J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o f i s o l a t e d b a c t e r i a l f r o m s a l a d s K e y w o r d s : S a l a d s , a n t i b i o t i c , r e s i s t a n c e , p a t t e r n a n d b a c t e r i a l . A B S T R A C T : T h e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o f b a c t e r i a l i s o l a t e s f r o m s a l a d s a m p l e s s o l d i n a r e - k n o w n f o o d i n d u s t r y i n d i f f e r e n t p a r t s o f N i g e r i a w a s i n v e s t i g a t e d . A t o t a l o f t w e n t y - f i v e b a c t e r i a l i s o l a t e s o f s i x g e n e r a w e r e e n c o u n t e r e d i n t h e f o l l o w i n g p r o p o r t i o n : P s e u d o m o n a s s p p . ( 3 6 % ) , B a c i l l u s s p p . ( 2 4 % ) ; E s c h e r i c h i a c o l i ( 1 6 % ) , P r o t e u s s p p . ( 1 2 % ) , E n t e r o b a c t e r s p p . ( 8 % ) a n d A e r o m o n a s h y d r o p h i l a ( 4 % ) . T h e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o f t h e i s o l a t e s r e v e a l e d t h a t r e s i s t a n c e t o e l e v e n o f t h e t w e l v e a n t i b i o t i c t e s t e d w e r e a b o v e 5 0 % . S t r e p t o m y c i n ( 4 4 % ) w a s t h e o n l y a n t i b i o t i c w i t h r e s i s t a n c e r a t e b e l o w t h i s r a n g e . R e s i s t a n c e t o A u g m e n t i n w a s t h e h i g h e s t ( 9 6 % ) , f o l l o w e d b y C o t r i m o x a z o l e ( 9 2 % ) a n d N i t r o f u r a n t o i n ( 8 8 % ) . T h e r e s u l t s s u g g e s t t h e n e e d f o r i n t e n s i v e s u r v e i l l a n c e o f i s o l a t e s t h r o u g h o u t s a l a d p r o d u c t i o n c o n t i n u u m t o p r e v e n t f o o d - b o r n e i n f e c t i o n s a n d a l s o t o d e t e c t e m e r g i n g a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e p h e n o t y p e s . 1 3 6 - 1 4 2 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 2 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : A d e b a y o E A , M a j o l a g b e O N , O l a I O a n d O g u n d i r a n M A . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f P u r e a n d A p p l i e d B i o l o g y , L a d o k e A k i n t o l a U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y , P . M . B . 4 0 0 0 , O g b o m o s o , O y o S t a t e , N i g e r i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : A d e b a y o E A . E m a i l : b r o g o k e 2 0 0 3 @ y a h o o . c o m ; o l u s o l a n a t @ y a h o o . c o m ; o l a i y a b o @ y a h o o . c o m ; P h o n e N o : + 2 3 4 8 0 3 8 0 9 9 0 9 2 . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 3 7 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 9 M a y 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 1 J u n 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 2 4 F e b 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : A d e b a y o E A , M a j o l a g b e O N , O l a I O a n d O g u n d i r a n M A . A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o f i s o l a t e d b a c t e r i a l f r o m s a l a d s J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h

I N T R O D U C T I O N S a l a d i s a t e r m b r o a d l y a p p l i e d t o m a n y f o o d p r e p a r a t i o n s t h a t h a v e a m i x t u r e o f c h o p p e d o r s l i c e d i n g r e d i e n t s w h i c h m a y b e m a i n l y f r u i t s o r v e g e t a b l e s ( U z e h e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e i n n e r t i s s u e s o f h e a l t h y p l a n t s a n d a n i m a l s a r e f r e e o f m i c r o - o r g a n i s m s . H o w e v e r , t h e s u r f a c e s o f r a w v e g e t a b l e s a n d m e a t s a r e c o n t a m i n a t e d w i t h a v a r i e t y o f m i c r o - o r g a n i s m s a n d t h i s d e p e n d s o n t h e m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f