J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n t i b a c t e r i a l e v a l u a t i o n a n d p h y t o c h e m i c a l a n a l y s i s o f c e r t a i n m e d i c i n a l p l a n t s , W e s t e r n G h a t s , C o i m b a t o r e K e y w o r d s : s o l v e n t s , m e d i c i n a l p l a n t s , m i c r o o r g a n i s m s , a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y , P h y t o c h e m i c a l s . A B S T R A C T : T h e a n t i b a c t e r i a l e f f e c t o f s o m e s e l e c t e d I n d i a n m e d i c i n a l p l a n t s w e r e e v a l u a t e d o n b a c t e r i a l s t r a i n s S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , P r o t e u s m i r a b i l i s , E s c h e r i c h i a c o l i , P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a , K l e b s i e l l a p n e u m o n i a a n d S a l m o n e l l a t y p h i . T h e s o l v e n t s u s e d f o r t h e e x t r a c t i o n o f p l a n t s w e r e p e t r o l e u m e t h e r , c h l o r o f o r m e t h a n o l a n d m e t h a n o l . T h e i n - v i t r o a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y w a s p e r f o r m e d b y d i s c d i f f u s i o n m e t h o d . T h e m o s t s u s c e p t i b l e g r a m p o s i t i v e b a c t e r i a w e r e S . a u r e u s w h i l e t h e m o s t s u s c e p t i b l e g r a m n e g a t i v e b a c t e r i a w e r e E . c o l i . T h e m o s t a c t i v e a n t i b a c t e r i a l p l a n t w a s P . m a x i m u m . T h e s i g n i f i c a n t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f a c t i v e e x t r a c t s w e r e c o m p a r e d w i t h t h e s t a n d a r d a n t i m i c r o b i a l s C i p r o f l o x a c i n ( 1 0 m c g / m l ) . T h e r e s u l t s o b t a i n e d i n t h e p r e s e n t s t u d y s u g g e s t t h a t P . m a x i m u m c a n b e u s e d i n t r e a t i n g d i s e a s e c a u s e d b y t h e t e s t o r g a n i s m s . 2 4 - 2 9 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 2 © F i c u s P r e s s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p r e s s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : D o s s A , P a r i v u g u n a V , V i j a y a s a n t h i M a n d S r u t h i S u r e n d r a n I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f M i c r o b i o l - o g y , R V S C o l l e g e o f A r t s a n d S c i e n c e , S u l u r , C o i m b a t o r e , T a m i l n d a u , S o u t h I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : D o s s A E m a i l : a n d r o d o s s @ g m a i l . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 0 8 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 2 8 A p r 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 9 A p r 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 0 3 M a y 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : D o s s A , P a r i v u g u n a V , V i j a y a s a n t h i M a n d S r u t h i S u r e n d r a n . A n t i b a c t e r i a l e v a l u a t i o n a n d p h y t o c h e m i c a l a n a l y s i s o f c e r t a i n m e d i c i n a l p l a n t s , W e s t e r n G h a t s , C o i m b a t o r e . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h p a p e r

