J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O R I G I N A L P A P E R J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y E v a l u a t i o n o f c h a n g e s i n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f B a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d P r a w n K e y w o r d s : B a c t e r i o c i n , L a c t o b a c i l l u s b r e v i s , p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n . A B S T R A C T : B a c t e r i o c i n s a r e a n t i b a c t e r i a l p r o t e i n s p r o d u c e d b y b a c t e r i a t h a t k i l l o r i n h i b i t t h e g r o w t h o f b a c t e r i a . T h e p r e s e n t s t u d y d e a l s w i t h t h e e f f e c t o f v a r i o u s f o r m o f b a c t e r i o c i n d e r i v e d f r o m L a c t o b a c i l l u s b r e v i s a s c r u d e c u l t u r e s u p e r n a t a n t , a m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e a n d d i a l y s e d p r o d u c t o n t h e c h a n g e s o f p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n s u c h a s m o i s t u r e , p r o t e i n , t o t a l a s h , t o t a l s u g a r f a t a n d m i c r o b i a l a n a l y s i s . T h e s e w e r e a n a l y s e d b y s e e i n g t o t a l b a c t e r i a l , f u n g a l , y e a s t , s p o r e f o r m e r s , c o l i f o r m a n d a n a e r o b e s c o u n t s i n c o o k e d p r a w n . N o e f f e c t o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n w a s o b s e r v e d i n a l l f o r m s o f b a c t e r i o c i n t r e a t e d f o o d . N o m i c r o b i a l g r o w t h w a s r e c o r d e d b u t d i s t i n c t r e d u c t i o n i n p r o t e i n , f a t a n d t o t a l s u g a r , m o i s t u r e , t o t a l a s h w e r e o b s e r v e d i n n o n - b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d f o o d w h i c h s u g g e s t t h e p o s s i b l e u s e o f b a c t e r i o c i n a s f o o d p r e s e r v a t i v e f o r p r o c e s s e d f o o d p r o d u c t . 6 - 1 4 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 2 © F i c u s P r e s s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p r e s s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : K a r t h i c k R a j a N a m a s i v a y a m S , S i v a s u b r a m a n i a n S a n d P r a k a s h P . I n s t i t u t i o n : D e p a r t m e n t o f B i o t e c h n o l - o g y , S a t h y a b a m a U n i v e r s i t y , C h e n n a i 6 0 0 1 1 9 , T a m i l N a d u , I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : K a r t h i c k R a j a N a m a s i v a y a m S , E m a i l : b i o l o g i a s k @ g m a i l . c o m . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 0 1 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 1 8 A p r i l 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 0 A p r i l 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 2 8 A p r i l 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : K a r t h i c k R a j a N a m a s i v a y a m S , S i v a s u b r a m a n i a n S a n d P r a k a s h P . E v a l u a t i o n o f c h a n g e s i n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f B a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d P r a w n . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y I N T R O D U C T I O N O n e o f t h e c o n c e r n s i n f o o d i n d u s t r y i s t h e c o n t a m i n a t i o n b y p a t h o g e n s , w h i c h a r e a f r e q u e n t c a u s e o f f o o d b o r n e d i s e a s e s . O v e r t h e p a s t d e c a d e , r e c u r r e n t o u t b r e a k s o f d i a r r h e a , c o m b i n e d w i t h t h e n a t u r a l r e s i s t a n c e o f t h e c a u s a t i v e a g e n t s , c o n t r i b u t e d t o i t s s t a t u s a s a h a z a r d . I n t h e r e c e n t y e a r s t h e f o o d i n d u s t r y f a c e d t h e n e e d o f i n c r e a s i n g t h e p o s s i b i l i t i e s f o r b e t t e r c o n s e r v a t i o n a n d o f t h e f o o d p r o d u c t s ( N e y s e n s 2 0 0 2 ) . T o d a y , t h e c o n s e r v a t i o n i s c o m m o n l y p e r f o r m e d b y s t e r i l i z a t i o n o r b y a d d i n g s u g a r , s a l t , o r g a n i c a c i d s o r b y s m o k i n g . H o w e v e r , s o m e o f t h e s e c o m p o u n d s c h a n g e t h e t a s t e q u a l i t y a n d t h e a p p l i a n c e o f o t h e r s i s n o t h e a l t h y . F o r i m p r o v i n g t h e q u a l i t y o f t h e p r o d u c t s t h e a p p r o a c h b y w h i c h c h e m i c a l s a r e a d d e d m u s t b e c e a s e d a n d t h e s t e r i l i z a t i o n m u s t b e a v o i d e d a s f a r a s p o s s i b l e . A n e w p r o t e c t i o n i s r e q u i r e d , w h i c h i s h e a l t h y a n d n a t u r a l . . B i o t e c h n o l o g y i n t h e f o o d - p r o c e s s i n g s e c t o r t a r g e t s t h e s e l e c t i o n , p r o d u c t i o n a n d i m p r o v e m e n t o f u s e f u l m i c r o o r g a n i s m s a n d t h e i r p r o d u c t s , a s w e l l a s t h e i r t e c h n i c a l a p p l i c a t i o n i n f o o d q u a l i t y . ( C o r r e t a l . , 2 0 0 7 ) . T h e u s e o f n o n - p a t h o g e n i c m i c r o o r g a n i s m s a n d / o r t h e i r m e t a b o l i t e s t o i m p r o v e m i c r o b i o l o g i c a l s a f e t y a n d e x t e n d t h e s h e l f l i f e o f f o o d s i s d e f i n e d a s b i o p r e s e r v a t i o n ( D e M a r t i n i s e t a l . , 2 0 0 1 ) . A n