t h e e n v i r o n m e n t f r o m w h i c h t h e f o o d w a s t a k e n , t h e c o n d i t i o n o f t h e r a w p r o d u c t , t h e m e t h o d o f h a n d l i n g , t h e t i m e a n d c o n d i t i o n s o f s t o r a g e ( P e l c z e r e t a l . , 2 0 0 6 ) . T h e i n c r e a s i n g a v a i l a b i l i t y o f p r e p a r e d v e g e t a b l e s a l a d s r e f l e c t s c o n s u m e r s d e m a n d f o r f r e s h , h e a l t h y , c o n v e n i e n t a n d a d d i t i v e f r e e f o o d s t h a t s h o u l d b e s a f e a n d n u t r i t i o u s . T h e s u r v i v a l o f f o o d b o r n e p a t h o g e n s i s s l i g h t l y e n h a n c e d o n c e t h e p r o t e c t i v e e p i d e r m a l b a r r i e r h a s b e e n b r o k e n e i t h e r b y p h y s i c a l d a m a g e o r d e g r a d a t i o n b y p l a n t p a t h o g e n s . T h e s e p u n c t u r e s c a n a l s o p r o m o t e t h e m u l t i p l i c a t i o n o f p a t h o g e n s e s p e c i a l l y a t n o n - r e f r i g e r a t e d t e m p e r a t u r e s ( U d o e t a l . , 2 0 0 9 ) . D u r i n g s a l a d p r e p a r a t i o n , r a w v e g e t a b l e s a r e i n j u r e d t h r o u g h p e e l i n g , s l i c i n g o r s h r e d d i n g ( B e u c h a r t , 2 0 0 2 ) . T h e s e o p e r a t i o n s c a n t r a n s f e r p a t h o g e n i c m i c r o - o r g a n i s m s i f p r e s e n t o n t h e s u r f a c e o f f r e s h f r u i t s a n d v e g e t a b l e s i n t o t h e p r o d u c t . M o s t p a t h o g e n s i n s a l a d d o n o t c a u s e p r o d u c t s p o i l a g e , e v e n a t r e l a t i v e l y h i g h p o p u l a t i o n s . I n a b s e n c e o f s p o i l a g e s i g n s , s a l a d s a r e c o n s u m e d b e c a u s e t h e y a r e p e r c e i v e d a s s a f e . T h e p r e v a l e n c e o f a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e a m o n g f o o d - b o r n e p a t h o g e n s h a s i n c r e a s e d d u r i n g r e c e n t d e c a d e s ( C h i u e t a l . , 2 0 0 2 ; T h r e l f a l l e t a l . , 2 0 0 0 ) , p o s s i b l y a s a r e s u l t o f s e l e c t i o n p r e s s u r e c r e a t e d b y t h e u s e o f a n t i m i c r o b i a l s o f f o o d - p r o d u c i n g a n i m a l s ( A n g u l o e t a l . , 2 0 0 0 ; B y w a t e r , 2 0 0 4 ; T e u b e r , 2 0 0 1 ) . T h e c o - e x i s t e n c e o f r e s i s t a n c e g e n e s w i t h m o b i l e e l e m e n t s s u c h a s p l a s m i d s , t r a n s p o s o n s , a n d i n t e g r o n s f a c i l i t a t e s t h e r a p i d s p r e a d o f a n t i b i o t i c s r e s i s t a n c e g e n e s a m o n g b a c t e r i a ( S u n d e a n d N o r d s t r o m , 2 0 0 6 ) . S e v e r a l i n v e s t i g a t i o n h a v e b e e n c a r r i e d o u t o n t h e m i c r o b i a l q u a l i t y o f r e a d y t o - e a t - f o o d , a n d a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e o f s o u r c e h u m a n b a c t e r i a l i s o l a t e s s u c h a s S a l m o n e l l a s p e c i e s ( A n h e t a l . , 2 0 0 1 ; E h a r a e t a l . , 2 0 0 4 ; N g u y e n e t a l . , 2 0 0 5 ) . H o w e v e r , t h e a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n t p a t t e r n s o f s a l a d i s o l a t e d p a t h o g e n i c o r g a n i s m s h a v e n o t b e e n s t u d i e d e x t e n s i v e l y . T h i s s t u d y w a s t h e r e f o r e c a r r i e d o u t t o e x a m i n e a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e p a t t e r n o f s a l a d i s o l a t e d p a t h o g e n i c o r g a n i s m s . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S S a m p l e s C o l l e c t i o n T h e r e a d y - t o - e a t s a l a d s w e r e p u r c h a s e d i n a h i g h l y r e s p e c t e d f a s t f o o d i n d u s t r y f r o m f i v e d i f f e r e n t t o w n s o f N i g e r i a , ( O g b o m o s o , A d o - E k i t i , I l o r i n , I b a d a n a n d L a g o s ) . T h e s a m e w e r e p u r c h a s e d i n a s e a l e d c o n t a i n e r b r o u g h t t o t h e L a b o r a t o r y f o r m i c r o b i a l a n a l y s i s . I s o l a t i o n o f o r g a n i s m s F r o m e a c h s a l a d s a m p l e , 1 0 g w a s a s e p t i c a l l y w e i g h e d a n d s o a k e d i n 5 0 m l s o f s t e r i l e w a t e r f o r 3 0 m i n s . S e r i a l d i l u t i o n w a s c a r r i e d o u t a n d o r g a n i s m s w e r e p l a t e d o u t o n n u t r i e n t a g a r p l a t e s u s i n g p o u r p l a t e m e t h o d . T h e c u l t u r e s w e r e i n c u b a t e d a t 3 7 O C f o r 2 4 h r s . A f t e r t h e i n c u b a t i o n , t h e p u r e c u l t u r e s o f t h e i s o l a t e s w e r e o b t a i n e d b y s u b s e q u e n t s u b - c u l t u r i n g o n f r e s h a g a r p l a t e s . I d e n t i f i c a t i o n o f I s o l a t e s T h e c h a r a c t e r i z a t i o n o f i s o l a t e d o r g a n i s m s w a s d o n e b a s e d o n c u l t u r a l , m o r p h o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l s t a n d a r d m e t h o d s ( B u c h a n a n a n d G i b b o n s , 1 9 7 4 ) . A n t i b i o t i c S u s c e p t i b i l i t y T e s t i n g S u s c e p t i b i l i t y o f e a c h i s o l a t e t o a p a n e l o f t w e l v e a n t i m i c r o b i a l s u b s t a n c e s w a s a s s e s s e d b y d i s k d i f f u s i o n o n M u e l l e r - H i n t o n a g a r P l a t e s , a c c o r d i n g t o t h e C l i n i c a l a n d L a b o r a t o r y S t a n d a r d s I n s t i t u t e g u i d e l i n e s . ( C L S I , 2 0 0 7 ) . T h e f o l l o w i n g a n t i m i c r o b i a l s w e r e t e s t e d : A u g m e n t i n , A U G , ( 3 0 µ g ) , c e f t r i a z o n e , C E F ( 3 0 µ g ) , N i t r o f u r a n t o i n , N I T , ( 2 0 µ g ) , G e n t a m i c i n , G E N ( 1 0 µ g ) , C o t r i m o x a z o l e , C O T ( 2 5 µ g ) , C i p r o f l o x a c i n , C I P ( 1 0 µ g ) , T e t r a c y c l i n e , T E T ( 3 0 µ g ) , E r y t h r o m y c i n , E R Y ( 5 µ g ) S t r e p t o m y c i n , S T R ( 1 0 µ g ) , a n d C h l o r a m p h e n i c o l , C L O ( 3 0 µ g ) . A f t e r 1 8 h i n c u b a t i o n a t 3 7 O C , t h e s i z e o f t h e z o n e o f i n h i b i t i o n w a s m e a s u r e d a n d i n t e r p r e t e d b y c o m p a r i n g w i t h t h e s t a n d a r d a n t i b i o t i c s e n s i t i v i t y c h a r t t o d e t e r m i n e t h e i r r e s i s t a n c e p a t t e r n s . R E S U L T S A t o t a l n u m b e r o f 2 5 b a c t e r i a i s o l a t e s b e l o n g i n g t o s i x g e n e r a w e r e i d e n t i f i e d u s i n g b i o c h e m i c a l t e s t s f o r i d e n t i f i c a t i o n a s s h o w n i n T a b l e 1 . T h e d i s t r i b u t i o n o f t h e b a c t e r i a l i s o l a t e s i n t h e s a l a d i s p r e s e n t e d i n T a b l e 2 , w i t h h i g h o c c u r r e n c e o b t a i n e d i n P s e u d o m o n a s s p e c i e s 9 ( 3 6 % ) , f o l l o w e d b y B a c i l l u s s p e c i e s 6 ( 2 4 % ) , E . c o l i 4 ( 1 6 % ) , E n t e r o b a c t e r s p p . 2 ( 8 % ) a n d A e r o m o n a s h y d r o p h i l a 1 ( 4 % ) , w i t h t h e l o w e s t o c c u r r e n c e . T a b l e 3 p r e s e n t s t h e n u m b e r o f a n t i b i o t i c s t o w h i c h r e s i s t a n c e w a s d e m o n s t r a t e d . T w e n t y f o u r i s o l a t e s , w h i c h i s t h e h i g h e s t 2 4 ( 9 6 % ) w e r e 1 3 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 1 3 8 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2 C O D E C i t r a t e U n l i s a t i o n M o t i l i t y I n d o l e T e s t G l u c o s e F r u c o s e M a