J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h p a p e r J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y 1 - 5 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 1 © F i c u s P r e s s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p r e s s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m E v a l u a t i o n o f A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f M e d i c i n a l P l a n t s o n F i s h P a t h o g e n A e r o m o n a s h y d r o p h i l a J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : A b d u l K a d e r M y d e e n K P . H a n i f f a M A . I n s t i t u t i o n : C e n t r e f o r A q u a c u l t u r e R e s e a r c h a n d E x t e n s i o n ( C A R E ) , S t . X a v i e r s C o l l e g e ( A u t o n o m o u s ) , P a l a y a m k o t t a i - 6 2 7 0 0 2 , T a m i l N a d u , I N D I A . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : A b d u l K a d e r M y d e e n K P E m a i l : a b d u l m i c r o 2 0 0 0 @ y a h o o . c o m P h o n e N u m b e r : W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / B 0 0 0 0 0 1 . p d f . A B S T R A C T : T h i s s t u d y e v a l u a t e d t h e a n t i m i c r o b i a l p o t e n c y o f a q u e o u s e x t r a c t o f t h r e e c o m m o n m e d i c i n a l h e r b s , A z a d i r a c h t a i n d i c a ( N e e m l e a v e s ) , S o l a n u m t o r v u m ( S u n d a k a i f r u i t c o a t ) a n d C u r c u m a l o n g a ( T u r m e r i c , r h i z o m e ) a g a i n s t t h e i n v i t r o g r o w t h o f p a t h o g e n i c b a c t e r i u m A e r o m o n a s h y d r o p h i l a i s o l a t e d f r o m i n f e c t e d f r e s h - w a t e r f i s h , C h a n n a s t r i a t u s w a s a s s e s s e d b y d i s c d i f f u s i o n a s s a y . D e t e r m i n a t i o n o f m i n i m u m i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n ( M I C ) f o r e a c h a q u e o u s h e r b a l e x t r a c t w a s d o n e o n M u l l e r H i n t o n a g a r s w a b b e d w i t h 0 . 5 m l o f o v e r n i g h t c u l t u r e o f A . h y d r o p h i l a ( 1 0 6 c f u / m l ) . A f t e r i n c u b a t i o n p e r i o d , z o n e s o f i n h i b i t i o n a r o u n d h e r b a l e x t r a c t s i n c o r p o r a t e d d i s c s w e r e m e a s u r e d . T h e s t r o n g e s t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t i e s a m o n g a l l p l a n t s p e c i e s w e r e o b t a i n e d b y t h e a q u e o u s e x t r a c t o f A . i n d i c a w i t h i n h i b i t i o n z o n e o f 1 8 m m a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . S . t o r v u m d e m o n s t r a t e d m o d e r a t e ( 1 1 m m ) a n d C . l o n g a m a r k e d w e a k ( 8 m m ) i n h i b i t i n g a c t i v i t y a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . K e y w o r d s : A z a d i r a c h t a i n d i c a , S o l a n u m t o r v u m , C u r c u m a l o n g a , A e r o m o n a s h y d r o p h i l a , a n t i - b a c t e r i a l a c t i v i t y . D a t e s : R e c e i v e d : 2 0 J a n 2 0 1 1 A c c e p t e d : 3 0 J a n 2 0 1 1 P u b l i s h e d : 0 5 F e b 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : A b d u l K a d e r M y d e e n K P a n d H a n i f f a M A . E v a l u a t i o n o f A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f M e d i c i n a l P l a n t s o n F i s h P a t h o g e n A e r o m o n a s h y d r o p h i l a . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 1 - 5