t a g o n i s t i c p r o p e r t i e s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) a l l i e d t o t h e i r s a f e h i s t o r y o f u s e i n t r a d i t i o n a l f o o d f e r m e n t e d p r o d u c t s m a k e t h e m v e r y a t t r a c t i v e t o b e u s e d a s b i o p r e s e r v a t i v e s . ( C a p l i c e a n d F i t z g e r a l d 1 9 9 9 ) . A n t i b i o t i c s a r e a t p r e s e n t r e s t r i c t e d f o r u s e i n f o o d s a n d f e e d s , a n d b a c t e r i o c i n s a r e a n i n t e r e s t i n g g r o u p o f b i o m o l e c u l e s w i t h a n t i m i c r o b i a l p r o p e r t i e s t h a t m a y r e p r e s e n t a g o o d a l t e r n a t i v e ( J a c k e t a l . , 1 9 9 5 ) . T h e b a c t e r i o c i n s p r o d u c e d b y f o o d g r a d e s t a r t e r b a c t e r i a l c u l t u r e s , c o u l d b e a p p l i e d a s p r e s e r v a t i v e s . B a c t e r i o c i n s p r o d u c e d b y l a c t i c a c i d b a c t e r i a h a v e a t t r a c t e d i n c r e a s i n g a t t e n t i o n , s i n c e t h e y a r e a c t i v e i n a n a n o m o l a r r a n g e a n d h a v e n o t o x i c i t y . I n t h e p r e s e n t s t u d y b a c t e r i o c i n p r e p a r a t i o n f r o m L a c t o b a c i l l u s b r e i v i s w a s e v a l u a t e d a g a i n s t p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f c o o k e d p r a w n u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S I s o l a t i o n o f L a c t o b a c i l l u s b r e v i s T h e L a c t o b a c i l l u s b r e v i s w a s i s o l a t e d f r o m c u r d s a m p l e b y s e r i a l d i l u t i o n t e c h n i q u e w i t h m o d i f i e d L a c t o b a c i l l u s a g a r ( H i - m e d i a , M u m b a i , I n d i a ) . T h e b a c t e r i o c i n c u l t u r e w a s i d e n t i f i e d b a s e d o n m o r p h o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a r a c t e r s . T h e p u r e c u l t u r e w a s m a i n t a i n e d o n m o d i f i e d L a c t o b a c i l l u s s l a n t . B a c t e r i o c i n p r o d u c t i o n 2 5 0 m l o f m o d i f i e d L a c t o b a c i l l u s b r e v i s w a s p r e p a r e d , s t e r i l i z e d b y a u t o c l a v i n g , a f t e r s t e r i l i z a t i o n 1 m l o f L a c t o b a c i l l u s b r e v i s c u l t u r e w a s i n o c u l a t e d a n d k e p t u n d e r s h a k i n g a t 3 7 0 C f o r 2 4 h o u r s . A f t e r i n c u b a t i o n t h e m e d i a w a s c e n t r i f u g e d a t 1 0 , 0 0 0 r p m f o r 1 0 m i n s . T h e s u p e r n a t a n t w a s c o l l e c t e d i n s t e r i l e t e s t t u b e s a n d u s e d f o r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t i n d i c a t o r s t r a i n a d a p t i n g w e l l d i f f u s i o n a s s a y . P a r t i a l p u r i f i c a t i o n : T h e c o l l e c t e d s u p e r n a t a n t w a s s a t u r a t e d w i t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f a m m o n i u m S u l p h a t e 2 0 , 4 0 , 6 0 a n d 8 0 % , k e p t a t 4 0 C f o r 6 t o 1 2 h o u r s . A f t e r i n c u b a t i o n , t h e t u b e s w e r e c e n t r i f u g e d a t 1 0 , 0 0 0 r p m f o r 1 0 m i n s a n d t h e c o l l e c t e d p r e c i p i t a t e w a s d i s s o l v e d i n T r i s b u f f e r a n d d i a l y s e d a g a i n s t 0 . 1 M T r i s H C L b u f f e r . E v a l u a t i o n o f B a c t e r i o c i n o n c o o k e d P r a w n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n S a m p l e p r e p a r a t i o n a n d t r e a t m e n t : A b o u t 1 0 0 g o f w e l l c o o k e d p r a w n w a s t a k e n i n a p r e s t e r i l i z e d , a i r t i g h t , p l a s t i c c o n t a i n e r . 1 0 m l o f f i l t e r s t e r i l i z e d s u p e r n a t a n t ( c r u d e ) , 1 0 m l o f a m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e a n d 1 0 m l o f d i a l y s e d p r o d u c t w e r e a d d e d s e p a r a t e l y . T h r e e r e p l i c a t i o n s w e r e m a i n t a i n e d f o r e a c h t r e a t m e n t . O n e s e t o f t r e a t e d c o n t a i n e r s a t r e s p e c t i v e t r e a t m e n t w a s k e p t a t 3 0 0 C w h i l e t h e o t h e r w a s m a i n t a i n e d a t r e f r i g e r a t i o n w i t h o u t f r e e z i n g f o r 1 5 d a y s . D a i l y o b s e r v a t i o n w a s r e c o r d e d f o r p H c h a n g e s a n d o f f f l a v o r e t c . A f t e r t h e 1 5 d a y s t h e f o l l o w i n g p a r a m e t e r s s u c h a s m o s i t u r e , p r o t e i n , t o t a l a s h , t o t a l s u g a r a n d m i c r o b i a l a n a l y s i s w e r e c a r r i e d o u t b y s t a n d a r d m e t h o d ( A P H A 1 9 8 9 ) . M i c r o b i a l A n a l y s i s : T h e r e s p e c t i v e b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e s w e r e i n c u b a t e d i n 3 7 0 C a n d 5 5 0 C f o r 1 0 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s a n a l y z e d f o r T o t a l p l a t e c o u n t ( T P C ) , S p o r e c o u n t , A n a e r o b i c g r o w t h , a n d c o l i f o r m g r o w t h . F o r t o t a l p l a t e c o u n t , p l a t e c o u n t a g a r w a s u s e d . F o r s p o r e c o u n t d e x t r o s e t r y p t o n e a g a r w a s u s e d . F o r d e t e r m i n i n g A n a e r o b e s , d e x t r o s e t r y p t o n e b r o t h w a s u s e d a n d f o r c o l i f o r m s M a c k o n k e y b r o t h w a s u s e d . 