l t o s e L a c t o s e S u c r o s e G a l a c t o s e X y l o s e A r a b R a f f R h a m D u l c M a n n P r o b a b l e I d e n t i t y 1 - + + + - + + + + - + - + - B a c i l l u s a l v e i 2 + + - + - + + + + - - - - + + P s e u d o m o n a s p u t i d a 3 - + + + + + + D + D - - D D + E s c h e r i c h i a c o l i 4 + + - + - + + + + - + - - + + P s e u d o m o n a s p u t i d a 5 + + - + - + + + + - - - - D + P s e u d o m o n a s p u t i d a 6 + + - + - - - + D + - + + - + P s e u d o m o n a s f l o r e s c e n s 7 + + - + - - - + D + - + + - + E s c h e r i c h i a c o l i 8 - + + + + + + D + D - - D D + p r o t e u s m i r a b i l i s 9 + + - + + + + + + - + - - + + A e r o n o n a s h y d r o p h i l a 1 0 + + - + - - - + + + - - - - - P r o t e u s v u l g a r i s 1 1 - + + + + + + D D + - D - - + P r o t e u s v u l g a r i s 1 2 + + + + + + - + + + - - - - - E u t e r o b a c t e r a e r o g e n e s 1 3 + + + + + + - + + + - - - - - P s e u d o m o n a s p u t i d a 1 4 + + - + + + + + + + - D + + D B a c i l l u s c e r e u s 1 5 + + - + + + + + + - + - + + + B a c i l l u s a l v e i 1 6 + + - + + + + - + - - - + D - B a c i l l u s c e r e u s 1 7 - + + + + + + + + - - - + + - B a c c i l u s a l v e i 1 8 D + - + + + + - + - - + D - B a c i l l u s c e r e u s 1 9 - + + + + + + d + D + D D + E s c h e r i c h i a T a b l e 1 : B i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e i s o l a t e s K e y s : + = a p o s i t i v e r e a c t i o n - = a n e g a t i v e r e a c t i o n D = a d e l a y e d r e a c t i o n

r e s i s t a n t t o A u g m e t i n , 2 3 ( 9 2 % ) t o C o t r i m o x a z o l e , 2 2 ( 8 8 % ) t o N i t r o f u r a n t o i n , 2 0 ( 8 0 % ) t o G e n t a m i c i n , A m o x i c i l l i n a n d C i p r o f l o x a c i n r e s p e c t i v e l y , 1 9 ( 7 6 % ) t o C h l o r a m p h e n i c o l , 1 8 ( 7 2 % ) t o T e t r a c y l i n e a n d E r y t h r o m y c i n , 1 7 ( 6 8 % ) t o C e f t r i a z o n e a n d O f l o x a c i n , a n d t h e l e a s t 1 1 ( 4 4 % ) t o S t r e p t o m y c i n . T a b l e 4 s h o w t h e d i f f e r e n t r e s i s t a n c e p a t t e r n o b s e r v e d i n t h e i s o l a t e d o r g a n i s m s , w i t h t h e h i g h e s t n u m b e r s o b t a i n e d a t B a c i l l u s S p p . ( A U G , N I T , C U T , C I P , T E T , E R Y , C H L ) . D I S C U S S I O N T h e r e i s a n e e d f o r c o n t i n u e d s u r v e i l l a n c e o f e m e r g i n g a n t i - m i c r o b i a l r e s i s t a n t o r g a n i s m s i s o l a t e d f r o m r e a d y - t o - e a t f o o d s a m p l e s , m o s t e s p e c i a l l y f a s t f o o d s . T h i s i s b e c a u s e t h e r e i s s t e a d i l y a c c r u i n g e v i d e n c e f r o m a r o u n d t h e w o r l d , w h i c h i n d i c a t e f o o d a s a p o t e n t i a l s o u r c e o f a n t i m i c r o b i a l - r e s i s t a n t o r g a n i s m s ( S c h o e d e r e t a l . , 2 0 0 4 ) . T h e r e s u l t s f r o m t h i s s t u d y r e v e a l e d t h a t v a r i o u s s a l a d s a m p l e s g e t c o n t a m i n a t e d w i t h b a c t e r i a , w h i c h c a n b e h i g h l y p a t h o g e n i c t o h u m a n . I n t h e s t u d y , P s e u d o m o n s s p p . w a s t h e m o s t c o m m o n b a c t e r i a l i s o l a t e w i t h a n o c c u r r e n c e o f 3 6 % . P s e u d o m o n a s s p p . w h e n f o u n d i n f o o d s a m p l e s i n d i c a t e i n e f f e c t i v e m e t h o d s o f s t e r i l i z a t i o n u s e d d u r i n g f o o d p r o c e s s i n g . S i n c e P s e u d o m o n a s s p p . i s a p r o m i n e n t i n h a b i t a n t o f s o i l a n d w a t e r , w h i c h c a n b e r e s p o n s i b l e f o r d i s e a s e s o f v e g e t a b l e s l i k e a n g u l a r l e a f s p o t o f c u c u m b e r a