . 9 1 ± 0 . 0 7 a 4 0 . 4 2 ± 0 . 1 0 b 1 5 . 1 5 ± 0 . 0 6 a 7 . 1 8 ± 0 . 0 6 a 8 . 5 8 ± 0 . 1 2 b 2 8 . 6 7 ± 0 . 1 3 a 2 0 . 4 4 ± 0 . 0 1 d e G - A 2 4 F F T + G 2 5 . 8 9 ± 0 . 0 5 b 4 3 . 2 9 ± 0 . 2 1 a 1 3 . 6 0 ± 0 . 2 1 b 6 . 4 8 ± 0 . 1 5 b 9 . 1 4 ± 0 . 0 4 b 2 7 . 4 3 ± 0 . 2 2 b 2 0 . 3 8 ± 0 . 0 7 e f g G F T 1 + G 2 6 . 9 1 ± 0 . 0 3 a 4 0 . 3 5 ± 0 . 0 6 b 1 5 . 1 5 ± 0 . 0 3 a 7 . 2 2 ± 0 . 0 9 a 8 . 5 7 ± 0 . 1 8 a 2 8 . 7 0 ± 0 . 2 5 a 2 0 . 4 1 ± 0 . 0 2 d e f G - A 3 5 F F T + G 3 5 . 8 5 ± 0 . 1 1 b 4 3 . 1 8 ± 0 . 0 4 a 1 3 . 6 5 ± 0 . 3 0 b 6 . 4 9 ± 0 . 2 0 b 9 . 1 5 ± 0 . 0 6 b 2 7 . 5 3 ± 0 . 4 2 b 2 0 . 4 3 ± 0 . 0 6 d e G F T 1 + G 3 6 . 9 2 ± 0 . 0 6 a 4 0 . 5 8 ± 0 . 2 8 b 1 5 . 1 7 ± 0 . 1 1 a 7 . 3 1 ± 0 . 0 5 a 8 . 5 0 ± 0 . 1 7 a 2 8 . 4 4 ± 0 . 3 0 a 2 0 . 4 0 ± 0 . 0 1 d e f G - A 4 6 F F T + G 4 5 . 7 6 ± 0 . 1 1 b 4 3 . 1 9 ± 0 . 1 1 a 1 3 . 6 9 ± 0 . 1 2 b 6 . 5 1 ± 0 . 0 7 b 9 . 1 3 ± 0 . 0 3 b 2 7 . 4 7 ± 0 . 1 9 b 2 0 . 4 9 ± 0 . 1 0 c d G F T 1 + G 4 6 . 8 3 ± 0 . 0 5 a 4 0 . 3 8 ± 0 . 0 6 b 1 5 . 1 8 ± 0 . 1 5 a 7 . 3 3 ± 0 . 1 0 a 8 . 5 1 ± 0 . 0 4 a 2 8 . 5 9 ± 0 . 0 9 a 2 0 . 7 6 ± 0 . 0 4 a G - A 5 7 F F T + G 5 5 . 9 2 ± 0 . 1 0 b 4 3 . 2 1 ± 0 . 2 0 a 1 3 . 6 8 ± 0 . 0 6 b 6 . 4 7 ± 0 . 1 7 b 9 . 2 0 ± 0 . 1 0 b 2 7 . 4 3 ± 0 . 1 0 b 2 0 . 6 7 ± 0 . 0 3 b G F T 1 + G 5 6 . 8 0 ± 0 . 1 0 a 4 0 . 3 7 ± 0 . 0 5 b 1 5 . 1 9 ± 0 . 1 5 a 7 . 2 0 ± 0 . 1 1 a 8 . 5 1 ± 0 . 0 8 a 2 8 . 7 2 ± 0 . 2 6 a 2 0 . 4 9 ± 0 . 0 5 c d G - A 6 8 F F T + G 6 5 . 7 3 ± 0 . 1 6 b 4 3 . 3 0 ± 0 . 1 3 a 1 3 . 6 8 ± 0 . 0 3 b 6 . 5 6 ± 0 . 0 6 b 9 . 1 4 ± 0 . 0 9 b 2 7 . 3 1 ± 0 . 2 7 b 2 0 . 5 3 ± 0 . 0 3 c G F T 1 + G 6 6 . 7 4 ± 0 . 0 1 a 4 0 . 3 6 ± 0 . 1 7 b 1 5 . 1 6 ± 0 . 0 5 a 7 . 2 4 ± 0 . 0 8 a 8 . 5 2 ± 0 . 0 9 a 2 8 . 7 3 ± 0 . 2 2 a 2 0 . 4 8 ± 0 . 0 3 c d T a b l e 1 P r o x i m a t e a n a l y s e s o f t h e d i e t s u s e d i n v a r y i n g l e v e l s - r e s p o n s e e x p e r i m e n t s i n r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) d u r i n g 8 4 d a y s t r i a l 1 . 1 F i n g e r l i n g F e e d R a i n b o w T r o u t ( c o m m e r c i a l R a i n b o w T r o u t f o o d , C h i n n e ) 2 G r o w t h F e e d R a i n b o w T r o u t ( c o m m e r c i a l R a i n b o w T r o u t f o o d , C h i n n e ) 3 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 0 . 5 % o f d i e t 4 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 % o f d i e t 5 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 . 5 % o f d i e t 6 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 % o f d i e t 7 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 . 5 % o f d i e t 8 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 3 % o f d i e t 9 N i t r o g e n f r e e e x t r a c t { 1 0 0 ( p r o t e i n + l i p i d + a s h + f i b e r ) } 1 0 G r o s s e n e r g y c o n t e n t ( B r a f i e l d 1 9 8 5 ) .