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y I n t r o d u c t i o n A n t i m i c r o b i a l s o f p l a n t o r i g i n h a v e e n o r m o u s t h e r a p e u t i c p o t e n t i a l a n d h a v e b e e n u s e d s i n c e t i m e i m - m e m o r i a l . T h e y h a v e b e e n p r o v e d e f f e c t i v e i n t h e t r e a t m e n t o f i n f e c t i o u s d i s e a s e s s i m u l t a n e o u s l y m i t i g a t i n g m a n y o f t h e s i d e e f f e c t s w h i c h a r e o f t e n a s s o c i a t e d w i t h s y n t h e t i c a n t i b i o t i c s . P o s i t i v e r e s p o n s e o f p l a n t b a s e d d r u g s ( l e s s / n o s i d e e f f e c t s ) m i g h t l i e s i n t h e s t r u c t u r e o f t h e n a t u r a l p r o d u c t s w h i c h r e a c t s w i t h t o x i n s a n d / o r p a t h o g e n s i n s u c h a w a y t h a t l e s s h a r m i s d o n e t o o t h e r i m p o r t a n t m o l e c u l e s o r p h y s i o l o g y o f t h e h o s t . I t i s b e c a u s e o f t h i s r e a s o n t h a t d r u g d e s i g n i n g s t u d i e s n o w a d a y s h a v e c o m e u p , a s n e w f i e l d o f r e s e a r c h ( S h a r m a a n d K u m a r , 2 0 0 9 ) . C h r o m o l a e n a o d o r a t a ( L . ) K i n g & H . E . R o b i n s . C . o d o r a t a i s a b i g b u s h y h e r b w i t h l o n g r a m b l i n g ( b u t n o t t w i n i n g ) b r a n c h e s ; s t e m s t e r e t e , p u b e s c e n t ; l e a v e s o p p o s i t e , f l a c c i d - m e m b r a n o u s , v e l v e t y - p u b e s c e n t , d e l t o i d - o v a t e , a c u t e , t h r e e - n e r v e d , v e r y c o a r s e l y t o o t h e d , e a c h m a r g i n w i t h 1 - 5 t e e t h , o r e n t i r e i n y o u n g e s t l e a v e s ; b a s e o b t u s e o r s u b t r u n c a t e b u t s h o r t l y d e c u r r e n t ; p e t i o l e s l e n d e r , 1 - 1 . 5 c m l o n g ; b l a d e m o s t l y 5 - 1 2 c m l o n g , 3 - 6 c m w i d e , c a p i t u l a i n s u b - c o r y m b o s e a x i l l a r y a n d t e r m i n a l c l u s t e r s ; p e d u n c l e s 1 - 3 c m l o n g , b r a c t e a t e ; b r a c t s s l e n d e r , 1 0 - 1 2 m m l o n g ; i n v o l u c r e o f a b o u t 4 - 5 s e r i e s o f b r a c t s , p a l e w i t h g r e e n n e r v e s , a c u t e , t h e l o w e s t o n e s a b o u t 2 m m l o n g , u p p e r o n e s 8 - 9 m m l o n g , a l l a c u t e , d i s t a l l y c i l i a t e , f l a t , a p p r e s s e d e x c e p t t h e e x t r e m e d i v e r g e n t t i p ; f l o r e t s a l l a l i k e ( d i s c - f l o r e t s ) , p a l e p u r p l e t o d u l l o f f - w h i t e , t h e s t y l e s e x t e n d i n g a b o u t 4 m m b e y o n d t h e a p e x o f t h e i n v o l u c r e , s p r e a d i n g r a d i a t e l y ; r e c e p t a c l e v e r y n a r r o w ; f l o r e t s a b o u t 2 0 - 3 0 o r a f e w m o r e , 1 0 - 1 2 m m l o n g ; o v a r i a n p o r t i o n 4 m m l o n g ; c o r o l l a s l e n d e r t r u m p e t f o r m ; p a p p u s o f d u l l w h i t e h a i r s 5 m m l o n g ; a c h e n e s g l a b r o u s o r n e a r l y s o . T h e s e e d s o f S i a m w e e d a r e s m a l l ( 3 - 5 m m l o n g , ~ 1 m m w i d e , a n d w e i g h a b o u t 2 . 5 m g s e e d - 1 . C . o d o r a t a h a d t h e a n t i p y r e t i c , a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i - s p a s m o d i c p r o p e r t i e s . P a n i c u m m a x i m u m J a c q . A t u f t e d p e r e n n i a l , o f t e n w i t h a s h o r t l y c r e e p i n g r h i z o m e , v a r i a b l e 6 0 - 2 0 0 c m h i g h , l e a f - b l a d e s u p t o 3 5 m m w i d e t a p e r i n g t o f i n e p o i n t ; p a n i c l e 1 2 - 4 0 c m l o n g , o p e n s p i k e l e t s 3 - 3 . 