1 0 g o f t h e s a m p l e w a s w e i g h e d a c c u r a t e l y , t h e n t r a n s f e r r e d i n t o t h e p e s t l e a n d m o r t a r , m a c e r a t e d w l l , a n d i t w a s t r a n s f e r r e d i n t o t h e c o n i c a l f l a s k , c o n t a i n i n g 9 0 m l R i n g e r ' s s o l u t i o n w h i c h g i v e s 1 : 1 0 d i l u t i o n . F r o m t h e a b o v e d i l u t i o n 1 m l o f t h e s a m p l e w a s i n o c u l a t e d i n t o t h e 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y s t e r i l e p e t r i p l a t e s a s e p t i c a l l y a n d t h e r e s p e c t i v e m e d i a w e r e p o u r e d , m i x e d w e l l , a l l o w e d f o r s e t t i n g a n d i n c u b a t e d a t b o t h 3 7 0 C a n d 5 5 0 C . F o r s p o r e c o u n t , t h e d i l u t e d s a m p l e w a s k e p t i n t h e b o i l i n g w a t e r b o t h f o r 1 5 m i n ( t o a n a l y z e t h e h e a t r e s i s t a n t s p o r e ) a n d t h e n i n o c u l a t e d t o t h e p e t r i p l a t e s . D e x t r o s e t r y p t o n e b r o t h w a s i n o c u l a t e d w i t h o n e m l o f t h e d i l u t e d s a m p l e a n d 1 m l o f t h e s t e r i l e l i q u i d p a r a f f i n t o m a i n t a i n a n a e r o b i c s a m p l e a n d 1 m l o f t h e s t e r i l e l i q u i d p a r a f f i n t o m a i n t a i n a n a e r o b i c c o n d i t i o n s . T h e s e t u b e s w e r e a l s o i n c u b a t e d a t 3 7 0 C a n d 5 5 0 C . R E S U L T S : B a c t e r i o c i n a c t i v i t y a g a i n s t I n d i c a t o r O r g a n i s m T h e c r u d e b a c t e r i o c i n p r e p a r e d f r o m t h e c u l t u r e d f i l t e r a t e o f L a c t o b a c i l l u s b r e v i s s h o w s d i s t i n c t a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y a g a i n s t i n d i c a t o r o r g a n i s m . A c l e a r z o n e o f 3 0 . 0 m m w a s o b s e r v e d . T h e e f f e c t o n c h a n g e s o f P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n a n d M i c r o b i a l a n a l y s i s o f c o o k e d p r a w n a f t e r t h e b a c t e r i o c i n t r e a t m e n t . N o n - B a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n : T h e p r o t e i n , t o t a l a s h , t o t a l s u g a r , m o i s t u r e , f a t a r e f o u n d t o b e d e c r e a s e d i n c o n t r o l ( n o n - b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n ) b o t h i n r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A n d a r e p r e s e n t e d i n T a b l e 1 , 2 a n d 3 . T h e p r o t e i n c o n t e n t i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d w a s f o u n d t o b e 2 0 . 1 1 % a n d 2 1 . 8 % a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s r e d u c e d t o 1 5 % i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d a n d 2 1 . 6 % i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e 1 1 . 2 % a n d i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 2 1 . 4 % . T h e M o i s t u r e c o n t e n t i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d w e r e f o u n d t o b e 6 0 . 5 % a n d 5 8 . 9 % a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s r e d u c e d t o 5 8 . 4 % i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d a n d 5 6 . 5 % i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e 5 5 . 5 % a n d i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 5 0 . 3 % T h e t o t a l a s h i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d w e r e f o u n d t o b e 1 . 6 % a n d 1 . 8 % a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s r e d u c e d t o 1 . 4 % i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d a n d 1 . 7 % i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e 1 . 2 % a n d i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 1 . 4 % . . T h e t o t a l s u g a r c o n t e n t i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d w e r e f o u n d t o b e 4 . 2 % a n d 5 . 4 % a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s r e d u c e d t o 3 . 5 % i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d a n d 5 . 2 % i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e 2 . 5 % a n d i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 5 . 0 % . T h e f a t c o n t e n t i n c o n t o l r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d w e r e f o u n d t o b e 2 . 5 % a n d 2 . 4 % a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s i t w a s r e d u c e d t o 2 . 2 % i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d a n d 2 . 4 % i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , i n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e 1 . 7 % a n d i n c o n t r o l r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 2 . 3 % . N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 8 S . N o T r e a t m e n t P a r a m e t e r s C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n ( % ) a t d i f f e r e n t t i m e p e r i o d s ( d a y s ) 1 . C o n t r o l ( N o n - r e f r i g e r a t e d ) M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 1 0 1 5 6 0 . 5 2 0 . 1 1 1 . 6 4 . 2 2 . 5 5 8 . 4 1 5 1 . 4 3 . 5 2 . 2 5 5 . 5 1 1 . 2 1 . 2 2 . 5 1 . 9 2 . C o n t r o l R e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 8 . 9 2 1 . 8 1 . 8 5 . 4 2 . 4 5 6 . 5 2 1 . 6 1 . 7 5 . 2 2 . 4 5 0 . 3 2 1 . 4 1 . 4 5 . 0 2 . 3 3 . T e s t N o n - r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 1 2 2 . 0 1 . 7 5 . 4 2 . 3 7 0 . 5 2 1 . 7 1 . 5 5 . 4 2 . 1 6 9 . 8 2 1 . 5 1 . 2 5 . 1 1 . 8 4 . T e s t r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 0 . 4 2 2 . 0 1 . 7 5 . 4 2 . 4 6 9 2 1 . 8 1 . 5 5 . 4 2 . 1 6 7 2 1 . 7 1 . 3 5 . 3 1 . 9 T a b l e 1 . C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f C r u d e b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e n t e r v a l s ( % )