n d h a v e s i g n i f i c a n c e h e a l t h i m p o r t a n c e t o h u m a n b e i n g s ( U z e h e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e o r g a n i s m s i s o l a t e d i n t h i s s t u d y a r e p o t e n t i a l p a t h o g e n s , s u c h a s P s e u d o m o n a s s p p . , B a c i l l u s s p p . , E . c o l i a n d p r o t e u s s p p . w h i c h p a r t l y i n a g r e e m e n t w i t h t h e r e p o r t o f T o n y a n d Q u e - K i n g ( 2 0 0 3 ) i n T a i w a n . T h e h i g h p e r c e n t a g e o f E . c o l i ( 1 6 % ) i s o l a t e d i s a t h r e a t t o s a l a d l o v e r s . E . c o l i i n f e c t i o n w i t h l e t t u c e a n d e n t e r o t o x i g e n i c E . c o l i w i t h c a r r o t s h a s b e e n e s t a b l i s h e d i n l i t e r a t u r e ( U d o e t a l . , 2 0 0 9 ) . E . c o l i w h e n f o u n d i n w a t e r a n d f o o d s u p p l i e s , i s a n i n d i c a t i v e o f a r e c e n t f a e c a l c o n t a m i n a t i o n a n d i s a t h r e a t t o p u b l i c ( M o r a e t a l . , 2 0 0 5 ) . I t s p r e s e n c e i s a m a j o r h e a l t h c o n c e r n , 1 3 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2 I s o l a t e s I d e n t i f i e d P r e v a l e n c e B a c i l l u s s p p . P s e u d o m o n a s s p p . E . c o l i P r o t e u s s p p . E n t e r o b a c t e r s p p . A e r o m o n a s h y d r o h i l a 6 ( 2 4 % ) 9 ( 3 6 % ) 4 ( 1 6 % ) 3 ( 1 2 % ) 2 ( 8 % ) 1 ( 4 % ) T a b l e 2 : D i s t r i b u t i o n a n d P r o p o r t i o n o f b a c t e r i a l c o n t a m i n a n t s i n s a l a d . I s o l a t e s i d e n t i f i e d T o t a l n u m b e r T o t a l n u m b e r p e r c e n t a g e r e s i s t a n c e e x h i b i t e d t o a n t i b i o t i c s A u g C E F N I T G E N C O T O F L A M X C I P T E T E R Y S T R C L O P s e u d o m o n a s s p p . 9 8 ( 8 9 % ) 6 ( 6 7 % ) 8 ( 8 9 % ) 8 ( 8 9 % ) 9 ( 1 0 0 % ) 7 ( 7 9 % ) 7 ( 7 9 % ) 5 ( 5 6 % ) 6 ( 6 7 % ) 8 ( 8 9 % ) 6 ( 6 7 % ) 5 ( 5 6 % ) B a c i l l u s s p p . 6 6 ( 1 0 0 % ) 5 ( 8 5 % ) 6 ( 1 0 0 % ) 5 ( 8 3 % ) 6 ( 1 0 0 % ) 3 ( 5 0 % ) 5 ( 8 3 % ) 6 ( 1 0 0 % ) 6 ( 1 0 0 % ) 5 ( 8 3 % ) 4 ( 6 7 % ) 5 ( 8 3 % ) E . c o l i 4 4 ( 1 0 0 % ) 3 ( 7 5 % ) 4 ( 1 0 0 % ) 3 ( 7 5 % ) 3 ( 7 5 % ) 2 ( 5 0 % ) 4 ( 1 0 0 % ) 4 ( 1 0 0 % ) 3 ( 7 5 % ) 3 ( 7 5 % ) 2 ( 5 0 % ) 4 ( 1 0 0 % ) P r o t e u s s p p . 3 3 ( 1 0 0 % ) 2 ( 6 7 % ) 2 ( 6 7 % ) 2 ( 6 7 % ) 2 ( 6 7 % ) 3 ( 1 0 0 % ) 2 ( 6 7 % ) 2 ( 6 7 % ) 1 ( 3 3 % ) 1 ( 3 3 % ) 0 3 ( 1 0 0 % ) A e r o m o n a s h y d r o p h i l a 1 1 ( 1 0 0 % ) 1 ( 1 0 0 % ) 1 ( 1 0 0 % ) 1 ( 1 0 0 % ) 1 ( 1 0 0 % ) 0 1 ( 1 0 0 % ) 1 ( 1 0 0 % ) 0 0 1 ( 1 0 0 % ) 0 E n t e r o b a c t e r s p p 2 2 ( 1 0 0 % ) 0 1 ( 5 0 % ) 1 ( 5 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) 1 ( 5 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) 1 ( 5 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) 2 ( 1 0 0 % ) T o t a l . 2 5 2 4 ( 9 6 % ) 1 7 ( 6 8 % ) 2 2 ( 8 8 % ) 2 0 ( 8 0 % ) 2 3 ( 9 2 % ) 1 7 ( 6 8 % ) 2 0 ( 8 0 % ) 2 0 ( 8 0 % ) 1 8 ( 7 2 % ) 1 8 ( 7 2 % ) 1 1 ( 4 4 % ) 1 9 ( 7 6 % ) T a b l e 3 : D i s t r i b u t i o n a n d p r o p o r t i o n o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e a m o n g b a c t e r i a l i s o l a t e s A U G : A u g m e t i n ( 3 0 µ g ) , C E F . ( C e f t r i a z o n e ( 3 0 µ g ) , N I T : N i t r o f u r a n t o i n G E N : G e n t a m i c i n ( 1 0 µ g ) , C O T : C o t r i m o x a z o l e ( 2 5 µ g ) , O F L : O f l o x a c i n ( 5 µ g ) , A M X : A m o x y c i l l i n ( 2 5 µ g ) , C I P : c i p r o f l o x a c i n ( 1 0 µ g ) , T E T : T e t r a c y l i n e ( 3 0 µ g ) , E R Y : E r y t h r o m y c i n ( 5 µ g ) , S T R : S t r e p t o m y c i n ( 1 0 µ g ) , C L O : C h l o r a m p h e n i c o l ( 3 0 µ g ) .