5 m m l o n g , o b t u s e , m o s t l y p u r p l e r e d , g l u m e s u n e q u a l , t h e l o w e r o n e b e i n g o n e - t h i r d t o o n e - f o u r t h a s l o n g a s t h e s p i k e l e t , l o w e r f l o r e t u s u a l l y m a l e . U p p e r f l o r e t ( s e e d ) d i s t i n c t l y t r a n s v e r s e l y w r i n k l e d . E t h a n o l i c l e a f e x t r a c t o f P . m a x i m u m s h o w e d a n t i - d i a b e t i c a c t i v i t y . I t h a s a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t c l i n i c a l l y i m p o r t a n t m i c r o b i a l p a t h o g e n s . B a r l e r i a l u p u l i n a L i n d l . E r e c t s h r u b ; s t e m s a n d l e a v e s g l a b r o u s ; s p i n e s 3 i n l o w e r a x i l s , 2 d e f l e x e d c a 1 - 2 c m l o n g , 1 s h o r t e r a n d u p r i g h t . L e a v e s n a r r o w l y o b o v a t e , s p i n e - t i p p e d ; l a m i n a 3 . 5 - 9 c m l o n g , 0 . 8 - 1 . 2 c m w i d e ; p e t i o l e 2 - 3 m m l o n g . I n f l o r e s c e n c e a t e r m i n a l s p i k e w i t h o v e r l a p p i n g b r a c t s ; b r a c t s b r o a d l y o v a t e , 1 5 m m l o n g , s h o r t l y m u c r o n a t e , g r e e n w i t h p u r p l e u p p e r h a l f , v e r y s h o r t l y p u b e s c e n t a l l o v e r , c u p - s h a p e d - g l a n d u l a r a t b a s e ; b r a c t e o l e s l a n c e o l a t e , c a 5 . 5 m m l o n g , s p a r s e l y g l a n d u l a r . C a l y x s e g m e n t s s p i n e - t i p p e d , p u b e s c e n t , l a n c e o l a t e ; o u t e r 1 0 m m l o n g , i n n e r c a 8 m m l o n g . C o r o l l a y e l l o w , f i n e l y e g l a n d u l a r p u b e s c e n t o u t s i d e ; t u b e c a 3 c m l o n g ; l o b e s c a 1 c m l o n g . L o n g e r s t a m e n f i l a m e n t s c a 2 c m l o n g ; s h o r t e r s t a m e n s f e r t i l e . S t y l e c a 3 c m l o n g , g l a b r o u s . C a p s u l e n o t s e e n . L e a v e s a r e u s e d t o t r e a t s n a k e b i t e s , d o g b i t e s , s w e l l i n g d u e t o f a l l o r a s s a u l t b o i l s , b l e e d i n g w o u n d s a n d r h e u m a t i s m . T h e p r e s e n t s t u d y w a s u n d e r t a k e n t o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f a q u e o u s a n d o r g a n i c e x t r a c t s o f C h r o m o l a e n a o d o r a t a , P a n i c u m m a x i m u m a n d B a r l e r i a l u p u l i n a . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S P l a n t c o l l e c t i o n F r e s h p l a n t p a r t s o f B a r l e r i a l u p u l i n a , P a n i c u m m a x i m u m a n d C h r o m o l a e n a o d o r a t a w e r e c o l l e c t e d f r o m W e s t e r n G h a t s , C o i m b a t o r e , T a m i l n a d u , I n d i a . T h e t a x o n o m i c i d e n t i t i e s o f p l a n t s w e r e c o n f i r m e d b y D r . V . S a m p a t h K u m a r , S c i e n t i s t , B o t a n i c a l S u r v e y o f I n d i a ( S o u t h e r n C i r c l e ) , C o i m b a t o r e , T a m i l n a d u , I n d i a a n d t h e v o u c h e r s p e c i m e n o f t h e p l a n t s h a v e b e e n p r e s e r v e d a t R V S C o l l e g e M i c r o b i o l o g y L a b o r a t o r y . T h e c o l l e c t e d p l a n t s w e r e w a s h e d w i t h r u n n i n g t a p w a t e r , a i r d r i e d , h o m o g e n i z e d t o a f i n e p o w d e r a n d s t o r e d i n a i r - t i g h t b o t t l e s a t 4 ° C . P r e p a r a t i o n o f c r u d e e x t r a c t s A b o u t 1 0 0 g o f d r i e d p l a n t m a t e r i a l w a s e x t r a c t e d w i t h 2 0 0 m l o f P e t r o l e u m e t h e r k e p t o n a r o t a r