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y E v a l u a t i o n o f A m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o n p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s : T h e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e c o u l d b e o b s e r v e d o n a l l t h e t e s t p a r a m e t e r s i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d f o o d u n d e r r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d , t h a n o n n o n - b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d f o o d . P r o t e i n T h e p r o t e i n c o n t e n t i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e u n d e r r e f r i g e r a t i o n w a s f o u n d t o b e 2 2 . 0 % a n d w i t h o u t r e f r i g e r a t i o n w a s a l s o f o u n d t o b e t h e s a m e a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s t h e r e w a s s l i g h t d e g r a d a t i o n i n p r o t e i n c o n t e n t w h i c h w a s f o u n d t o b e 2 1 . 7 % b u t i n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e t h e r e f o u n d t o h a v e l e s s c h a n g e c o m p a r e d t o t h e n o n - r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 1 . 8 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e r e w a s n o t m u c h d e g r a d a t i o n i n t h e p r o t e i n c o n t e n t i n r e f r i g e r a t e d a s w e l l a s n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e , t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 1 . 5 % a n d 2 1 . 7 % T o t a l A s h : T h e T o t a l A s h c o n t e n t i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e u n d e r r e f r i g e r a t i o n w a s f o u n d t o b e 1 . 7 % a n d w i t h o u t r e f r i g e r a t i o n w a s a l s o f o u n d t o b e t h e s a m e a f t e r 5 d a y s . E v e n a f t e r 1 0 d a y s , t h e r e w e r e n o c h a n g e i n t h e v a l u e s , b o t h i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e , v a l u e s w e r e n o t e d a s 1 . 5 % . A f t e r 1 5 d a y s , T h e r e w e r e n o n e g o t i a b l e c h a n g e i n t h e t o t a l a s h o f b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e w h e n c o m p a r e d t o t h e r e f e r i g e r a t e d s a m p l e . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 2 % a n d 1 . 3 % T o t a l S u g a r T h e T o t a l s u g a r i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d u n d e r r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e w e r e f o u n d t o b e s a m e a f t e r 5 d a y s a n d t h e v a l u e w a s r e c o r d e d a s 5 . 4 % . T h e r e w e r e n o c o n s i d e r a b l e c h a n g e i n n o n - r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e , t h e v a l u e w a s r e c o r d e d a s 5 . 4 % . T h e T o t a l s u g a r c o n t e n t i n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e w a s w e l l m a i n t a i n e d , t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 5 . 4 % a f t e r 1 0 d a y s . T h e r e w a s a f u r t h e r c h a n g e f o u n d i n n o n - r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e w a s r e c o r d e d a s 5 . 1 % w h e r e a s i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e , i t w a s r e c o r d e d a s 5 . 3 % a f t e r 1 5 d a y s . M o i s t u r e A f t e r 5 d a y s , i n b a c t e r i o c i n r e f r i g e r a t e d s a m p l e t h e r e w a s r e t e n t i o n i n t h e m o i s t u r e c o n t e n t a n d t h e v a l u e w a s 7 0 . 4 % a n d i n b a c t e r i o c i n n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e t h e r e w a s n o t m u c h r e t e n t i o n a n d t h e v a l u e w a s f o u n d t o b e 7 1 % . A f t e r 1 0 d a y s t h e r e w a s m o r e r e t e n t i o n f o u n d i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e w a s a n d i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e t h e v a l u e w a s m a i n t a i n e d a s 7 0 . 5 % a n d i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d , t h e v a l u e w a s r e c o r d e d a s 6 9 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e w a s s t i l l 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 S . N o T r e a t m e n t P a r a m e t e r s C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n ( % ) a t d i f f e r e n t t i m e p e r i o d s ( d a y s ) 1 . C o n t r o l ( N o n - r e f r i g e r a t e d ) M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 1 0 1 5 6 0 . 5 2 0 . 1 1 1 . 6 4 . 2 2 5 5 8 . 4 1 5 1 . 4 3 . 5 2 . 2 5 5 . 5 1 1 . 2 1 . 2 2 . 5 1 . 9 2 . C o n t r o l R e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 8 . 9 2 1 . 8 1 . 8 5 . 4 2 . 4 5 6 . 5 2 1 . 6 1 . 7 5 . 2 2 . 4 5 0 . 3 2 1 . 4 1 . 4 5 . 0 2 . 3 3 . T e s t N o n - r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 1 2 2 . 2 1 . 6 5 . 4 2 . 3 7 0 . 8 2 2 1 . 4 5 . 3 2 . 1 7 0 . 5 2 1 . 8 1 . 3 5 . 2 2 4 . T e s t r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 1 . 1 2 2 . 3 1 . 6 5 . 4 2 . 4 7 0 . 8 2 2 1 . 5 5 . 4 2 . 3 7 0 . 5 2 1 . 9 1 . 3 5 . 3 2 . 2 T a b l e 2 . . C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f A m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e d b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s ( % )