w h i c h r e c e i v i n g G - A f e e d i n g w e r e v a r y s i g n i f i c a n t l y ( P < 0 . 0 5 ) w i t h t h e s e s u p p l e m e n t s l e v e l i n t h e d i e t s , s i m i l a r l y t o P E R . F I ( f e e d i n t a k e ) f o r G - A f e e d i n g t e n d e d t o h a v e b e t t e r v a l u e s t h a n c o n t r o l d i e t w i t h i n c r e a s i n g s u p p l e m e n t s l e v e l a n d a l s o f e e d i n g t o G - A p r o d u c e d a b e t t e r p r o d u c t i v e . T h e p r o t e i n p r o d u c t i v e v a l u e s ( P P V ) o f t h e f i n g e r l i n g s f e d w i t h d i f f e r e n t e x p e r i m e n t a l d i e t s a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 3 . F i s h f e d 2 5 g G - A k g - 1 d i e t ( G - A 5 ) h a d m a x i m u m P P V a n d t h e r e w a s n o i m p r o v e m e n t ( P > 0 . 0 5 ) i n P P V b e y o n d t h i s l e v e l i n c o m p a r i s o n t o b a s a l d i e t . B o d y C o m p o s i t i o n I n o r d e r t o d e t e r m i n e t h e n u t r i t i o n a l e f f e c t s o f a d m i n i s t e r e d p r e b i o t i c o n r a i n b o w t r o u t f r y , t h e b i o c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f c a r c a s s w a s a n a l y z e d . T h e r e s u l t s a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 4 . A t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t , i n c o m p a r i s o n t o i n i t i a l v a l u e s , a l l t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p s w i t h i n c o n t r o l s h o w e d h i g h e r p e r c e n t a g e o f p r o t e i n a n d a s h b u t a l o w e r p e r c e n t a g e l i p i d a n d m o i s t u r e . P r o t e i n v a l u e s o f c a r c a s s i n a l l t r e a t m e n t s w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) t h a n c o n t r o l s . T h e b e s t r e s u l t w a s o b t a i n e d f r o m G - A 5 ( 1 7 . 0 6 ± 0 . 0 6 % ) . S i g n i f i c a n t l y ( P < 0 . 0 5 ) d i f f e r e n t l i p i d v a l u e s o f c a r c a s s i n p r e b i o t i c g r o u p s , c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l s , w e r e i n d i c a t e d . G r o B i o t i c ® - A f e e d i n g r e s u l t e d i n a d e c r e a s e i n b o d y l i p i d ( f a t ) w i t h i n c r e a s e i n d i e t a r y s u p p l e m e n t s . M o i s t u r e v a l u e s o f G - A 2 , G - A 3 , G - A 4 , G - A 5 a n d G - A 6 i n d i c a t e d a s i g n i f i c a n t ( P < 0 . 0 5 ) d i f f e r e n c e a s w e l l ( T a b l e 4 ) . F i s h f e d t h e d i e t ( c o m m e r c i a l r a i n b o w t r o u t f o o d , C H I N E ) u n d e r f e e d i n g r e c e i v e d G - A 2 , 2 . 5 a n d 3 % s h o w e d s i g n i f i c a n t ( P < 0 . 0 5 ) d i f f e r e n c e t h a t h a d h i g h e r b o d y a s h t h a n f i s h f r o m t h e c o n t r o l a n d o t h e r t r e a t m e n t s ( T a b l e 4 ) . B a c t e r i a l A n a l y s i s I n a l l t r e a t m e n t s , l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) s u c c e s s f u l l y c o l o n i z e d t h e O . m y k i s s d i g e s t i v e t r a c t o n t h e e n d o f t r i a l s ( 1 2 - w e e k s ) . A t t h e b e g i n n i n g o f t h e s t u d y , w e o b s e r v e d t h a t a l l t h e f i s h w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t o n t h e a e r o b i c , a n a e r o b i c a n d L A B m e d i a c o u n t ( P > 0 . 0 5 ; T a b l e 5 ) . T o t a l b a c t e r i a l c o u n t s a m o n g p r e b i o t i c s u p p l e m e n t e d g r o u p s w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s i n c o n t r o l s i n d i g e s t i v e t r a c t o f f i s h ( T a b l e 5 ; P < 0 . 0 5 ) . T h e m e a n o f t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s o f i n t e s t i n e w i t h c o n t r o l d i e t i n a e r o b i c a n d a n a e r o b i c c o n d i t i o n i n T S A m e d i a w e r e 4 . 4 6 ± 0 . 0 1 C F U / g a n d 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 C F U / g , r e s p e c t i v e l y i n c r e a s e d e x p o n e n t i a l l y f r o m t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p s i n i n t e s t i n e ( P < 0 . 0 5 ) . O n t h e o t h e r h a n d , L A B c o l o n i z a t i o n w a s d e t e c t e d a r t i f i c i a l l y d o m i n a n t i n e x p e r i m e n t a l g r o u p s , J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 3 2 9 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1 T r e a t m e n t s P a r a m e t e r s G - A 1 2 G - A 2 3 G - A 3 4 G - A 4 5 G - A 5 6 G - A 6 7 C o n t r o l W i ( g ) 8 4 . 4 6 ± 0 . 0 7 4 . 4 8 ± 0 . 0 4 4 . 4 0 ± 0 . 0 6 4 . 4 3 ± 0 . 0 3 4 . 4 0 ± 0 . 1 1 4 . 4 5 ± 0 . 0 5 4 . 4 6 ± 0 . 0 5 W f ( g ) 9 3 8 . 9 8 ± 0 . 7 4 c 3 8 . 9 2 ± 1 . 8 4 c 3 8 . 2 4 ± 1 . 1 7 c 4 1 . 9 3 ± 1 . 1 2 b 4 5 . 2 1 ± 1 . 4 6 a 4 3 . 2 4 ± 1 . 1 3 a b 3 6 . 7 6 ± 2 . 1 4 c W g ( % ) 1 0 7 7 4 . 0 9 ± 1 8 . 1 4 c 7 6 8 . 8 6 ± 3 9 . 3 6 c 7 7 0 . 0 8 ± 3 3 . 1 1 c 8 4 7 . 0 8 ± 1 8 . 4 1 b 9 3 3 . 0 9 ± 1 4 . 8 6 a 8 7 1 . 5 1 ± 2 9 . 0 4 b 7 2 4 . 0 4 ± 4 1 . 6 0 c S G R ( % ) 1 1 2 . 5 8 ± 0 . 0 2 c 2 . 5 7 ± 0 . 0 5 c 2 . 5 7 ± 0 . 0 5 c 2 . 6 8 ± 0 . 0 2 b 2 . 7 8 ± 0 . 0 2 a 2 . 7 1 ± 0 . 0 4 b 2 . 5 1 ± 0 . 0 6 c A D G ( % ) 1 2 4 1 . 1 0 ± 0 . 8 6 c 4 1 . 0 0 ± 2 . 1 7 c 4 0 . 2 9 ± 1 . 4 2 c 4 4 . 6 4 ± 1 . 2 9 b 4 8 . 6 0 ± 1 . 6 2 a 4 6 . 1 8 ± 1 . 3 6 a b 3 8 . 