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 1 4 0 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2 I s o l a t e s N o o f i s o l a t e s t h a t d e m o n s t r a t e d r e s i s t a n c e A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o b s e r v e d N o o f A n t i b i o t i c t o w h i c h r e s i s t a n c e w a s s h o w n P s e u d o m o n a s s p p . 1 A U G , C E F , N I T , G E N , C O T , A M X , C I P , T E T 8 2 A U G , N I T G E N , C O T , O F L C I P , E R Y , S T R , C H L 9 1 C E F , N I T , G E N , C U T , O F L , A M X , T E T , E R Y , C H L 9 2 A U G , C E F , N I T , C O T , O F L , A M X , C I P , T E T E , E R Y , S T R . 1 0 2 A U G , C E F , N I T , C O T L F L , A M X , T E T , E R Y , 8 1 A U G , N I T , G E N , C O T , O F L , C I P , T E T , E R Y 8 B a c i l l u s s p p . 2 A U G , C E F , N I T , G E N , C O T , A M X , C I P , T E T , S T R , 9 3 A U G , N I T C O T C I P , T E T , E R Y , C H L , 7 1 A U G , C E F , N I T , G E N , C O T , O F L , A M X , C I P , T E T , E R Y , S T R , C H L 1 2 E . c o l i 1 A U G , C E F , N I T , G E N , C O T , A M X , C I P , T E T , E R Y , C H L , 1 0 1 A U G , N I T , G E N , C O T , A M X , C I P , T E T , C H L , 8 1 A U G , C E F , I I T , G E N , O F L , A M X , C I P , E R Y , C H L 9 1 A U G , C E F , N I T , C O T , O F L , A M X , C I P , T E T , E R Y , S T R 1 0 P r o t e u s s p p 1 A U G , C E F , N I T , G E N , O F L , A M X 6 1 A U G , C O T , O F L , C I P , T E T , E R Y , S T R 7 1 A U G , C E F , N I T , G E N , C O T , A M X , C I P , T E T , E R Y , C H L 1 0 A e r o m o n a s h y d r o p h i l a 1 A U G , C E F , N I T , A M X , 4 E n t e r o b a c t e r s p p . 1 A U G , C E F , N I T , A M X , C H L 5 1 A U G , C O T , O F L , A M X , C I P , T E T , E R Y , S T R 8 T a b l e 4 : A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n s i n i s o l a t e s i d e n t i f i e d

e s p e c i a l l y i n c a s e s o f v e r o t o x i n p r o d u c i n g E . c o l i ( V T E C ) s e r o g r o u p 0 1 5 7 , a m a j o r c a u s e o f h a e m o r r h a g i c c o l i t i s . F a e c a l c o n t a m i n a t i o n o f f o o d c a n n o t b e p r e v e n t e d e n t i r e l y , p a r t i c u l a r l y i n t h i s s e t t i n g w h e r e h y g i e n i c s t a n d a r d o f f o o d p r o d u c t i o n i s l o w a n d n o t m o n i t o r e d . S u c h o r g a n i s m s w i l l c o n t i n u e t o b e a n i n h a b i t a n t o f f o o d f o r t h e f o r e s e e a b l e f u t u r e a t l e a s t i n t h i s p a r t o f t h e w o r l d ( O l u y e g e e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e h i g h i n c i d e n c e o f b a c t e r i a l c o n t a m i n a t i o n o f r e a d y t o e a t s a l a d s r e p o r t e d i n t h i s s t u d y m a y b e a c c o u n t e d f o r l a c k o f b a s i c s a n i t a t i o n r e q u i r e m e n t s f o r p r o c e s s i n g p r o d u c t s t h a t r e q u i r e s n o p r e - h e a t i n g b e f o r e c o n s u m p t i o n . A n o t h e r r e a s o n m a y b e u s i n g a l o w q u a l i t y o f w a t e r d u r i n g w a s h i n g a n d p r e - d i s i n f e c t i o n o f t h e f r e s h v e g e t a b l e s a n d f r u i t s d u r i n g s a l a d s p r o d u c t i o n ( U d o e t a l . , 2 0 0 9 ) . T h e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n d e m o n s t r a t e d b y t h e b a c t e r i a l i s o l a t e s i n t h i s s t u d y r e v e a l e d t h a t r e s i s t a n c e w a s h i g h e s t i n a l l t e s t e d a n t i b i o t i c e x c e p t S t r e p t o m y c i n ( 4 4 % ) . T h e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n o b t a i n e d i n t h i s s t u d y i s a s e r i o u s c h a l l e n g e t o p u b l i c h e a l t h b e c a u s e o f t h e h i g h e r d e m a n d i n g f o r s a l a d s i n d i f f e r e n t h o m e s , s o c i e t i e s a n d f u n c t i o n s . I n r e c e n t y e a r s , t h e n u m b e r o f d o c u m e n t e d o u t b r e a k s o f h u m a n i n f e c t i o n s a s s o c i a t e d w i t h t h e c o n s u m p t i o n o f r a w v e g e t a b l e s h a s g r e a t l y i n c r e a s e d ( C F S , 2 0 0 6 ) . T h e r e s i s t a n t a b i l i t y o f t h e o r g a n i s m s c a n b e t r a n s f e r r e d f r o m o n e o r g a n i s m i n t o a n o t h e r , t h r o u g h t h e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p l a s m i d s ( O l s e n e t a l . , 2 0 0 3 ) . E p i d e m i o l o g i c a l d a t a f r o m H u a n g e t a l ( 2 0 0 1 ) s u g g e s t s t h a t h u m a