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y m a i n t a i n e d a s 6 9 . 8 % a n d i n b a c t e r i c o i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e t h e r e w a s s t i l l m o r e r e t e n t i o n a n d t h e v a l u e w a s f o u n d t o b e 6 7 % . F a t T h e F a t c o n t e n t w a s f o u n d t o b e s l i g h t l y d e g r a d e d w i t h a v e r y m i n u t e d i f f e r e n c e i n n o n - r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e s a s 2 . 3 % a n d f o r r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e w a s 2 . 4 % a f t e r 5 d a y s . T h e f a t c o n t e n t s t a r t e d t o d e g r a d e m o r e a f t e r 1 0 d a y s i n b o t h r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e . B o t h t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 . 1 % . A f t e r 1 5 d a y s , b o t h t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e s w e r e f o u n d t o b e s t i l l m o r e d e g r a d e d . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 8 % a n d 1 . 9 % f o r n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e s . E v a l u a t i o n o f A m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o n p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s : T h e r e w e r e n o d i s t i n c t d i f f e r e n c e o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o b s e r v e d i n a m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p a t e ( T a b l e 2 ) . P r o t e i n T h e P r o t e i n c o n t e n t i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e u n d e r r e f r i g e r a t i o n w a s f o u n d t o b e 2 2 . 3 % a n d w i t h o u t r e f r i g e r a t i o n w a s f o u n d t o b e 2 2 . 1 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e p r o t e i n c o n t e n t w a s f o u n d w i t h s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b o t h i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d w i t h t h e s a m e v a l u e a s 2 2 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e p r o t e i n h a s f o u n d t o b e s l i g h t l y d e g r a d e d i n b o t h t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e s w e r e f o u n d t o b e 2 1 . 9 % a n d 2 1 . 8 % . T o t a l A s h I n B a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e u n d e r r e f r i g e r a t i o n , i t w a s f o u n d t o b e 1 . 6 % a n d w i t h o u t r e f r i g e r a t i o n w a s a l s o f o u n d t o b e t h e s a m e a f t e r 5 d a y s . A f t e r 1 0 d a y s t h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n B a c t e r i o c i n r e f e r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 5 % a n d 1 . 4 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e r e s e e n a s l i g h t d e g r a d a t i o n i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e , b o t h r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 3 % a n d 1 . 3 % T o t a l S u g a r A f t e r 5 d a y s , t h e T o t a l s u g a r i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e u n d e r r e f r i g e r a t i o n a n d n o n - r e f r i g e r a t i o n w e r e f o u n d t o b e s a m e a n d i s n o t e d a s 5 . 4 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e r e w a s a s i g n i f i c a n t c h a n g e i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e w h e r e a s i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e s , i t w a s m a i n t a i n e d , t h e v a l u e s a r e r e c o r d e d a s 5 . 3 % a n d 5 . 4 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e T o t a l s u g a r c o n t e n t w a s f o u n d t o b e t h e s a m e i n b o t h b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e s . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 5 . 2 % i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e a d 5 . 3 % i n b a c t e r i o c i n t r e a d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e . N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 1 0 S . N o T r e a t m e n t P a r a m e t e r s C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n ( % ) a t d i f f e r e n t t i m e p e r i o d s ( d a y s ) 1 . C o n t r o l ( N o n - r e f r i g e r a t e d ) M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 1 0 1 5 6 0 . 5 2 0 . 1 1 1 . 6 4 . 2 2 . 5 5 8 . 4 1 5 1 . 4 3 . 5 2 . 2 5 5 . 5 1 1 . 2 1 . 2 2 . 5 1 . 9 2 . C o n t r o l R e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 5 8 . 9 2 1 . 8 1 . 8 5 . 4 2 . 4 5 6 . 5 2 1 . 6 1 . 7 5 . 2 2 . 4 5 0 . 3 2 1 . 4 1 . 4 5 . 0 2 . 3 3 . T e s t N o n - r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 1 . 1 2 2 . 2 1 . 7 5 . 4 2 . 4 7 0 . 9 2 2 1 . 7 5 . 4 2 . 2 7 0 . 6 2 1 . 8 1 . 5 5 . 3 2 . 1 4 . T e s t r e f r i g e r a t e d M o i s t u r e P r o t e i n T o t a l A s h T o t a l S u g a r F a t 7 0 . 8 2 2 . 3 1 . 8 5 . 4 2 . 4 7 0 . 7 2 2 . 1 1 . 8 5 . 4 2 . 3 7 0 . 6 2 2 1 . 7 5 . 4 2 . 3 T a b l e 3 . C h a n g e s i n P r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o f D i a l y s e d p r o d u c t b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s ( % )