4 5 ± 2 . 5 0 c S u r v i v a l ( % ) 1 3 9 7 . 3 3 ± 2 . 3 1 a b 9 4 . 6 7 ± 2 . 3 1 a b 9 7 . 3 3 ± 2 . 3 1 a b 9 8 . 6 7 ± 2 . 3 1 a 9 8 . 6 7 ± 2 . 3 1 a 9 7 . 3 3 ± 2 . 3 1 a b 9 3 . 3 3 ± 2 . 3 1 b T a b l e 2 I n i t i a l w e i g h t , f i n a l w e i g h t , p e r c e n t a g e w e i g h t g a i n , s p e c i f i c g r o w t h r a t e , a v e r a g e d a i l y g r o w t h a n d s u r v i v a l o f r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) f e d d i e t s c o n t a i n i n g v a r y i n g C o n c e n t r a t i o n s o f G r o B i o t i c ® - A a n d c o n t r o l f o r 8 4 d a y s 1 . 1 V a l u e s a r e m e a n ± S D ( n = 3 ) . M e a n v a l u e s w i t h i n c o l u m n s n o t s h a r i n g t h e s a m e s u p e r s c r i p t a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) 2 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 0 . 5 % o f d i e t 3 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 % o f d i e t 4 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 . 5 % o f d i e t 5 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 % o f d i e t 6 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 . 5 % o f d i e t 7 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 3 % o f d i e t 8 W i = I n i t i a l w e i g h t , 9 W f = F i n a l w e i g h t 1 0 W g = { ( W f W i ) / W i } × 1 0 0 1 1 S G R % = { ( L n W f L n W i ) / T o t a l d a y s } × 1 0 0 1 2 A D G ( % ) = { ( W f W i ) / T o t a l d a y s } × 1 0 0 1 3 S u r v i v a l r a t e ( % ) = ( F i n a l f i s h n u m b e r / I n i t i a l f i s h n u m b e r ) × 1 0 0

h o w e v e r , t h e o p p o s i t e p a t t e r n w a s o b s e r v e d f o r t h e d i g e s t i v e t r a c t s o f O . m y k i s s , i n w h i c h t h e m e a n o f t o t a l L A B c o u n t s a m o n g p r e b i o t i c s a d m i n i s t e r e d g r o u p s w e r e m o r e t h a n c o n t r o l ( P < 0 . 0 5 ) . T h e r e s u l t s o f i d e n t i f i c a t i o n a c c o r d i n g t o m e d i a o n t o a e r o b i c , a n a e r o b i c a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a c o n d i t i o n , t h e h i g h e s t c o u n t r e v e a l e d t h e e x p e r i m e n t t h a t w a s u n d e r G - A 5 ( 4 . 9 2 ± 0 . 0 1 , 7 . 2 1 ± 0 . 0 2 a n d 6 . 6 0 ± 0 . 0 1 C F U / g , r e s p e c t i v e l y ; T a b l e 5 ) . D I S C U S S I O N : G r o w t h P e r f o r m a n c e a n d P r o t e i n u t i l i z a t i o n F i s h g r o w t h p e r f o r m a n c e i s a f f e c t e d b y d i f f e r e n t f a c t o r s i n c l u d i n g w a t e r q u a l i t y , s t r e s s e s a n d d i s e a s e s , d i e t q u a l i t y a n d q u a n t i t y e t c . F i s h u n d e r i n t e n s i v e c u l t u r e c o n d i t i o n s w i l l b e b a d l y a f f e c t e d a n d o f t e n f a l l t a r g e t t o d i f f e r e n t m i c r o b i a l p a t h o g e n s t h a t h a v e b e e n c o n d u c t e d w i t h c h e m o t h e r a p e u t i c s u b s t a n c e s o f w h i c h a n t i b i o t i c s w e r e u s e d . T h e u s e o f b i o l o g i c a l p r o d u c t s n a m e l y t h e p r o b i o t i c e i t h e r a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h p r e b i o t i c s i s r e c e n t l y t h e a i m o f t h e d i s e a s e b i o c o n t r o l p r o g r a m i n a q u a c u l t u r e a s t h e y i m p r o v e t h e f i s h h e a l t h a n d a l t e r t h e f i s h a s s o c i a t e d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n ( G i b s o n a n d R o b e r f r o i d , 1 9 9 5 ) . W h i l e G i b s o n a n d R o b e r f r o i d ( 1 9 9 5 ) d e f i n e d , p r e b i o t i c t e r m a s A n o n d i g e s t i b l e f o o d s i n g r e d i e n t ( s ) t h a t b e n e f i c i a l l y a f f e c t s t h e h o s t b y s e l e c t i v e l y s t i m u l a t i n g t h e g r o w t h a n d / o r a c t i v i t y o f o n e o r a l i m i t e d n u m b e r o f b a c t e r i a i n t h e c o l o n , a n d t h u s i m p r o v e s h o s t h e a l t h . B e s i d e s F A O e x p e r t s A p r e b i o t i c i s a n o n - v i a b l e f o o d c o m p o n e n t t h a t p r e s e n t s a h e a l t h b e n e f i t o n t h e h o s t a s s o c i a t e d w i t h m o d u l a t i o n o f t h e m i c r o b i o t a ( F A O 2 0 0 7 ) . T h e d a t a o f p r e b i o t i c r e s e a r c h i s s t i l l y o u n g , y e t t h e p r o g r e s s m a d e i n e l u c i d a t i n g t h e u s e f u l h e a l t h e f f e c t s o f s p e c i f i c p r e b i o t i c s i s s i g n i f i c a n t n o t o n l y f o r h u m a n s a n d a n i m a l s , b u t f o r f i s h s p e c i e s a l s o a s w e l l . I n t h e p r e s e n t s t u d y , g r o w t h p e r f o r m a n c e w a s i n c r e a s e d a b o u t 2 3 % i n f i s h f e d p r e b i o t i c ( G r o B i o t i c ® - A ) d i e t c o m p a r e d t o f i s h f e d c o n t r o l d i e t ; g r o w t h p e r f o r m a n c e w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) e x h i b i t e d i n O . m y k i s s j u v e n i l e m a i n t a i n e d o n t h e G - A d i e t s u p p l e m e n t e d w i t h ( p r e b i o t i c d i e t ) . T h e s p e c i f i c g r o w t h r a t e ( S G R ) i l l u s t r a t e d a l m o s t t h e s a m e p a t t e r n o f W . G % i n w h i c h O . m y k i s s i n t h e g r o u p t h a t r e c e i v e d G - A 5 h a v e t h e h i g h e s t S G R f o l l o w e d b y O . m y k i s s i n g r o u p G - A 4 a n d G - A 6 c o n t e n t i n c o m p a r i s o n t o c o n t r o l g r o u p , G - A 1 , G - A 2 a n d G - A 3 . T h e s e w e r e a l s o t r u e f o r p r o t e i n e f f i c i e n c y r a t i o ( P E R ) , N P U ( p r o t e i n u t i l i z a t i o n ) a n d s u r v i v a l i n w h i c h t h e O . m y k i s s i n g r o u p s t r e a t e d w i t h p r e b i o t i c s u p p l e m e n t e d d i e t s w a s m o r e t h a n t h e a m o u n t o f c o n t r o l g r o u p . I n o u r s t u d y , s u r v i v a l o f f i s h i n t h e t r e a t m e n t w h i c h p r o d u c e d t h e h i g h e s t g r o w t h p e r f o r m a n c e w a s 5 . 