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y I N T R O D U C T I O N A q u a c u l t u r e h a s b e e n a g r o w i n g a c t i v i t y f o r t h e l a s t t w e n t y y e a r s w o r l d w i d e a n d t h i s i m p r e s s i v e d e v e l o p m e n t h a s b e e n a t t e n d e d b y s o m e p r a c t i c e s p o t e n t i a l l y d a m a g i n g t o a n i m a l h e a l t h ( N a y l o r a n d B u r k e , 2 0 0 5 ) . T h e l a r g e - s c a l e s e t t i n g s o f a q u a t i c a n i m a l h u s b a n d r y h a v e r e s u l t e d i n a n i n c r e a s e d a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e i n b a c t e r i a p o t e n t i a l l y p a t h o g e n i c t o f i s h a n d r e l a t e d e n v i r o n m e n t ( A l c a i d e e t a l . , 2 0 0 5 ; C a b e l l o , 2 0 0 6 ) . T h e c o n t i n u o u s u s e o f a n t i m i c r o b i a l a g e n t s i n a q u a c u l t u r e h a s r e s u l t e d i n m o r e r e s i s t a n t b a c t e r i a l s t r a i n s i n t h e a q u a t i c e n v i r o n m e n t ( M u n i r u z z a m a n a n d C h o w d h u r y , 2 0 0 4 ) . T r e a t m e n t s o f b a c t e r i a l d i s e a s e s w i t h v a r i o u s h e r b s h a v e b e e n s a f e l y u s e d w i d e l y i n o r g a n i c a g r i c u l t u r e ( D i r e k b u s a r a k o m , 2 0 0 4 ) . S i n c e a n c i e n t t i m e s , m e d i c i n a l p l a n t s h a v e b e e n u s e d f o r t h e t r e a t m e n t o f c o m m o n i n f e c t i o u s d i s e a s e s ( R i o s a n d R e c i o , 2 0 0 5 ) a n d t r e a t m e n t s w i t h p l a n t s h a v i n g a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a r e a p o t e n t i a l l y b e n e f i c i a l a l t e r n a t i v e i n a q u a c u l t u r e ( A b u t b u l e t a l . , 2 0 0 5 ) . I n a d d i t i o n , p l a n t - d e r i v e d p h y t o m e d i c i n e s p r o v i d e a c h e a p e r s o u r c e f o r t r e a t m e n t a n d g r e a t e r a c c u r a c y t h a n c h e m o t h e r a p e u t i c a g e n t s i n t h i s f i e l d ( P u n i t h a e t a l . , 2 0 0 8 ) . A e r o m o n a s h y d r o p h i l a , t h e m o s t c o m m o n b a c t e r i a l p a t h o g e n i n f r e s h w a t e r f i s h , h a s b e e n r e c o g n i z e d t o b e t h e a e t i o l o g i c a l a g e n t o f s e v e r a l d i s t i n c t p a t h o l o g i c a l c o n d i t i o n s i n c l u d i n g t a i l r o t , m o t i l e A e r o m o n a s s e p t i c e m i a ( M A S ) a n d e p i z o o t i c u l c e r a t i v e s y n d r o m e ( E U S ) a s a p r i m a r y p a t h o g e n ( R o b e r t s e t a l . , 1 9 9 2 ) . E U S i s a g l o b a l l y d i s t r i b u t e d d i s e a s e a n d h a s b e c o m e a n e p i d e m i c a f f e c t i n g a w i d e v a r i e t y o f w i l d a n d c u l t u r e d f i s h s p e c i e s ( R o b e r t s e t a l . , 1 9 9 2 ) e s p e c i a l l y i n S o u t h e a s t A s i a i n c l u d i n g P a k i s t a n ( L i l l e y e t a l . , 1 9 9 7 ) a n d I n d i a ( V i s h w a n a t h e t a l . , 1 9 9 7 ) . T h e a b i l i t y o f h e r b s t o i n h i b i t a c t i v i t y o f b a c t e r i a h a v i n g p o t e n t i a l i n t e r e s t a s f i s h p a t h o g e n s h a s b e e n d o c u m e n t e d ( B a n s e m i r e t a l . , 2 0 0 6 ; D u b b e r a n d H a r d e r , 2 0 0 8 ) . T h e r e f o r e , t h e o b j e c t i v e o f t h e p r e s e n t s t u d y w a s t o e v a l u a t e t h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f a q u e o u s e x t r a c t s o f A z a d i r a c h t a i n d i c a ( n e e m , l e a v e s ) S o l a n u m t o r v u m ( s u n d a k a i , f r u i t c o a t ) a n d C u r c u m a l o n g a ( t u r m e r i c , r h i z o m e ) o n m o s t f r e q u e n t l y i s o l a t e d b a c t e r i u m i n a q u a c u l t u r e i n d u s t r y , A . h y d r o p h i l a . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S P l a n t m a t e r i a l a n d e x t r a c t i o n A . i n d i c a , S . t o r v u m a n d C . l o n g a w e r e c o l l e c t e d f r o m A g r i c u l t u r e c o l l e g e c a m p u s , K i l l i k u l a m , T i r u n e l v e l i , I n d i a . T h e y w e r e s u r f a c e - s t e r i l i z e d s e p a r a t e l y w i t h 0 . 1 % m e r c u r i c c h l o r i d e ( w / v ) s o l u t i o n f o r 1 0 m i n a n d w a s h e d t h o r o u g h l y i n r u n n i n g t a p w a t e r f o r 1 0 m i n , f o l l o w e d b y s h a d e d r y i n g f o r a b o u t 1 0 d a y s u n t i l w e i g h t c o n s t a n c y w a s a c h i e v e d ( H o b b s , 1 9 9 4 ) . E a c h s a m p l e w a s f i n e l y p o w d e r e d i n a n e l e c t r i c b l e n d e r . F o r a q u e o u s e x t r a c t i o n , t w e n t y g r a m s f r o m e a c h p o w d e r e d p l a n t s a m p l e w e r e e x t r a c t e d w i t h 2 0 0 m l w a t e r a t 8 0 ° C i n a w a t e r b a t h f o r 1 2 h o u r s a n d t h e n f i l t e r e d . W a t e r w a s e v a p o r a t e d u s i n g a l y o p h i l i z a t o r . A n t i b a c t e r i a l A s s a y T h e d i s c d i f f u s i o n a s s a y ( K i r b y - B a u e r M e t h o d ) w a s u s e d t o s c r e e n t h e h e r b a l e x t r a c t s f o r a n t i b i o t i c a c t i v i t y ( P r e s c o t t e t a l . , 1 9 9 0 ) . A e r o m o n a s h y d r o p h i l a i s o l a t e d f r o m i n f e c t e d f r e s h w a t e r f i s h , C h a n n a s t r i a t u s ( F i g u r e : 1 ) . P u r e c u l t u r e o f A . h y d r o p h i l a w a s g r o w n o n T r y p t i c S o y A g a r ( T S A , H i m e d i a ) p l a t e a n d i n c u b a t e d f o r 2 d a y s a t 3 7 ° C . 3 - 4 c o l o n i e s w e r e t r a n s f e r r e d i n t o c u l t u r e t u b e c o n t a i n i n g 5 m l s t e r i l e T r y p t i c S o y B r o t h ( T S B , H i m e d i a ) a n d w a s i n c u b a t e d f o r 2 4 h o u r s a t 3 7 ° C . A l l e x t r a c t s w e r e s t e r i l i z e d b y f i l t e r i n g t h r o u g h a 0 . 2 2 μ m f i l t e r ( M i l l i p o r e ) . T o d e t e r m i n e m i n i m u m i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n ( M I C ) , d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f e a c h h e r b a l e x t r a c t w a s p r e p a r e d ( 1 0 p p m , 2 0 p p m , 3 0 p p m , 4 0 p p m a n d 5 0 p p m ) a n d w e r e i m p r e g n a t e d o n 5 m m s t e r i l e W h a t m a n N o . 1 f i l t e r p a p e r d i s c . T h e n d i s c s w e r e p l a c e d o n M u l l e r H i n t o n a g a r ( H i - m e d i a ) a n d p l a t e s w e r e s w a b b e d w i t h 0 . 5 m l o f o v e r n i g h t c u l t u r e o f A . h y d r o p h i l a ( 1 0 6 c f u / m l ) . O x y t e t r a c y c l i n e a n d u n l o a d e d d i s c w e r e u s e d a s a p o s i t i v e a n d n e g a t i v e c o n t r o l r e s p e c t i v e l y ( L e n e t t e e t a l . , 1 9 8 5 ) . E a c h a n t i b a c t e r i a l a s s a y w a s p e r f o r m e d i n t r i p l i c a t e . T h e d i a m e t e r o f t h e i n h i b i t i o n z o n e ( m m ) w a s m e a s u r e d ( J i n e t a l . , 1 9 9 6 ) a f t e r 1 6 t o 1 8 h o f i n c u b a t i o n a t 3 7 ° C i n a n i n c u b a t o r a n d t h e M I C f o r e a c h h e r b w a s o b s e r v e d a n d r e c o r d e d ( T a b l e : 1 ) . I n h i b i t i o n z o n e s m o r e t h a n 1 1 m m w e r e s t a t e d a s s t r o n g , f r o m 9 t o 1 1 m m a s m o d e r a t e a n d l e s s t h a n 9 m m a s w e a k a c t i v i t i e s . R E S U L T S T h e p r e s e n t s t u d y w a s a t t e m p t e d t o f i n d o u t t h e a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f