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y M o i s t u r e A f t e r 5 d a y s , t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e s w a s f o u n d t o b e s a m e w i t h s m a l l d i f f e r e n c e i n t h e v a l u e s a s 7 1 . 1 % a n d 7 1 % . A f t e r 1 0 d a y s , b o t h b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e s w e r e f o u n d t o b e t h e s a m e a n d t h e v a l u e w a s 7 0 . 8 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e s w e r e f o u n d w i t h s m a l l d i f f e r e n c e a n d t h e i r v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 7 0 . 6 % a n d 7 0 . 5 % . F a t A f t e r 5 d a y s , t h e f a t c o n t e n t w a s f o u n d t o b e s l i g h t l y d e g r a d e d i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d i n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n s a m p l e t h e f a t c o n t e n t w a s m a i n t a i n e d . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 7 1 % a n d 7 1 . 1 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e r e w a s s t i l l m o r e c h a n g e s i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d i n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e , t h e r e w a s n o c h a n g e . T h e v a l u e s w e r e s a m e a n d r e c o r d e d a s 7 0 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e r e w a s f u r t h e r d e g r a d a t i o n i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d i n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e w a s f o u n d w i t h n e g o t i a b l e c h a n g e s . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 % a n d 2 . 2 % . E v a l u a t i o n o f D i a l y s e d f o r m o f b a c t e r i o c i n o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o n p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s : T h e r e w a s n o t m u c h d i f f e r e n c e o n p r o x i m a t e c o m p o s i t i o n o b s e r v e d i n P a r t i a l l y p u r i f i e d p r o d u c t . P r o t e i n A f t e r 5 d a y s , t h e r e w a s n o t m u c h c h a n g e i n p r o t e i n c o n t e n t i n b o t h b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e s . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 2 . 2 a n d 2 2 . 3 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e p r o t e i n c o n t e n t w a s m a i n t a i n e d w i t h o u t l i t t l e d e g r a d a t i o n b o t h i n b a c t e r i o c i n s t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 2 . 0 % a n d 2 2 . 1 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e p r o t e i n c o n t e n t w a s m a i n t a i n e d i n b o t h b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e s a n d t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 1 . 8 % a n d 2 2 % . T o t a l S u g a r A f t e r 5 d a y s , t h e t o t a l s u g a r c o n t e n t w a s f o u n d t o b e m a i n t a i n e d w i t h o u t d e g r a d a t i o n i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e . T h e v a l u e i s r e c o r d e d a s 5 . 4 % f o r b o t h t h e s a m p l e s . A f t e r 1 0 d a y s , t h e r e w e r e n o d e g r a d a t i o n f o u n d i n t o t a l s u g a r c o n t e n t i n b o t h b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e s . T h e v a l u e w a s r e c o r d e d a s 5 . 4 % f o r b o t h t h e s a m p l e s . A f t e r 1 5 d a y s , t h e r e w a s s t i l l n o m u c h c h a n g e i n t h e v a l u e s , f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e i t w a s 5 . 4 % a n d 5 . 3 % f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e . T o t a l A s h A f t e r 5 d a y s , t h e t o t a l a s h c o n t e n t w a s f o u n d t o b e n e a r l y s i m i l a r i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e s . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 7 % a n d 1 . 8 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e t o t a l a s h c o n t e n t w a s f o u n d t o b e m a i n t a i n e d i n b o t h t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e s . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 7 % a n d 1 . 8 % . A f t e r 1 5 d a y s , t h e t o t a l a s h c o n t e n t w a s f o u n d t o b e w i t h s l i g h t d i f f e r e n c e i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n - r e f r i g e r a t e d s a m p l e s b u t i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e t h e r e w a s n o c h a n g e i n f e r r e d . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 1 . 7 % a n d 1 . 8 % M o i s t u r e A f t e r 5 d a y s , t h e M o i s t u r e c o n t e n t i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d a n d r e f r i g e r a t e d s a m p l e h a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e . T h e v a l u e s w e r e f o u n d t o b e 7 0 . 8 % f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d a n d 7 1 . 1 % f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 0 d a y s , t h e m o i s t u r e c o n t e n t i n t h e b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e h a s v e r y s l i g h t d i f f e r e n c e w h e n c o m p a r e d t o r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d s a m p l e . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 7 0 . 9 % f o r n o n b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e a n d 7 0 . 7 % r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s , t h e m o i s t u r e c o n t e n t i n b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e h a s c o n s i d e r a b l e c h a n g e w h e n c o m p a r e d t o b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e . T h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 7 0 . 