7 % t h a n t h e 3 3 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1 P a r a m e t e r s T r e a t m e n t s F e e d i n t a k e F E 8 P E R 9 N P U ( % ) 1 0 P P V 1 1 G - A 1 2 4 0 . 2 4 ± 1 . 7 8 b c 0 . 8 6 ± 0 . 0 3 c d 1 . 9 9 ± 0 . 0 6 c d 4 . 7 7 ± 2 . 6 1 c d 8 9 . 5 0 ± 6 . 1 4 a G - A 2 3 4 1 . 2 0 ± 0 . 2 3 a b 0 . 8 4 ± 0 . 0 4 d e 1 . 9 7 ± 0 . 0 9 d 2 . 4 0 ± 0 . 0 1 d 8 6 . 2 1 ± 0 . 4 8 a G - A 3 4 4 1 . 7 7 ± 1 . 0 7 a b 0 . 8 1 ± 0 . 0 1 e 1 . 8 9 ± 0 . 0 3 d 7 . 4 6 ± 0 . 9 2 b c 8 8 . 4 6 ± 1 . 6 1 a G - A 4 5 4 1 . 5 5 ± 0 . 8 5 a b 0 . 9 0 ± 0 . 0 1 b 2 . 0 8 ± 0 . 0 2 b c 8 . 2 7 ± 1 . 2 8 b 8 9 . 8 8 ± 2 . 7 3 a G - A 5 6 4 2 . 9 9 ± 0 . 6 5 a 0 . 9 5 ± 0 . 0 2 a 2 . 1 9 ± 0 . 0 4 a 1 3 . 8 4 ± 1 . 2 9 a 9 1 . 4 4 ± 1 . 1 7 a G - A 6 7 4 1 . 3 6 ± 1 . 1 6 a b 0 . 9 4 ± 0 . 0 0 a b 2 . 1 6 ± 0 . 0 1 a b 9 . 9 7 ± 2 . 7 9 b 9 0 . 3 3 ± 2 . 7 3 a C o n t r o l 3 9 . 0 0 ± 0 . 8 6 c 0 . 8 3 ± 0 . 0 4 d e 1 . 8 9 ± 0 . 0 8 d 2 . 2 4 ± 0 . 6 1 d 8 8 . 2 3 ± 1 . 6 9 a T a b l e 3 F e e d i n t a k e , f e e d e f f i c i e n c y , p r o t e i n e f f i c i e n c y r a t i o , N e t t p r o t e i n u t i l i z a t i o n a n d p r o d u c t i v e p r o t e i n v a l u e o f r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) f e d d i e t s c o n t a i n i n g v a r y i n g C o n c e n t r a t i o n s o f G r o B i o t i c ® - A a n d c o n t r o l d i e t f o r 8 4 d a y s 1 . 1 V a l u e s a r e m e a n ± S D ( n = 3 ) . M e a n v a l u e s w i t h i n c o l u m n s n o t s h a r i n g t h e s a m e s u p e r s c r i p t a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) 2 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 0 . 5 % o f d i e t 3 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 % o f d i e t 4 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 . 5 % o f d i e t 5 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 % o f d i e t 6 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 . 5 % o f d i e t 7 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 3 % o f d i e t 8 F e e d e f f i c i e n c y = w e i g h t g a i n ( g ) / f o o d i n t a k e ( g ) 9 P r o t e i n e f f i c i e n c y r a t i o = w e i g h t g a i n ( g ) / p r o t e i n i n t a k e ( g ) 1 0 N e t t P r o t e i n U t i l i z a t i o n ( N P U = W f × P r o t e i n M u s c l e F i n a l W i × P r o t e i n M u s c l e I n i t i a l / P r o t e i n C o n s u m e d ) 1 1 P r o d u c t i v e p r o t e i n v a l u e = p r o t e i n g a i n ( g ) × 1 0 0 / p r o t e i n i n t a k e ( g ) .

l o w e s t s u r v i v a l v a l u e . S i n c e t h e f e e d e f f i c i e n c y ( F E ) o f O . m y k i s s k e p t o n a b a s a l d i e t ( c o n t r o l ) w a s l o w e r t h a n t h e d i e t s s u p p l e m e n t e d w i t h p r e b i o t i c s , w h i l e t h e h i g h e s t F E w a s b e l o n g e d t o g r o u p w h i c h h a d G - A 2 . 5 % a n d a 1 4 . 5 % i n c r e a s e d o n f e e d e f f i c i e n c y , c o r r o b o r a t i n g r e s u l t s o f o t h e r p r e v i o u s s t u d i e s . T h e P E R r e s u l t s i n d i c a t e d t h a t s u p p l e m e n t i n g d i e t s w i t h p r e b i o t i c s s i g n i f i c a n t l y i m p r o v e d p r o t e i n u t i l i z a t i o n i n r a i n b o w t r o u t . S i m i l a r r e s u l t s h a v e b e e n r e p o r t e d b y L i e t a l . , ( 2 0 0 5 ) w h o o b s e r v e d i n c r e a s e d w e i g h t g a i n a n d f e e d e f f i c i e n c y w h i c h w e r e g e n e r a l l y o b s e r v e d i n h y b r i d s t r i p e d b a s s f e d d i e t s s u p p l e m e n t e d w i t h p a r t i a l l y a u t o l y z e d b r e w e r s y e a s t a n d G r o B i o t i c ® - A a t e a c h s a m p l i n g t i m e ( 4 , 8 , 1 2 a n d 1 6 w e e k s ) . S t a y k o v e t a l . , ( 2 0 0 7 ) h a v e c o n d u c t e d r a i n b o w t r o u t ( O . m y k i s s ) w i t h s u p p l e m e n t a t i o n o f p r e b i o t i c B i o M o s ® ( 0 . 2 % ) i n s t a n d a r d c o m m e r c i a l e x t r u d e d f e e d s w h i c h w e r e r a i s e d i n n e t c a g e s a n d r a c e w a y s , a t t h e e n d o f t h e s i x w e e k s t r i a l p e r i o d , t h e m e a n b o d y w e i g h t o f f i s h r e c e i v i n g p r e b i o t i c w a s 1 3 . 7 % a n d 9 . 9 7 % , r e s p e c t i v e l y h i g h e r , c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l g r o u p s ( P < 0 . 0 1 ) . T h e s u p p l e m e n t a t i o n o f p r e b i o t i c i n t h e d i e t s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d F C R ( P < 0 . 0 5 ) a n d m o r t a l i t y ( P < 0 . 