A . i n d i c a , S . t o r v u m a n d C . l o n g a a t d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s a g a i n s t t h e f i s h p a t h o g e n A . h y d r o p h i l a . T h e r e s u l t s o f a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f h e r b s a g a i n s t A . h y d r o p h i l a a r e s u m m a r i z e d i n T a b l e 1 . A . i n d i c a , S . t o r v u m a n d C . l o n g a e x h i b i t e d z o n e o f i n h i b i t i o n a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . T h e s t r o n g e s t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t i e s a m o n g a l l p l a n t s p e c i e s w e r e o b t a i n e d b y t h e 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 1 - 5 M y d e e n e t a l . , 2 0 1 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 1 - 5 3 a q u e o u s e x t r a c t o f A . i n d i c a w i t h i n h i b i t i o n z o n e o f 1 8 m m a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . S . t o r v u m d e m o n s t r a t e d m o d e r a t e ( 1 1 m m ) a n d C . l o n g a m a r k e d w e a k ( 8 m m ) i n h i b i t i n g a c t i v i t y a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . H e r b a l d i s c s o f A i n d i c a ( 1 0 p p m ) , S . t o r v u m ( 1 0 a n d 2 0 p p m ) a n d C . l o n g a ( 1 0 a n d 2 0 p p m ) , d i d n t p r o d u c e z o n e s o f i n h i b i t i o n a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . P o s i t i v e c o n t r o l ( O x y t e t r a c y c l i n e ) s h o w e d a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y t o A . h y d r o p h i l a a n d t h e r e w a s n o i n h i b i t i o n w i t h n e g a t i v e c o n t r o l . D I S C U S S I O N P a r a l l e l t o i n c r e a s i n g t h e r e s i s t a n c e o f m i c r o o r g a n i s m s t o t h e c u r r e n t l y u s e d a n t i b i o t i c s a n d t h e c o s t o f p r o d u c t i o n o f s y n t h e t i c c o m p o u n d s , p h a r m a c e u t i c a l c o m p a n i e s a r e n o w l o o k i n g f o r a l t e r n a t i v e s . M e d i c i n a l p l a n t s c o u l d b e o n e a p p r o a c h b e c a u s e m o s t o f t h e m a r e s a f e , c o s t l e s s a n d e f f e c t i v e a g a i n s t a w i d e r a n g e o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n t m i c r o o r g a n i s m s . S e y y e d n e j a d e t a l . , ( 2 0 0 8 ) s h o w e d t h a t e t h a n o l i c e x t r a c t o f P r u n u s m a h a l e b i n h i b i t e d t h e g r o w t h o f v a r i o u s s p e c i e s o f G r a m p o s i t i v e a n d G r a m n e g a t i v e b a c t e r i a . A q u e o u s e x t r a c t o f t h e n e e m i s r e p o r t e d l y p o s s e s s i n g a n t i - i n f l a m m a t o r y , a n t i m i c r o b i a l a n d i m m u n o m o d u l a t o r y a c t i v i t i e s ( V a n D e r N a t e t a l . , 1 9 8 7 ) . W a f a a e t a l . , ( 2 0 0 7 ) r e p o r t e d t h e a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i f u n g a l a c t i v i t i e s o f t h e n a t i v e a n d c h e m i c a l l y m o d i f i e d e x t r a c t s f r o m n e e m s e e d s , s e e d - h u l l s a n d l e a v e s . I n t h e p r e s e n t s t u d y , A . h y d r o p h i l a s h o w e d 1 8 m m z o n e o f i n h i b i t i o n a t a c o n c e n t r a t i o n o f 5 0 p p m a g a i n s t n e e m e x t r a c t . S i m i l a r l y , D h a y a n i t h i e t a l . , ( 2 0 1 0 ) s h o w e d E n t e r o b a c t e r s p a n d E s c h e r i c h i a c o l i i s o l a t e d f r o m m a r i n e f i s h , A m p h i p r i o n s e b a e s h o w e d 1 5 m m z o n e o f i n h i b i t i o n a g a i n s t n e e m e x t r a c t . I n t h e p r e s e n t