6 % a n d 7 0 . 6 % F a t A f t e r 5 d a y s , i n B a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d a n d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e s t h e r e w e r e n o c h a n g e a n d t h e v a l u e s w e r e f o u n d t o b e t h e s a m e a n d r e c o r d e d a s 2 . 4 % . A f t e r 1 0 d a y s , t h e r e w a s a s i g n i f i c a n t c h a n g e o b s e r v e d b o t h i n r e f r i g e r a t e d a n d n o n r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e a n d t h e v a l u e s w e r e r e c o r d e d a s 2 . 3 % f o r r e f r i g e r a t e d b a c t e r i o c i n t r e a t e d s a m p l e a n d 2 . 2 % f o r n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e . A f t e r 1 5 d a y s t h e v a l u e s w e r e m a i n t a i n e d i n b o t h t h e s a m p l e s a n d t h e v a l u e w a s r e v e a l e d a s 2 . 3 % f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d r e f r i g e r a t e d s a m p l e a n d f o r b a c t e r i o c i n t r e a t e d n o n r e f r i g e r a t e d s a m p l e w a s 2 . 1 % M i c r o b i a l A n a l y s i s : S i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e w a s o b s e r v e d i n b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d f o o d t h a n t h e c o n t r o l . T h e m i c r o b i a l g r o w t h w a s r e c o r d e d i n a l l t h e t e s t e d t i m e 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 1 2 T r e a t m e n t M i c r o b i a l C o u n t ( c f u / G . ) B a c t e r i a M o u l d a n d Y e a s t S p o r e f o r m e r s A n a e r o b e s C o l i f o r m 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 C o n t r o l ( N o n - R e f r i g e r a t e ) 1 0 . 1 x 1 0 2 1 5 . 1 x 1 0 4 2 5 . 1 x 1 0 6 7 x 1 0 3 1 4 . 1 x 1 0 4 1 7 . 2 x 1 0 2 2 . 5 X 1 0 3 X 1 0 4 6 X 1 O 2 - - - + + + C o n t r o l ( R e f r i g e r a t e d ) - 1 . 4 x 1 0 1 1 1 . 3 x 1 0 1 - - 3 . 1 x 1 0 1 - - - - - - + + + T e s t ( N o n - R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T e s t ( R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T a b l e 4 . M i c r o b i a l A n a l y s i s i n C r u d e B a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s T r e a t m e n t M i c r o b i a l C o u n t ( C F U / g . ) B a c t e r i a M o u l d a n d Y e a s t S p o r e f o r m e r s A n a e r o b e s C o l i f o r m 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 C o n t r o l ( N o n - R e f r i g e r a t e ) 1 0 . 1 x 1 0 2 1 5 . 1 x 1 0 4 2 5 . 1 x 1 0 6 7 x 1 0 3 1 4 . 1 x 1 0 4 1 7 . 2 x 1 0 2 2 . 5 X 1 0 3 X 1 0 4 6 X 1 O 2 - - - + + + C o n t r o l ( R e f r i g e r a t e d ) - 1 . 4 x 1 0 1 1 1 . 3 x 1 0 1 - - 3 . 1 x 1 0 1 - - - - - - + + + T e s t ( N o n - R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T e s t ( R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T a b l e 5 . M i c r o b i a l A n a l y s i s i n A m m o n i u m S u l p h a t e p r e c i p i t a t e s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y p e r i o d i n n o n - b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d f o o d ( T a b l e 4 , 5 a n d 6 ) . I n c o n t r o l n o n - r e f r i g e r a t e d : T h e b a c t e r i a l c o u n t a t 5 , 1 0 a n d 1 5 d a y s w e r e f o u n d t o b e 1 0 . 1 x 1 0 ² , 1 5 . 1 x 1 0 ² , 2 5 . 1 x 1 0 6 C f u / g T h e f u n g a l c o u n t a t 5 , 1 0 , a n d 1 5 d a y s w e r e f o u n d t o b e 7 . 0 x 1 0 4 , 1 4 . 1 x 1 0 4 , 1 7 . 2 x 1 0 5 C f u / g T h e s p o r e f o r m e r s c o u n t f o r 5 , 1 0 , 1 5 d a y s w e r e f o u n d t o b e 2 . 5 X 1 0 , 3 x 1 0 1 , 4 . 6 x 1 0 ² C f u / g . N i l c o u n t w a s r e c o r d e d i n a n a e r o b e s f o r 5 , 1 0 , 1 5 d a y s r e s p e c t i v e l y . T h e c o l i f o r m w a s f o u n d t o b e p o s i t i v e o n 5 , 1 0 , 1 5 d a y s r e s p e c t i v e l y . C o n t r o l r e f r i g e r a t e d T h e b a c t e r i a l c o u n t a t 5 , 1 0 a n d 1 5 d a y s w e r e r e c o r d e d a s 0 , 1 . 4 x 1 0 1 a n d 1 1 . 3 x 1 0 1 . C f u / g . T h e f u n g a l c o u n t a t 5 , 1 0 a n d 1 5 d a y s w e r e f o u n d t o b e 0 , 0 a n d 3 . 1 x 1 0 1 C f u / g N i l c o u n t w a s r e c o r d e d i n s p o r e f o r m e r s c o u n t f o r 5 , 1 0 a n d 1 5 d a y s r e s p e c t i v e l y N i l c o u n t w a s r e c o r d e d i n a n a e r o b e s f o r 5 , 1 0 a n d 1 5 d a y s r e s p e c t i v e l y . T h e c o l i f o r m w a s f o u n d t o b e p o s i t i v e o n 5 , 1 0 , 1 5 d a y s r e s p e c t i v e l y . I n b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d f o o d p r o d u c t s ( b o t h i n r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d ) n o g r o w t h w e r e r e c o r d e d i n a l l t h e t e s t e d t i m e p e r i o d a t b a c t e r i o c i n ( c r u d e , a m m o n i u m s u l p h a t e p r e c i p i t a t e , p a r t i a l l y d i a l y s e d p r o d u c t ) s u p p l e m e n t e d f o o d p r o d u c t s . D I S C U S S I O N B i o p r e s e r v a t i o n s y s t e m s s u c h a s b a c t e r i o c i n o g e n i c L A B c u l t u r e s a n d / o r t h e i r b a c t e r i o c i n s h a v e r e c e i v e d i n c r e a s i n g a t t e n t i o n , a n d n e w a p p r o a c h e s t o c o n t r o l p a t h o g e n i c a n d s p o i l a g e m i c r o o r g a n i s m s h a v e b e e n d e v e l o p e d . S o m e