0 1 ) . T h i s r e s u l t w a s i n a g r e e m e n t w i t h t h e r e s u l t s e x p r e s s e d b y B o g u t e t a l . , ( 2 0 0 6 ) w h i c h d e m o n s t r a t e d i m p r o v e m e n t s i n g r o w t h w i t h t h e u s e o f p r e b i o t i c M O S ( B i o - M o s ® ) t o t h e d i e t o f o t h e r f r e s h w a t e r s p e c i e s , E u r o p e a n c a t f i s h ( S i l u r u s g l a n i s ) j u v e n i l e s f r o m 2 2 t o 7 6 g i n t h e c o n t r o l g r o u p s a n d 8 3 g i n t h e B i o - M o s ® g r o u p s , a 9 . 7 % h i g h e r a v e r a g e b o d y w e i g h t ( P < 0 . 0 1 ) . H e r e t h e F C R w a s a l s o l o w e r t o 1 1 . 6 % ( P < 0 . 0 1 ) a n d m o r t a l i t y d e c r e a s e d f r o m 2 8 . 3 3 t o 1 6 . 6 7 % ( P < 0 . 0 1 ) . T h e s e d a t a s u p p o r t e d t h e f i n d i n g s o f H a n l e y e t a l . , ( 1 9 9 5 ) w h o a l s o h a v e s h o w n t h a t h y b r i d r e d t i l a p i a j u v e n i l e s , f e d 0 . 6 % p r e b i o t i c ( A q u a - M o s , A l l t e c h I n c . , K Y , U S A ) i n t h e i r h a t c h e r y d i e t s , t h a t h a v e h a d a 2 2 . 5 % i m p r o v e d s u r v i v a l w i t h 2 7 . 2 % i n c r e a s e i n w e i g h t g a i n . T h e r e s u l t s r e v e a l e d t h a t b o t h g r o u p s r e c e i v e d p r e b i o t i c - s u p p l e m e n t e d d i e t s s h o w e d h i g h e r g r o w t h r a t e t h a n t h o s e k e p t o n a b a s a l d i e t , s u g g e s t i n g t h a t t h e a d d i t i o n o f p r e b i o t i c s e n h a n c e d t h e g r o w t h h a v e p e r f o r m a n c e a n d f e e d u t i l i z a t i o n . I n o u r s t u d y o b s e r v e d p r o x i m a t e a n a l y s i s a t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t i n d i c a t e d s i g n i f i c a n t ( P < 0 . 0 5 ) d i f f e r e n c e s i n m u s c l e p r o t e i n , l i p i d , a s h a n d m o i s t u r e c o n t e n t s o f a l l t h e t r e a t m e n t s . A l t h o u g h t h e d i e t s i n c l u d e d c o n t a i n i n g d i f f e r e n t l e v e l s o f G - A , h a d i n c r e a s e d e f f e c t o n t o t a l m u s c l e p r o t e i n a n d a s h ( 1 3 . 3 % a n d 2 0 . 6 % ) , r e s p e c t i v e l y h o w e v e r d e c r e a s e d i n f l u e n c e o n m u s c l e l i p i d a n d m o i s t u r e ( 2 0 . 6 % a n d 1 . 3 % ) , r e s p e c t i v e l y c o n t e n t o f t h e f i s h . T h i s s t u d y h a s f o u n d t h a t s u p p l e m e n t a t i o n w i t h G - A m a y h e l p t o p o s i t i v e l y c h a n g e b o d y c o m p o s i t i o n b y i n c r e a s i n g l e a n b o d y m a s s ( w h i c h i n c l u d e s m u s c l e m a s s ) a n d d e c r e a s i n g f a t m a s s . T h e f i l l e t s ( M R % ) o f t h e g r o u p s o f r a i n b o w t r o u t d i f f e r e d w i t h r e g a r d t o t h e r e c e i v e d o f G - A a n d n o n - G - A ; t h e g r o u p s t h a t f e d G - A s u p p l e m e n t e d d i e t s e x h i b i t e d h i g h e r v a l u e s t h a n o f b a s a l d i e t ( P < 0 . 0 5 ) . R e s u l t s d e m o n s t r a t e d t h a t p r e b i o t i c G - A c a n b e a n i n f l u e n c e d e v i c e f o r t h e e n h a n c e m e n t o f g r o w t h o f p e r f o r m a n c e , h e a l t h s t a t u s a n d f e e d e f f i c i e n c y o f r a i n b o w t r o u t g r o w n i n J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 3 3 1 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1 P r o t e i n ( % ) L i p i d ( % ) A s h ( % ) M o i s t u r e ( % ) A t t h e s t a r t 1 4 . 6 8 ± 0 . 1 3 9 . 4 0 ± 0 . 0 5 1 . 8 7 ± 0 . 0 3 7 5 . 1 0 ± 0 . 3 6 A t t h e e n d G - A 1 2 1 5 . 5 0 ± 0 . 4 3 d 8 . 2 3 ± 0 . 0 6 a 1 . 2 2 ± 0 . 0 2 b 7 5 . 0 1 ± 0 . 0 2 a G - A 2 3 1 5 . 1 0 ± 0 . 0 0 e 7 . 5 9 ± 0 . 4 5 b 1 . 2 1 ± 0 . 0 6 b 7 4 . 9 3 ± 0 . 0 5 a b G - A 3 4 1 5 . 8 5 ± 0 . 1 6 c 7 . 4 4 ± 0 . 1 2 b 1 . 2 3 ± 0 . 2 3 b 7 4 . 8 9 ± 0 . 6 3 a b G - A 4 5 1 6 . 1 7 ± 0 . 2 1 b c 7 . 4 4 ± 0 . 0 3 b 1 . 3 8 ± 0 . 1 1 a b 7 4 . 4 9 ± 0 . 1 0 b c G - A 5 6 1 7 . 0 6 ± 0 . 0 6 a 7 . 0 5 ± 0 . 0 4 c 1 . 4 6 ± 0 . 0 5 a 7 4 . 2 4 ± 0 . 0 9 c G - A 6 7 1 6 . 2 3 ± 0 . 0 6 b 7 . 0 9 ± 0 . 0 5 c 1 . 4 4 ± 0 . 0 5 a 7 4 . 5 1 ± 0 . 1 8 b c C o n t r o l 1 5 . 0 6 ± 0 . 1 1 e 8 . 0 2 ± 0 . 0 7 a 1 . 2 1 ± 0 . 0 2 b 7 5 . 1 6 ± 0 . 1 3 a T a b l e 4 C a r c a s s p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n s o f r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) f e d c o n t r o l a n d v a r y i n g C o n c e n t r a t i o n s o f G r o B i o t i c ® - A a n d c o n t r o l d i e t f o r 8 4 d a y s 1 . 1 V a l u e s a r e m e a n ± S D ( n = 3 ) . M e a n v a l u e s w i t h i n c o l u m n s n o t s h a r i n g t h e s a m e s u p e r s c r i p t a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) 2 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 0 . 5 % o f d i e t 3 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 % o f d i e t 4 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 . 5 % o f d i e t 5 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 % o f d i e t 6 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 . 5 % o f d i e t 7 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 3 % o f d i e t