y s h a k e r f o r 2 4 h . T h e r e a f t e r , i t w a s f i l t e r e d a n d c e n t r i f u g e d a t 5 0 0 0 g f o r 1 5 m i n . T h e s u p e r n a t a n t w a s c o l l e c t e d a n d t h e s o l v e n t w a s e v a p o r a t e d t o m a k e t h e f i n a l v o l u m e 1 / 5 t h o f t h e o r i g i n a l v o l u m e ( S a s i k u m a r e t a l . , 2 0 0 5 ) . I t w a s s t o r e d a t 4 ° C i n a i r t i g h t b o t t l e s f o r f u r t h e r s t u d i e s . S a m e c o n d i t i o n s w e r e a p p l i e d f o r c h l o r o f o r m , m e t h a n o l a n d e t h a n o l e x t r a c t s . I t w a s s t o r e d a t 4 ° C i n a i r t i g h t b o t t l e s f o r f u r t h e r s t u d i e s . 2 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 D o s s e t a l . , 2 0 1 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y P h y t o c h e m i c a l C o m p o n e n t s T h i s w a s c a r r i e d o u t a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d s d e s c r i b e d b y T r e a s e a n d E v a n s ( 1 9 9 7 ) . Q u a t i f i c a t i o n p h y t o c h e m i c a l a n a l y s i s o f t h e c r u d e p o w d e r o f t h r e e p l a n t s f o r t h e i d e n t i f i c a t i o n o f p h y t o c h e m i c a l s l i k e a s a t a n n i n s , a l k a l o i d , s t e r o i d , p h e n o l s a n d t e r p e n o i d , f l a v o n o i d e t c . B a c t e r i a l S t r a i n s M i c r o o r g a n i s m s w e r e o b t a i n e d f r o m t h e M i c r o b i a l T y p e C u l t u r e C o l l e c t i o n C e n t r e ( M T C C ) , C h a n d i g a r h , I n d i a . A m o n g s t s e v e n m i c r o o r g a n i s m s w e r e i n v e s t i g a t e d , t w o G r a m - p o s i t i v e b a c t e r i a a r e S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , ? w h i l e f i v e G r a m - n e g a t i v e b a c t e r i a a r e P r o t e u s m i r a b i l i s M T C C 4 2 5 , E s c h e r i c h i a c o l i M T C C 2 9 6 1 , P s e u o d o m o n a s a e r u g i n o s a M T C C 4 6 7 6 , K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e M T C C 4 3 2 a n d S a l m o n e l l a t y p h i M T C C 7 3 3 . A l l t h e m i c r o o r g a n i s m s w e r e m a i n t a i n e d a t 4 0 C o n n u t r i e n t a g a r s l a n t s . A n t i b a c t e r i a l A c t i v i t y T h e a n t i m i c r o b i a l a s s a y w a s p e r f o r m e d b y a g a r d i s c d i f f u s i o n m e t h o d f o r s o l v e n t e x t r a c t ( B a u e r e t a l . , 1 9 9 6 ) . T h e m o l t e n M u e l l e r H i n t o n a g a r w a s i n o c u l a t e d w i t h 1 0 0 µ l o f t h e i n o c u l u m ( 1 x 1 0 6 C F U / m l ) a n d p o u r e d i n t o t h e P e t r i p l a t e ( H i - m e d i a ) . F o r a g a r d i s c d i f f u s i o n m e t h o d , t h e d i s c ( 0 . 7 c m ) ( H i - M e d i a ) w a s s a t u r a t e d w i t h 1 0 0 µ l o f t h e t e s t c o m p o u n d , a l l o w e d t o d r y a n d w a s i n t r o d u c e d o n t h e u p p e r l a y e r o f t h e s e e d e d a g a r p l a t e . T h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d o v e r n i g h t a t 3 7 0 C . M i c r o b i a l g r o w t h w a s d e t e r m i n e d b y m e a s u r i n g t h e d i a m e t e r o f t h e z o n e o f i n h i b i t i o n . F o r e a c h b a c t e r i a l s t r a i n , c o n t r o l s w e r e m a i n t a i n e d w h e r e p u r e s o l v e n t s a r e u s e d i n s t e a d o f t h e e x t r a c t . T h e r e s u l t w a s o b t a i n e d b y m e a s u r i n g t h e z o n e d i a m e t e r . T h e e x p e r i m e n t w a s d o n e t h r e e t i m e s a n d t h e m e a n v a l u e s a r e p r e s e n t e d . M i n i m u m I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n ( M I C ) F o r d e t e r m i n a t i o n o f M I C , 1 m l o f b r o t h m e d i u m w a s t a k e n i n t o 1 0 t e s t t u b e s f o r e a c h b a c t e r i a ( M u h a m e d M u b a r a c k e t a l . , 2 0 1 1 ) . D i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f p l a n t e x t r a c t s r a n g i n g f r o m 0 . 