l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( L A B ) d e m o n s t r a t e d a n t a g o n i s m t o w a r d s p a t h o g e n i c a n d s p o i l a g e o r g a n i s m s . A l t h o u g h b a c t e r i o c i n s a r e p r o d u c e d b y m a n y G r a m - p o s i t i v e a n d G r a m - n e g a t i v e s p e c i e s , t h o s e p r o d u c e d b y L A B a r e o f p a r t i c u l a r i n t e r e s t t o t h e f o o d i n d u s t r y , s i n c e t h e s e b a c t e r i a h a v e g e n e r a l l y b e e n r e g a r d e d a s s a f e ( J o s h i e t a l . , 2 0 0 5 ) . B a c t e r i a l f e r m e n t a t i o n o f p e r i s h a b l e r a w m a t e r i a l s h a s b e e n u s e d f o r c e n t u r i e s t o p r e s e r v e t h e n u t r i t i v e v a l u e o f f o o d a n d b e v e r a g e s o v e r a n e x t e n d e d s h e l f l i f e . T h e p r o d u c t i o n o f b a c t e r i o c i n s b y L A B i s a d v a n t a g e o u s f o r s u r v i v a l o f t h e p r o d u c i n g b a c t e r i a i n a c o m p e t i t i v e e c o l o g i c a l n i c h e ; t h e r e f o r e , t h e y c o u l d b e e x p l o i t e d b y t h e f o o d i n d u s t r y a s a t o o l t o c o n t r o l u n d e s i r a b l e b a c t e r i a i n a f o o d - g r a d e a n d n a t u r a l m a n n e r , w h i c h i s l i k e l y t o b e m o r e a c c e p t a b l e t o c o n s u m e r s . F r o m t h i s s t u d y i t i s c l e a r t h a t . t h e b a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n , r e t a i n e d i t s o r i g i n a l p r o x i m a t e a n d n u t r i e n t c o m p o s i t i o n a t 1 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 T r e a t m e n t M i c r o b i a l C o u n t ( C F U / g . ) B a c t e r i a M o u l d a n d Y e a s t S p o r e f o r m e r s A n a e r o b e s C o l i f o r m 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 5 1 0 1 5 C o n t r o l ( N o n - R e f r i g e r a t e ) 1 0 . 1 x 1 0 2 1 5 . 1 x 1 0 4 2 5 . 1 x 1 0 6 7 x 1 0 3 1 4 . 1 x 1 0 4 1 7 . 2 x 1 0 2 2 . 5 X 1 0 3 X 1 0 4 6 X 1 O 2 - - - + + + C o n t r o l ( R e f r i g e r a t e d ) - 1 . 4 x 1 0 1 1 1 . 3 x 1 0 1 - - 3 . 1 x 1 0 1 - - - - - - + + + T e s t ( N o n - R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T e s t ( R e f r i g e r a t e d ) N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l N i l T a b l e 6 . M i c r o b i a l A n a l y s i s i n D i a l y s e d p r o d u c t B a c t e r i o c i n s u p p l e m e n t e d p r a w n a t d i f f e r e n t t i m e i n t e r v a l s

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y t e s t e d t i m e i n t e r v a l u n d e r r e f r i g e r a t e d a n d n o n - r e f r i g e r a t e d c o n d i t i o n s . T h i s s t u d y w i l l b e h e l p f u l t o u s e e x p l o i t b a c t e r i o c i n a s a f o o d p r e s e r v a t i v e t o p r e v e n t t h e m i c r o b i a l s p o i l a g e w i t h o u t o t h e r c o n v e n t i o n a l p r e s e r v a t i o n m e t h o d s . R E F E R E N C E S A P H A . 1 9 8 9 . C o m p e n d i u m o f m e t h o d s f o r t h e m i c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f f o o d . A m e r i c a n p u b l i c H e a l t h A s s a o c i a t i o n ( A P H A ) , W a s h i n g t o n D C 2 3 4 . C a p l i c e E a n d F i t z g e r a l d G F . 1 9 9 9 . F o o d f e r m e n t a t i o n s : r o l e o f m i c r o o r g a n i s m i n f o o d p r o d u c t i o n a n d p r e s e r v a t i o n . I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f F o o d M i c r o b i o l o g y 5 0 : 1 3 1 - 1 4 9 . C o r r C , L i Y , R e i d e l C , T o o l e P , H i l l C a n d G a h a n C . 2 0 0 7 . B a c t e r i o c i n p r o d u c t i o n a s a m e c h a n i s m f o r t h e a n t i i n f e c t i v e a c t i v i t y o f L a c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s U C C 1 1 8 . J o u r n a l o f A p p l i e d M i c r o b i o l o g y 8 6 : 1 0 2 3 - 1 0 4 1 . D e M a r t i n i s E C P , P ú b l i o M R P , S a n t a r o s a P R a n d F r e i t a s F Z . 2 0 0 1 . A n t i l i s t e r i a l a c t i v i t y o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a i s o l a t e d f r o m v a c u u m - p a c k a g e d B r a z i l i a n m e a t a n d m e a t p r o d u c t s . B r a z i l i a n J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y 3 2 : 3 2 - 3 7 . J a c k R W , T a g g J R a n d R a y B . 1 9 9 5 . B a c t e r i o c i n o f G r a m - P o s i t i v e b a c t e r i a . M i c r o b i o l o g y r e v i e w s a n d M o l e c u l a r B i o l o g y r e v i e w s 5 9 : 1 7 1 - 2 0 0 . J o s h i V D , S h a r m a S a n d R a n a S . 2 0 0 5 . P r o d u c t i o n , P u r i f i c a t i o n , S t a b i l i t y a n d E f f i c a c y o f B a c t e r i o c i n f r o m i s o l a t e s o f N a t u r a l L a c t i c A c i d F e r m e n t a t i o n o f V e g e t a b l e s . J o u r n a l o f F o o d T e c h n o l o g y A n d B i o t e c h n o l o g y 4 4 : 4 3 5 - 4 3 9 . N e y s e n s P , M e s s e n s W , G e r v e r s D , S w i n g s J a n d V u y s t D . 2 0 0 2 . B i p h a s i c k i n e t i c s o f g r o w t h a n d b a c t e r i o c i n p r o d u c t i o n w i t h L a c t o b a c i l l u s a m y l o v o r u s D C E 4 7 1 o c c u r u n d e r s t r e s s c o n d i t i o n s . J o u r n a l o f g e n e r a l M i c r o b i o l o g y 1 4 9 : 1 0 7 3 - 1 0 8 2 . N a m a s i v a y a m e t a l . , 2 0 1 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 6 - 1 4 1 4