a v a r i e t y o f p r o d u c t i o n s y s t e m s . O n o t h e r h a n d , t h e b e n e f i c i a l i n f l u e n c e o f G - A s u p p l e m e n t e d o n g r o w t h m a y b e d u e t o a c h a n g e o f t h e i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a b y m a n n a n o l i g o f r u c t o s e , l a c t o s e o r o t h e r c a r b o h y d r a t e s f r o m t h e d a i r y i n g r e d i e n t , p a r t i a l l y a u t o l y z e d y e a s t a n d / o r d r i e d f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s . I n t h e p r e s e n t s t u d y , i t i s g i v e n t h e e v i d e n c e o f i m p r o v e m e n t i n t h e h e a l t h a n d g r o w t h p e r f o r m a n c e o f f i s h i n s p i t e o f t h e d i f f e r e n c e s i n m e t h o d s a n d s p e c i e s u s e d . I n t e s t i n a l m i c r o f l o r a A t t h e e n d o f t r i a l , i t w a s n o t i c e d t h a t t h e p r e b i o t i c s u p p l e m e n t a t i o n i n t o d i e t ( e x t r u d e d p e l l e t f o o d ) i n t h e s e s t u d i e s r e s u l t e d s i g n i f i c a n t ( P < 0 . 0 5 ) i n c r e a s e s i n t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s a m o n g p r e b i o t i c s u p p l e m e n t e d g r o u p s , w h i c h w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t i n c o m p a r e d t o t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s i n c o n t r o l s a t t h e d i g e s t i v e t r a c t o f O . m y k i s s ( P < 0 . 0 5 ) . I n t h e p r e s e n t s t u d y , w e w e r e a b l e t o d e t e c t h i g h a m o u n t s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) i n t h e i n t e s t i n e a f t e r 1 2 w e e k s o f p r e b i o t i c s u p p l e m e n t a t i o n . H o w e v e r t h e v a l u e s n o t e d o n d i f f e r e n t m e d i a s u c h a s : ( A e r o b i c ; 4 . 9 2 v s . 4 . 4 6 C F U / g ) , ( A n a e r o b i c ; 7 . 2 1 v s . 4 . 8 0 C F U / g ) a n d ( L A B ; 6 . 6 0 v s . 0 C F U / g ) G - A g r o u p t r e a t m e n t s a n d b a s a l w h i c h t h e s e p r e s e n t d a t a t h e b e n e f i c i a l i n f l u e n c e o f p r e b i o t i c o n g r o w t h w a s p e r h a p s d u e t o a n a l t e r a t i o n o f t h e i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a . A f t e r 1 2 w e e k s o f G - A - f e e d i n g i n t h e p r e s e n t s t u d y , w e w e r e a b l e t o d e t e c t h i g h a m o u n t s o f L A B a n d t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s o n a e r o b i c a n d a n a e r o b i c m e d i a i n t h e i n t e s t i n e , w h i c h d e m o n s t r a t e s t h a t G - A s u p p l e m e n t e d d i e t s a n d b a s a l g r o u p , i s o l a t e d f r o m t h e i n n e r d i g e s t i v e t r a c t b a c t e r i a o f r a i n b o w t r o u t , h a v e a b i g c a p a c i t y t o a d h e r e t o a n d s u r v i v e i n t h e i n t e s t i n a l t r a c t . L A B s u p p l e m e n t a t i o n , h o w e v e r , d e m o n s t r a t e d a n a b i l i t y t o c h a l l e n g e t h e r e s i d e n t m i c r o b i o t a , s i n c e t h e i n c r e a s e i n L A B o b s e r v e d w a s p o s s i b l y t h e r e s u l t o f a f a l l i n i n t e s t i n a l p H m o t i v e b y l a c t i c a c i d o r o t h e r f e r m e n t e d p r o d u c t s p r o d u c e d b y L A B s t r a i n s . T h e p r e v i o u s s t u d i e s ( R i n g ø e t a l . , 1 9 9 8 ; R i n g ø a n d O l s e n 1 9 9 9 ) i n d i c a t e d t h a t d i e t a r y f a t t y a c i d s a n d c a r b o h y d r a t e s c h a n g e d t h e b a c t e r i a l f l o r a o f t h e g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t o f f i s h . S i m i l a r f i n d i n g s w e r e p o i n t e d o u t b y L i a n d G a t l i n ( 2 0 0 4 , 2 0 0 5 ) , w h o i n v e s t i g a t e d t h e e f f e c t o f c o m m e r c i a l p r e b i o t i c s G r o b i o t i c T M A E a n d G r o b i o t i c T M s u p p l e m e n t e d i n d i e t s o f h y b r i d s t r i p e d b a s s ( M o r o n e c h r y s o p s × M . s a x a t i l i s ) g r o w t h a n d e x h i b i t e d t h a t t h e p r e b i o t i c p r o m o t e d t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e . T h e r e s u l t s o f t h i s p r e s e n t s t u d y c l e a r l y i n d i c a t e d t h a t d i e t s u p p l e m e n t e d w i t h G - A a t a s u i t a b l e c o n c e n t r a t i o n ( 2 0 , 2 5 a n d 3 0 g k g - 1 ) c o u l d i m p r o v e t h e t o t a l b a c t e r i a l c o u n t s a n d L A B o f a l l i n t e s t i n e O . m y k i s s ( T a b l e 5 ) . L a c t i c a c i d b a c t e r i a h a d b e e n c o n s i d e r e d b e n e f i c i a l r e s i d e n t s o f t h e f i s h i n t e s t i n a l f u n c t i o n b e c a u s e o f p r o d u c i n g b a c t e r i o c i n s a n d h e n c e p o s i t i v e l y a f f e c t i n g t h e h o s t s m i c r o f l o r a ( R i n g ø e t a l . , 1 9 9 8 ; I r i a n t o a n d A u s t i n 2 0 0 2 ; R i n g ø e t a l . , 2 0 0 6 ) . P r e b i o t i c o l i g o s a c c h a r i d e s s u c h a s i n u l i n a n d o l i g o f r u c t o s e a r e f e r m e n t e d i n t h e c o l o n w h e r e t h e y p r o m o t e t h e g r o w t h o f b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a s s o c i a t e d w i t h a h e a l t h y , w e l l f u n c t i o n i n g c o l o n . T h i s s e l e c t i v e 3 3 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1 I n i t i a l F i n a l S o u r c e A e r o b i c ( T S A ) A n a e r o b i c ( T S A ) L A B A e r o b i c ( T S A ) A n a e r o b i c ( T S A ) L A B G - A 1 2 4 . 