1 2 5 - 8 m g / m l - 1 c o n c e n t r a t i o n w e r e i n c o r p o r a t e d i n t o t h e b r o t h a n d t h e t u b e s w e r e t h e n i n o c u l a t e d w i t h 0 . 1 m l o f i n o c u l u m s o f r e s p e c t i v e b a c t e r i a ( 1 0 5 C F U m l - 1 ) a n d k e p t a t 3 7 ° C f o r 2 4 h . T h e t e s t t u b e c o n t a i n i n g t h e l o w e s t c o n c e n t r a t i o n o f e x t r a c t s h o w i n g r e d u c t i o n i n t u r b i d i t y w h e n c o m p a r e d w i t h c o n t r o l w a s r e g a r d e d a s M I C o f t h a t e x t r a c t . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N D i f f e r e n t s o l v e n t s a n d w a t e r e x t r a c t s t e s t e d a t 1 0 0 m g / m l c o n c e n t r a t i o n s a g a i n s t s i x i m p o r t a n t m i c r o b i a l p a t h o g e n s a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 1 . A m o n g f i v e s o l v e n t s ( P e t r o l u m e t h e r , b e n z e n e , c h l o r o f o r m , m e t h a n o l a n d w a t e r ) t e s t e d a g a i n s t s i x m i c r o b i a l p a t h o g e n s , b e n z e n e , m e t h a n o l a n d w a t e r e x t r a c t s r e c o r d e d s i g n i f i c a n t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t a l l t h e t e s t p a t h o g e n s . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y w a s n o t o b s e r v e d i n p e t r o l e u m e t h e r a n d c h l o r o f o r m e x t r a c t s a g a i n s t a l l t h e p a t h o g e n s . A m o n g b e n z e n e , m e t h a n o l a n d w a t e r e x t r a c t s , m e t h a n o l e x t r a c t s r e c o r d e d s i g n i f i c a n t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y f o l l o w e d b y w a t e r a n d b e n z e n e . S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s f o u n d h i g h l y s u s c e p t i b l e t o m e t h a n o l e x t r a c t , w h e r e a s K l e b s i l l a p n e u m o n i a a n d P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a a r e l e s s s u s c e p t i b l e t o m e t h a n o l e x t r a c t . M e t h a n o l e x t r a c t e x h i b i t e d s i m i l a r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t , E . c o l i , S a l m o n e l l a t y p h i a n d P r o t e u s m i r a b i l i s . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f w a t e r e x t r a c t v a r i e d g r e a t l y a m o n g t h e d i f f e r e n t t e s t p a t h o g e n i c b a c t e r i a . H i g h e s t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y w a s o b s e r v e d a g a i n s t S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s f o l l o w e d b y E . c o l i e v e n t h o u g h a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y w a s o b s e r v e d a g a i n s t o t h e r p a t h o g e n s , a l s o i t w a s n o t f o u n d s i g n i f i c a n t . O f t h e t h r e e c a n d i d a t e p l a n t s i n t h i s s t u d y P a n i c u m m a x i m u m s h o w e d s i g n i f i c a n t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t