n s b e c o m e c o l o n i z e d w i t h a n t i m i c r o b i a l - r e s i s t a n t E . c o l i f r o m f o o d c o n s u m p t i o n . U p o n c o l o n i z a t i o n , t h e s e o r g a n i s m s m a y t r a n s f e r a n t i m i c r o b i a l d e t e r m i n a n t s t o o t h e r b a c t e r i a i n c l u d i n g p o t e n t i a l p a t h o g e n s i n t h e i n t e s t i n a l f l o r a o f m a n ( M i z a n e t a l . , 2 0 0 2 ) . Y e a r s a g o , o r g a n i s m s r e s i s t a n t t o m u l t i p l e d r u g s w e r e f o u n d m o s t l y i n h o s p i t a l s , w h e r e a n t i m i c r o b i a l a g e n t s w e r e u s e d m o s t e x t e n s i v e l y , b u t r e s i s t a n c e i s c u r r e n t l y f o u n d a l m o s t a s f r e q u e n t l y i n t h e c o m m u n i t y . T h e s t u d y d e m o n s t r a t e d t h e o c c u r r e n c e o f m u l t i p l e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e s a m o n g b a c t e r i a l i s o l a t e s i n a r e - k n o w n f a s t f o o d i n d u s t r y i n N i g e r i a . T h i s s t u d y t h e r e f o r e e m p h a s i z e s t h e n e e d f o r g o o d h y g i e n i c p r a c t i c e s , p r o p e r h a n d l i n g , s t o r a g e a n d r e t a i l o f s a l a d s i n a s a n i t i z e d e n v i r o n m e n t . A l s o , t h e r e i s a n e e d f o r i n t e n s i v e s u r v e i l l a n c e o f i s o l a t e s t h r o u g h o u t t h e f o o d p r o d u c t i o n c o n t i n u u m t o d e t e c t e m e r g i n g a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e p h e n o t y p e s i n d e v e l o p i n g c o u n t r i e s l i k e N i g e r i a . R E F E R E N C E S A n g u l o F J , J o h n s o n K R , T a n x e R V a n d C o h e n M L . 2 0 0 0 . O r i g i n s a n d c o n s e q u e n c i e s o f a n t i m i c r o b i a l - r e s i s t a n t n o n t y p h o i d a l S a l m o n e l l a ; i m p l i c a t i o n s f o r t h e o f f l u o r o q u i n o l o n e s i n f o o d a n i m a l s . M i c r o b . D r u g R e s i s t . , 6 : 7 7 - 8 3 . A n h N T , C a m P D a n d D a l s g a a r d A . 2 0 0 1 . A n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e o f S h i g e l l a s p p . i s o l a t e d f r o m d i a r r h e a l p a t i e n t s b e t w e e n 1 9 8 9 a n d 1 9 9 8 i n V i e t n a m . S o u t h e a s t A s i a J . T r o p . M e d . P u b l i c H e a l t h 3 2 : 8 5 6 - 8 6 2 . B e u c h a t L R . 1 9 9 6 . P a t h o g e n i c M i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h f r e s h p r o d u c e . F o o d P r o t . , 5 9 : 2 0 4 - 2 1 6 . B u c h a n a n R E a n d G i b b o n s N E . 1 9 7 4 . B e r g e y s M a n u a l o f D e t e r m i n a t i v e M i c r o b i o l o g y , 8 t h e d i t i o n . T h e W i l l i a m s a n d W i l k i n s C o , B a l t i m o r e . B y w a t e r R J . 2 0 0 4 . V e t e r i n a r y u s e o f a n t i m i c r o b i a l s a n d e m e r g e n c e o f r e s i s t a n c e i n z o o n o t i c a n d s e n t i n e l b a c t e r i a i n t h e E v . J . V e t . M e d . B . , 5 1 : 3 6 1 - 3 6 3 . C h i u C H , W U T L , S U H , C h u C , C h i a J H , K u o A J , C h i e n M S a n d L i n T Y . 2 0 0 2 . T h e e m e r g e n c e i n T a i w a n o f f l o u r o q u i n o l o n e r e s i s t a n c e i n S a l m o n e l l a e n t e r i c a s e r o t y p e c h o l e r a e s u i s . N . E n g l . J . M e d . 3 4 6 : 4 1 3 - 4 1 9 . C F S . 2 0 0 6 . M i c r o b i o l o g i c a l G u i l d e l i n e s f o r R e a d y - t o - e a t f o o d s . C e n t e r f o r F o o d s a f e t y . F o o d a n d E n v i r o n m e n t a l H y g i e n e D e p a r t m e n t R e p o r t . 9 : 1 - 5 . C L S I . 2 0 0 7 . P e r f o r m a n c e S t a n d a r d s f o r A n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y T e s t i n g : 1 7 t h i n f o r m a t i o n a l s u p p l e m e n t , M 1 0 0 - S 1 7 ; 2 7 ( 1 ) , C l i n i c a l a n d L a b o r a t o r y s t a n d a r d I n s t i t u t e , W a y n e , P a , U S A . E h a r a M , N g u y e n B M , N g u y e n D T , T o m a C , H i g a N a n d I w a n a g a M . 2 0 0 4 . D r u g s u s c e p t i b i l i t y a n d i t s g e n e t i c b a s i s i n e p i d e m i c V i b r i o c h o l e r a e O 1 i n v i e t n a m . E p i d e m i o l . I n f e c t . 1 3 2 : 5 9 5 - 6 0 0 . H u a n g D B , J i a n g Z D , E r i c s s o n C D , A d a c h i J , D u p o n t H L . 2 0 0 1 . E m e r g e n c e o f t r i m e t h o p r i u m - r e s i s t a n t E . c o l i i n h e a l t h y p e r s o n s i n t h e a b s e n c e o f p r o p h y l a c t i c o r t h e r a p e u t i c a n t i b i o t i c s d u r i n g t r a v e l t o G u a d a l a j a r a , M e x i c o , S c a n d . J . I n f e c t . D i s . , 3 3 : 8 1 2 - 8 1 4 . 1 4 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2