4 9 ± 0 . 0 2 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 4 9 ± 0 . 0 2 e 4 . 8 1 ± 0 . 0 1 e 3 . 6 3 ± 0 . 0 1 f G - A 2 3 4 . 4 9 ± 0 . 0 2 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 6 5 ± 0 . 0 2 d 5 . 2 2 ± 0 . 0 1 d 3 . 9 0 ± 0 . 0 3 e G - A 3 4 4 . 4 8 ± 0 . 0 2 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 4 9 ± 0 . 0 2 c 6 . 8 2 ± 0 . 0 1 c 6 . 0 6 ± 0 . 0 5 d G - A 4 5 4 . 4 8 ± 0 . 0 3 4 . 8 1 ± 0 . 0 1 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 8 6 ± 0 . 0 2 b 7 . 2 0 ± 0 . 0 2 a 6 . 4 6 ± 0 . 0 1 c G - A 5 6 4 . 4 6 ± 0 . 0 2 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 9 2 ± 0 . 0 1 a 7 . 2 1 ± 0 . 0 2 a 6 . 6 0 ± 0 . 0 1 a G - A 6 7 4 . 4 7 ± 0 . 0 1 4 . 8 1 ± 0 . 0 2 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 8 7 ± 0 . 0 1 b 7 . 1 5 ± 0 . 0 1 b 6 . 5 5 ± 0 . 0 3 b C o n t r o l 4 . 4 6 ± 0 . 0 2 4 . 8 0 ± 0 . 0 0 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 4 . 4 6 ± 0 . 0 1 e 4 . 8 0 ± 0 . 0 1 e 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 j T a b l e 5 T o t a l b a c t e r i a l l e v e l s ( l o g C F U / m g i n t e s t i n a l c o n t e n t s ) i n T S A m e d i u m ( A e r o b i c , A n a e r o b i c ) a n d L A B ( L a c t i c A c i d B a c t e r i a ) c o n d i t i o n i n t h e j u v e n i l e O . m y k i s s f e d w i t h t e s t d i e t s f o r 1 2 w e e k s 1 . 1 V a l u e s a r e m e a n ± S D ( n = 3 ) . M e a n v a l u e s w i t h i n c o l u m n s n o t s h a r i n g t h e s a m e s u p e r s c r i p t a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) 2 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 0 . 5 % o f d i e t 3 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 % o f d i e t 4 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 1 . 5 % o f d i e t 5 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 % o f d i e t 6 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 2 . 5 % o f d i e t 7 G r o B i o t i c ® - A ( A c o m m e r c i a l p r e b i o t i c ) 3 % o f d i e t .

s t i m u l a t i o n o c c u r s b e c a u s e o l i g o s a c c h a r i d e s a r e r e a d i l y f e r m e n t e d b y b e n e f i c i a l t y p e s o f c o l o n i c b a c t e r i a a n d a r e n o t u s e d e f f e c t i v e l y b y p o t e n t i a l l y p a t h o g e n i c b a c t e r i a s p e c i e s ( F l i c k i n g e r e t a l . , 2 0 0 3 ) . O u r r e s u l t s h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t G - A , a s w e l l a s o t h e r p r e b i o t i c i n g r e d i e n t s , m a y p r o m o t e t h e m a i n t e n a n c e o f l a c t i c a c i d - p r o d u c t i o n a s s o m e r e p o r t s h a v e a l s o s u p p o r t e d t h e p o i n t ( M u s s a t t o a n d M a n c i l h a 2 0 0 7 ; M o u r a e t a l . , 2 0 0 7 ) . B a s e d o n o u r d a t a , t h e b e n e f i c i a l i n f l u e n c e o f p r e b i o t i c o n g r o w t h w a s p o s s i b l e d u e t o a n a l t e r a t i o n o f t h e i n t e s t i n a l m i c r o f l o r a . A C K N O W L E D G M E N T S W e e x p r e s s o u r b e s t s i n c e r e g r a t i t u d e t o G h e z e l a l a p a r v a r T r o u t f a r m i n g ( p r i v a t e f i s h f a r m i n g ) , C a s p i a n S e a R e s e a r c h I n s t i t u t e o f E c o l o g y o f I r a n a n d I I C , I n t e r n a t i o n a l I n g r e d i e n t C o r p o r a t i o n o f U S A f o r p r o v i d i n g t h e f r y a n d f a c i l i t i e s f o r t h e s t u d y . R E F E R E N C E : A O A C . 1 9 9 7 . O f f i c i a l M e t h o d s o f A n a l y s i s o f A O A C I n t e r n a t i o n a l , 1 6 t h e d n , . A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l A n a l y t i c a l C h e m i s t s , A r l i n g t o n , V A , U S A . 1 ( 4 ) : 1 3 B o g u t I , M i l a k o v i c Z , P a v l i c e v i c J , P e t r o v i c D . 2 0 0 6 . E f f e c t o f B i o - M o s ® o n p e r f o r m a n c e a n d h e a l t h o f E u r o p e a n c a t f i s h ( S i l i r u s g l a n i s ) . I n : N u t r i t i o n a l B i o t e c h n o l o g y i n t h e F e e d a n d F o o d I n d u s t r i e s : P r o c e e d i n g s o f A l l t e c h s 2 2 n d A n n u a l S y m p o s i u m ( S u p p l . , A b s t r a c t s o f P o s t e r s p r e s e n t e d ) , A p r i l 2 3 - 2 6 , L e x i n g t o n , K Y , U S A . 9 0 . B r a f i e l d A E . 1 9 8 5 . L a b o r a t o r i e s s t u d i e s o n e n e r g y b u d g e t s . I n : F i s h E n e r g e t i c s . N e w P e r s p e c t i v e ( T y t l e r , P . & C a l o w , P . e d s ) , C r o o m H e l m , L o n d o n a n d s y d n e y . 2 5 7 - 2 8 1 . C e r e z u e l a R , C u e s t a A , M e s e g u e r J , E s t e b a n M . A . 2 0 0 8 . E f f e c t s o f i n u l i n o n g i l t h e a d s e a b r e a m ( S p a r u s a u r a t a L . ) i n n a t e i m m u n e p a r a m e t e r s . F i s h S h e l l f i s h I m m u n o l . , 2 4 : 6 6 3 - 6 6 8 . C o s t a l o s C , K a p i k i A , A p o s t o l o u M , P a p a t h o m a E . 2 0 0 8 . T h e e f f e c t o f a p r e b i o t i c s u p p l e m e n t e d f o r m u l a o n g r o w t h a n d s t o o l m i c r o b i o l o g y o f t e r m i n f a n t s . E a r l y H u m D e v . , 8 4 : 4 5 - 4 9 . E r n e y R M , M a l o n e W T , S k e l d i n g M B , M a r c o n A A , K l e m a n - L e y e r K M . 