a l l t h e t e s t e d b a c t e r i a a n d t h e r e m a i n i n g p l a n t s s h o w e d m o d e r a t e a c t i v i t y a f t e r a l c o h o l i c e x t r a c t i o n . D o s s e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 2 6 M i c r o o r g a n i s m s C o n c . ( m g / m l - 1 ) E x t r a c t s S y n t h e t i c d r u g P . e t h e r B e n C h l M e t W a t e r S . a u r e u s 1 0 0 - - - 1 6 - 2 1 E . c o l i - - - 1 2 - 1 5 S . t y p h i - - - - - 2 0 P . m i r a b i l i s - - - - - 2 3 K . p n e u m o n i a - - - - - 1 6 P . a e r u g i n o s a - - - - - 1 4 T a b l e 1 . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f B a r l e r i a l u p u l i n a

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y M i n i m u m I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n ( M I C ) o f t h e a c t i v e e x t r a c t s i s s h o w n i n T a b l e 4 . P . m a x i m u m a n d B . l u p u l i n a s h o w e d t h e s t r o n g e s t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y w i t h M I C v a l u e s o f 0 . 1 2 5 m g / m l - 1 , f o l l o w e d b y C . o d o r a t a ( M I C o f 0 . 2 5 0 m g / m l - 1 ) . A v a i l a b l e l i t e r a t u r e r e s u l t s i n d i c a t e a s t r o n g a c t i v i t y w h e n M I C v a l u e s a r e b e t w e e n 0 . 0 5 - 0 . 5 0 m g / m l - 1 , m o d e r a t e a c t i v i t y i n v a l u e s b e t w e e n 0 . 6 - 1 . 5 0 m g m L - 1 a n d w e a k a c t i v i t y a b o v e 1 . 5 0 m g / m l - 1 ( D i a z e t a l . , 2 0 0 9 ) . I n c o n f o r m i t y t o t h e e x i s t i n g t r e n d , P . m a x i m u m a n d B . l u p u l i n a s h o w e d s t r o n g a c t i v i t y , C . o d o r a t a d i s p l a y e d m o d e r a t e a c t i v i t y . P h y t o c h e m i c a l a n a l y s i s o f a l l t h e p l a n t e x t r a c t s r e v e a l e d t h a t a l k a l o i d s a r e g e n e r a l l y p r e s e n t i n p e t r o l e u m e t h e r e x t r a c t s . T a n n i n s w e r e f o u n d i n P e t r o l e u m e t h e r & C h l o r o f o r m e x t r a c t a n d s t e r o i d s i n m e t h a n o l e x t r a c t . F l a v o n o i d s w e r e f o u n d i n b e n z e n e a n d m e t h a n o l e x t r a c t s ( T a b l e 5 ) . A l l p l a n t p a r t s s y n t h e s i z e s o m e c h e m i c a l s b y t h e m s e l v e s , t o p e r f o r m t h e i r p h y s i o l o g i c a l a c t i v i t i e s . I n o u r p r e s e n t s t u d y , t h e i n v e s t i g a t e d p l a n t s h a v e e x h i b i t e d d i f f e r e n t k i n d s o f s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s . T h e m e d i c i n a l v a l u e o f t h e s e s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s a r e d u e t o t h e p r e s e n c e o f c h e m i c a l s u b s t a n c e s t h a t 2 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 D o s s e t a l . , 2 0 1 1 M i c r o o r g a n i s m s C o n c . ( m g / m l - 1 ) E x t r a c t s S y n t h e t i c d r u g P . e t h e r B e n C h l M e t W a t e r S . a u r e u s 1 0 0 - - 1 5 - 2 1 E . c o l i - - - 1 0 - 1 5 S . t y p h i - - - 1 1 - 2 0 P . m i r a b i l i s - - - 9 - 2 3 K . p n e u m o n i a - - - 1 0 - 1 6 P . a e r u g i n o s a - 1 3 - - - 1 4 T a b l e 2 . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f C h r o m o l a e n a o d o r a t a M i c r o o r g a n i s m s C o n c . ( m g / m l - 1 ) E x t r a c t s S y n t h e t i c d r u g P . e t h e r B e n C h l M e t W a t e r S . a u r e u s 1 0 0 - - - 1 9 9 2 1 E . c o l i - - - 1 4 8 1 5 S . t y p h i - - - 1 3 - 2 0 P . m i r a b i l i s - 1 2 - 1 1 - 2 3 K . p n e u m o n i a - - - 1 0 - 1 6 P . a e r u g i n o s a - - - 1 0 - 1 4 S y n t h e t i c d r u g 2 1 T a b l e 3 . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f P a n i c u m m a x i m u m M e d i c i n a l P l a n t s E x t r a c t s M i n i m u m I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n s ( m g / m l ) S . a u r e u s E . c o l i S . t y p h i P . m i r a b i l i s K . p n e u m o n i a P . a e r u g i n o s a B . l u p u l i n a P . e t h e r - - - - - - B e n - - - - - - C h l - - - - - - M e t 0 . 2 5 0 0 . 5 0 0 - - - - W a t e r - - - - - - C . o d o r a t a P . e t h e r - - - - - - B e n - - - - - 0 . 5 0 0 C h l - - - - - - M e t 0 . 2 5 0 1 . 0 1 . 0 4 1 . 0 - W a t e r P . m a x i m u m P . e t h e r - - - - - - B e n - - - 0 . 5 0 0 - - C h l - - - - - - M e t 0 . 1 2 5 0 . 2 5 0 0 . 2 5 0 1 . 0 1 . 0 1 . 0 W a t e r 4 4 - - - - T a b l e 4 . M i n i m u m I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n s o f B a r l e r i a l u p u l i n a , C h r o m o l a e n a o d o r a t a a n d P a n i c u m m a x i m u m

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y p r o d u c e a d e f i n i t e p h y s i o l o g i c a l a c t i o n o n t h e h u m a n b o d y . T h e m o s t i m p o r t a n t o f t h e s e s u b s t a n c e s i n c l u d e , a l k a l o i d s , g l u c o s i d e s , s t e r o i d s , f l a v o n o i d s , f a t t y o i l s , r e s i n s , m u c i l a g e s , t a n n i n s , g u m s , p h o s p h o r u s a n d c a l c i u m f o r c e l l g r o w t h , r e p l a c e m e n t , a n d b o d y b u i l d i n g ( K u b m a r a w a e t a l . , 2 0 0 8 ) . W y n n ( 2 0 0 1 ) d e s c r i b e s t o d a y ' s t r a d i t i o n a l m e d i c i n e , a s u n d o u b t e d l y t h e o l d e s t f o r m o f m e d i c i n e a n d p r o b a b l y h a d e v o l v e d s i m u l t a n e o u s l y w i t h t h e e v o l u t i o n o f h u m a n b e i n g s . W i t h t h e t r a d i t i o n a l k n o w l e d g e i n t h e b a c k g r o u n d , p o t e n t i a l p l a n t s c a n b e p r o s p e c t e d t o r e a c h t h e a c t i v e f r a c t i o n o r m o l e c u l e ( s ) w h i c h c a n b e f u r t h e r f o r m u l a t e d . F u r t h e r s t u d i e s m a y b e n e c e s s a r y t o e l u c i d a t e t h e s p e c i f i c p h y t o a c t i v e c o m p o u n d s i n t h e l e a f e x t r a c t s o f t h e p l a n t P . m a x i m u m . A C K N O W L E D G E M E N T S T h e 1 s t a n d 2 n d r e s e a r c h e r s a r e g r a t e f u l t o U n i v e r s i t y G r a n t C o m m i s s i o n ( U G C ) f o r t h e f i n a n c i a l s u p p o r t g i v e n t o t h e p r e s e n t s t u d y u n d e r t h e M a j o r R e s e a r c h P r o j e c t p r o g r a m m e e n t i t l e d A S t u d y o f E t h n o - v e t e r i n a r y M e d i c i n a l P l a n t s a n d i n v i t r o a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t i e s a g a i n s t B o v i n e M a s t i t i s i s o l a t e d b a c t e r i a l p a t h o g e n s [ S a n c t i o n N o . F . N o . 3 5 - 1 2 1 / 2 0 0 8 ( S R ) d t . 2 0 M a r c h 2 0 0 9 ] . T h e r e s e a r c h e r s a r e t h a n k f u l t o t h e m a n a g e m e n t o f R V S E d u c a t i o n a l T r u s t f o r t h e i r e n c o u r a g e m e n t a n d s u p p o r t . R E F E R E N C E S B a u e r A W , K i r b y W M M , S h e r r i s J C . 