M i z a n S , L e e M D , H a r m o n B G , T k a l c i c S , M a u r e r J J . 2 0 0 2 . A c q u i s i t i o n o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p l a m i d s b y E n t e r o h a e m o r r h a g i c E . c o l i 0 1 5 7 H a n d w i t h i n r u m e n f l u i d . J . F o o d P r o t . 6 5 : 1 0 3 8 - 1 0 4 0 . M o r a A , B l a n c o J E , G o n z a l e z E A , B e r n a r d e s M L a n d B l a n c o J . 2 0 0 5 . A n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n t o f S h i g a t o x i n ( v e r o t o x i n ) p r o d u c i n g E . c o l i 0 1 5 7 : H 7 a n d n o n - 0 1 5 7 s t r a i n s i s o l a t e d f r o m h u m a n s , c a t t l e s , s h e e p a n d f o o d i n S p a i n . R e s . M i c r o b i o 3 : 1 - 1 4 . N g u y e n T V , L e P V L e C H a n d W e i n t r a u b A . 2 0 0 5 . A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e i n d i a r r h e a g e n i c E . c o l i a n d S h i g e l l a s t r a i n s i s o l a t e d f r o m c h i l d r e n i n H a n o i , V i e t n a m . A n t i m i c r o b . A g e n t s c h e m o t h e r . , 4 9 : 8 1 6 - 8 1 9 . O l s o n J R , A l e x S Y , H e i d i M S . 2 0 0 3 . A n a u t o m a t e d s u b m e r s i b l e f l o w c y t o m e t e r f o r a n a l y s i n g p i c o a n d n a n o p h y t o p l a n k t o n : F l o w c y t o b o t . D e e p - s e a . R e s e a r c h 1 ( 5 0 ) : 3 0 1 - 3 1 5 . O l u y e g e A O , D a d a A C , O j o A M a n d O l u w a d a r e E . 2 0 0 9 . A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p r o f i l e o f b a c t e r i a l i s o l a t e s f r o m f o o d s o l d o n a U n i v e r s i t y c a m p u s i n S o u t h W e s t e r n N i g e r i a . A f r . J o u r n a l o f B i o t e c h 8 ( 2 1 ) : 5 8 8 3 - 5 8 8 7 . P e l c z a r M J C h a n E C a n d K r i e g N R . 2 0 0 6 . M i c r o b i o l o g y 5 t h E d i t i o n . T a t a M c G r a w - H i l l P u b l i s h i n g C o m p a n y L i m i t e d , N e w D e l h i . S c h o e d e r C M , W h i t e D G a n d M e n g J . 2 0 0 4 . R e t a i l m e a t a n d P o u l t r y a s a r e s e r v o i r o f a n t i m i c r o b i a l - r e s i s t a n t E . c o l i . F o o d M i c r o b i o l . , 2 1 : 2 4 4 - 2 5 5 . S u n d e a n d N o r d s t r o m M . 2 0 0 6 . T h e p r e v a l e n c e o f a s s o c i a t i o n s b e t w e e n a n d c o n j u g a l t r a n s f e r o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e g e n e s i n E . c o l i i s o l a t e d f r o m N o r w e g i a n m e a t a n d m e a t p r o d u c t s . J . A n t i m i c r o b . C h e - m o t h e r 5 8 : 7 4 1 - 7 4 7 . T e u b e r M . 2 0 0 1 . V e t e r i n a r y u s e a n d a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e . C u r r . O p i n , M i c r o b i o l . , 4 : 4 9 3 - 4 9 9 . T h r e l f a l l E J , W a r d L R , F r o s t J A a n d W i l l s h a w G A . 2 0 0 0 . T h e e m e r g e n c e a n d s p r e a d o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e i n f o o d - b o r n e b a c t e r i a . I n t . J . F o o d M i c r o b i o l . , 6 2 : 1 - 5 . T o n y J F a n d Q u e - K i n g W . 2 0 0 3 . M i c r o b i o l o g i c a l q u a l i t y o f r e a d y t o e a t s a l a d p r o d u c t s s o l d i n T a i w a n ; I n t e r n a t i o n a l J . o f F o o d M i c r o b i o . , 8 0 : 2 4 1 - 2 5 0 . U d o S , A n d y I , U m o A a n d E K P O M . 2 0 0 9 . P o t e n t i a l H u m a n p a t h o g e n s ( B a c t e r i a ) a n d t h e i r A n t i b i o g r a m i n R e a d y t o e a t s a l a d s s o l d i n C a l a b a r , S o u t h - S o u t h , N i g e r i a . T h e I n t e r n e t J o u r n a l o f T r o p i c a l M e d i c i n e 5 ( 2 ) . U z e h R E , A l a d e F A a n d B a n k o l e M . 2 0 0 9 . T h e m i c r o b i a l q u a n l i t y o f P r e - p a c k e d m i x e d v e g e t a b l e s a l a d i n s o m e r e t a i l o u t l e t s i n L a g o s , N i g e r i a . A f r i c a n J o u r n a l o f F o o d S c i e n c e 3 ( 9 ) : 2 7 0 - 2 7 2 . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 3 6 - 1 4 2 1 4 2 A d e b a y o e t a l . , 2 0 1 2 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t F i c u s p u b l i s h e r s . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g O p e n A c c e s s a n d Q u i c k s p r e a d i n g Y o u r e t a i n s y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m / s u b m i t 1 . a s p x .