2 0 0 0 . V a r i a b i l i t y o f h u m a n m i l k n e u t r a l o l i g o s a c c h a r i d e s i n a d i v e r s e p o p u l a t i o n . J . P e d i a t r , G a s t r o e n t e r o l N u t r . , 3 0 : 1 3 1 - 1 3 3 . F A O . 2 0 0 6 . T h e s t a t e o f w o r l d f i s h e r i e s a n d a q u a c u l t u r e 2 0 0 4 . R o m e , I t a l y . p p 1 4 - 1 7 . F A O . 2 0 0 7 . T e c h n i c a l M e e t i n g o n P r e b i o t i c s . S e p t e m b e r 1 5 - 1 6 , F A O , R o m e , I t a l y . 1 1 . F l i c k i n g e r E A , V a n L o o J , F a h e y G C . 2 0 0 3 . N u t r i t i o n a l r e s p o n s e s t o t h e p r e s e n c e o f i n u l i n a n d o l i g o f r u c t o s e i n t h e d i e t s o f d o m e s t i c a t e d a n i m a l s , a r e v i e w . C r i t . R e v . F o o d S c i . N u t r . , 4 3 : 1 9 - 6 0 . G i b s o n G R a n d R o b e r f r o i d M B . 1 9 9 5 . D i e t a r y m o d u l a t i o n o f t h e h u m a n c o l o n i c m i c r o b i o t a i n t r o d u c i n g t h e c o n c e p t o f p r e b i o t i c s . J , n u t r . , 1 2 5 : 1 4 0 1 - 1 2 . H a n l e y F , B r o w n H a n d C a r b e r r y J . 1 9 9 5 . F i r s t o b s e r v a t i o n s o n t h e e f f e c t s o f m a n n a n o l i g o s a c c h a r i d e a d d e d t o t h e h a t c h e r y d i e t s f o r w a r m w a t e r H y b r i d R e d T i l a p i a . I n : N u t r i t i o n a l B i o t e c h n o l o g y i n t h e F e e d a n d F o o d I n d u s t r i e s : P r o c e e d i n g s o f A l l t e c h s 1 1 t h A n n u a l S y m p o s i u m ( S u p p l . 1 , A b s t r a c t s o f P o s t e r s p r e s e n t e d ) , M a y 2 0 - 2 3 , L e x i n g t o n , K Y , U S A . 1 1 . H o u d i j k J G M , B o s c h M W , V e r s t e g e n M W A . a n d B e r e n p a s H J . 1 9 9 8 . E f f e c t s o f d i e t a r y o l i g o s a c c h a r i d e s o n t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e a n d f a e c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f y o u n g g r o w i n g p i g s . A n i m , F e e d S c i , T e c h n o l . , 7 1 , 5 - 4 8 . I r i a n t o A a n d A u s t i n B . 2 0 0 2 . P r o b i o t i c s i n a q u a c u l t u r e . J . F i s h D i s 2 5 , 6 3 3 6 4 2 . J o n e s R , H u s s e i n H M a n d Z a g o r e c M . 2 0 0 8 . F o o d M i c r o b i o l o g y 2 5 : 2 2 8 - 2 3 4 . L i P a n d G a t l i n D M . 2 0 0 4 . D i e t a r y b r e w e r s y e a s t a n d t h e p r e b i o t i c G r o b i o t i c ® A E i n f l u e n c e g r o w t h p e r f o r m a n c e , i m m u n e r e s p o n s e s a n d r e s i s t a n c e o f h y b r i d s t r i p e d b a s s ( M o r o n e c h r y s o p s × M . s a x a t i l i s ) t o S t r e p t o c o c c u s i n i a e i n f e c t i o n . A q u a c u l t u r e 2 3 1 : 4 4 5 - 4 5 6 . L i P , G a t l i n D M . 2 0 0 5 . E v a l u a t i o n o f t h e p r e b i o t i c G r o b i o t i c ® A E a n d b r e w e r s y e a s t a s d i e t a r y s u p p l e m e n t s f o r s u b - a d u l t h y b r i d s t r i p e d b a s s ( M o r o n e c h r y s o p s × M . s a x a t i l i s ) c h a l l e n g e d i n s i t u J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 3 3 3 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1

w i t h M y c o b a c t e r i u m m a r i n u m . A q u a c u l t u r e 2 4 8 : 1 9 7 - 2 0 5 . M o u r a P , M a r q u e s S , A l v e s L , F r e i r e J P B , C u n h a L F , E s t e v e s M P . 2 0 0 7 . E f f e c t o f x y l o o l i g o s a c c h a r i d e s f r o m c o r n c o b s a u t o h y d r o l y s i s o n t h e i n t e s t i n a l m i c r o b i o t a o f p i g l e t s a f t e r w e a n i n g . L i v e s t . S c i . , 1 0 8 : 2 4 4 - 2 4 8 . M u s s a t t o S I , M a n c i l h a I M . 2 0 0 7 . N o n - d i g e s t i b l e o l i g o s a c c h a r i d e s : a r e v i e w . C a r b o h y d r P o l y m . , 6 8 : 5 8 7 - 5 9 7 . R i n g ø E a n d G a t e s o u p e F J . 1 9 9 8 . L a c t i c a c i d b a c t e r i a i n f i s h : a r e v i e w . A q u a c u l t u r e 1 6 0 : 1 7 7 - 2 0 3 . R i n g ø E a n d O l s e n R E . 1 9 9 9 . T h e e f f e c t o f d i e t o n a e r o b i c b a c t e r i a l f l o r a a s s o c i a t e d w i t h i n t e s t i n e o f A r c t i c c h a r r , S a l v e l i n u s a l p i n u s L . J . A p p l . M i c r o b i o l . , 8 6 : 2 2 - 2 8 . R i n g ø E , S p e r s t a d S , M y k l e b u s t R , R e f s t i e S a n d K r o g d a h l A . 2 0 0 6 . C h a r a c t e r i s a t i o n o f t h e m i c r o b i o t a a s s o c i a t e d w i t h i n t e s t i n e o f A t l a n t i c c o d ( G a d u s m o r h u a L . ) . A q u a c u l t u r e 2 6 1 : 8 2 9 - 8 4 1 . S t a y k o v Y , S p r i n g P , D e n e v S A a n d S w e e t m a n J . 2 0 0 7 . E f f e c t o f a m a n n a n o l i g o s a c c h a r i d e o n t h e g r o w t h p e r f o r m a n c e a n d i m m u n e s t a t u s o f r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) , A q u a c u l . I n t . , 2 : 1 5 3 - 1 6 1 . V e r s c h u e r e L , R o m b a u t G , S o r g e l o o s P a n d V e r s t r a e t e W . 2 0 0 0 . P r o b i o t i c b a c t e r i a a s b i o l o g i c a l c o n t r o l a g e n t s i n a q u a c u l t u r e , M i c r o b i o l , M o l , B i o l , R e v , 6 4 : 6 5 5 - 6 7 1 . 3 3 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 2 5 - 3 3 4 A z a r i e t a l . , 2 0 1 1