1 9 9 6 . A n t i b i o t i c s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g b y a s t a n d a r d i z e d s i n g l e d i s k m e t h o d . A m e r i c a n J o u r n a l o f C l i n i c a l P a t h o l o g y 4 5 : 4 9 3 - 4 9 6 . D i a z M A N , R o s s i C C , M e n d o n c a V R , S i l v a D M , R i b o n A D O B , A g u i l a r A P a n d M u n o z G G . 2 0 0 9 . S c r e e n i n g o f m e d i c i n a l p l a n t s f o r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t i e s o n S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s t r a i n s i s o l a t e d f r o m b o v i n e m a s t i t i s . B r a z i l i a n J . P h a r m a c o g . K u b m a r a w a D , K h a n M E , P u n a h A M a n d H a s s a n 2 0 0 8 . P h y t o c h e m i c a l S c r e e n i n g a n d a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f e x t r a c t s f r o m P a k i a C l a p p e r o t o n i a n a k e a y a g a i n s t h u m a n p a t h o g e n i c b a c t e r i a . J o u r n a l o f M e d i c i n a l P l a n t s R e s e a r c h 2 ( 1 2 ) : 3 5 2 - 3 5 5 . M u h a m e d M u b a r a c k H , D o s s A , D h a n a b a l a n R a n d V e n k a t a s w a m y R . 2 0 1 1 . A c t i v i t y o f s o m e s e l e c t e d m e d i c i n a l p l a n t e x t r a c t s a g a i n s t B o v i n e M a s t i t i s P a t h o g e n s . J o u r n a l o f A n i m a l a n d V e t e r i n a r y A d v a n c e s 1 0 ( 6 ) : 7 3 8 - 7 4 1 . S a s i k u m a r J M , P i c h a i A n t h o n i D o s s A , D o s s A . 2 0 0 5 . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f E u p a t o r i u m g l a n d u l o s u m l e a v e s . F i t o t e r a p i a 7 6 ( 2 ) : 2 4 0 - 2 4 3 . S h a r m a B a n d K u m a r P . 2 0 0 9 . E x t r a c t i o n a n d P h a r m a c o l o g i c a l E v a l u a t i o n o f s o m e e x t r a c t s o f T r i d a x p r o c u m b e n s a n d C a p p a r i s d e c i d u a . I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f A p p l i e d R e s e a r c h i n N a t u r a l P r o d u c t s 1 ( 4 ) : 5 - 1 2 . T r e a s e G E & E v a n s W C . 1 9 9 7 . P h a r m a c o g n o s y , D o s s e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 2 8 M e d i c i n a l P l a n t s P h y t o c o n s t i t u e n t s E x t r a c t s P . e t h e r B e n C h l M e t W a t e r B . l u p u l i n a A l k a l o i d s + - + - - T a n n i n s + - - - - S t e r o i d s - - - + - S a p o n i n s - - + - - F l v o n o i d s - + - + - C . o d o r a t a A l k a l o i d s + - - - - T a n n i n s - - + - - S t e r o i d s - - - - - S a p o n i n s - + - - - F l v o n o i d s + - - + - P . m a x i m u m A l k a l o i d s + + - - - T a n n i n s - + - - - S t e r o i d s - - - + - S a p o n i n s - - - - - F l v o n o i d s - - - - - T a b l e 5 . P h y t o c h e m i c a l s c r e e n i n g o f B a r l e r i a l u p u l i n a , C h r o m o l a e n a o d o r a t a a n d P a n i c u m m a x i m u m

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y E d . X I V , M a c M i l l i a n P u b l i s h e r L t d . , L o n d o n . p p . 5 6 8 - 5 7 8 . T r e a s e G E a n d E v a n s W C . 1 9 9 7 . P h a r m a c o g n o s y . E d . X I V , M a c M i l l i a n P u b l . , L t d . , L o n d o n 5 6 8 - 5 7 8 . W y n n G S . 2 0 0 1 . H e r b s i n V e t e r i n a r y M e d i c i n e . A l t e r n a t i v e V e t e r i n a r y M e d i c i n e . h t t p : / / w w w . a l t v e t m e d . c o m / a r t i c l e s / h e r b s . h t m l a s r e t r i e v e d o n 9 O c t 2 0 0 1 2 1 ( 4 7 ) : 3 8 . 2 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 2 4 - 2 9 D o s s e t a l . , 2 0 1 1