s t u d y , A . h y d r o p h i l a w a s s u s c e p t i b l e t o e x t r a c t o f S . t o r v u m f r u i t c o a t a n d p r o d u c e d z o n e o f i n h i b i t i o n o f 1 1 m m . S i m i l a r l y , S i v a p r i y a e t a l . , ( 2 0 1 0 ) s t a t e d t h a t e x t r a c t s o f S . t o r v u m f r u i t c o a t e x h i b i t e d s i g n i f i c a n t a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t E s c h e r i c h i a c o l i , V i b r i o c h o l e r a e , S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , B a c i l l u s s u b t i l i s , S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m a n d P s e u d o m o n a s s p a n d t h e s e e x t r a c t s w e r e a s p o t e n t a s s t a n d a r d a n t i b i o t i c s , c h l o r a m p h e n i c o l a n d s t r e p t o m y c i n . T h e r e f o r e S . t o r v u m f r u i t c o a t m a y b e y e t a n o t h e r s o u r c e o f n a t u r a l a n t i b i o t i c . W a f a a e t a l . , ( 2 0 0 7 ) c o n f i r m e d t h a t n a t i v e e x t r a c t s o f A . i n d i c a l e a v e s w i t h c o n c e n t r a t i o n o f 2 0 p p m a r e i n h i b i t o r y t o S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , E . c o l i , C a n d i d a a l b i c a n s , A s p e r g i l l u s n i g e r a n d P e n i c i l i u m c i t r i n u m . T h e a q u e o u s A . i n d i c a l e a f e x t r a c t h a s b e e n t e s t e d a g a i n s t A . h y d r o p h i l a i n f e c t i o n i n c o m m o n c a r p , C y p r i n u s c a r p i o a n d t h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h i s p l a n t c o u l d e f f e c t i v e l y c o n t r o l A h y d r o p h i l a i n f e c t i o n i n C . c a r p i o ( H a r i k r i s h n a n e t a l . , 2 0 0 3 ) . S i m i l a r l y , J u n a i d e t a l . , ( 2 0 0 6 ) e v a l u a t e d a n t i m i c r o b i a l e f f i c a c y o f w a t e r , h e x a n e a n d m e t h a n o l i c e x t r a c t s o f f r e s h l e a f o f O c i m u m g r a t i s s i m u m a g a i n s t A . h y d r o p h i l a , S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m , E s c h e r i c h i a c o l i , Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a , a n d B a c i l l u s c e r e u s w e r e d e t e r m i n e d u s i n g t h e a g a r g e l d i f f u s i o n m e t h o d . R e s u l t s o b t a i n e d r e v e a l e d t h a t t h e w a t e r e x t r a c t s o f t h e f r e s h l e a v e s o f O . g r a t i s s i m u m w a s m o s t p o t e n t , i n h i b i t i n g a l l i s o l a t e s w i t h d i a m e t e r z o n e s o f i n h i b i t i o n r a n g i n g f r o m 5 m m t o 1 8 m m , f o l l o w e d b y h e x a n e e x t r a c t o f t h e f r e s h l e a v e s w i t h z o n e r a n g i n g f r o m 6 m m t o 1 4 m m w h e r e a s m e t h a n o l e x t r a c t o f t h e f r e s h l e a f s h o w e d n o i n h i b i t o r y e f f e c t o n a l l i s o l a t e s . A m a l e t a l . , ( 2 0 0 7 ) e v a l u a t e d t h e a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y o f i n d i g e n o u s J o r d a n i a n p l a n t e x t r a c t s o f H y p e r i c u m t r i q u e t r i f o l i u m , B a l l o t a u n d u l a t a , R u t a c h a l e p e n s i s , O n o n i s n a t r i x , P a r o n y c h i a a r g e n t e a a n d M a r r u b i u m v u l g a r e a g a i n s t p a t h o g e n i c b a c t e r i a , B a c i l l u s s u b t i l i s , S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , E s c h e r i c h i a c o l i a n d M y d e e n e t a l . , 2 0 1 1 T a b l e : 1 A n t i b i o t i c s e n s i t i v i t y o f A e r o m o n a s h y d r o p h i l a a g a i n s t H e r b s ( V a l u e s a r e m e a n ± S D ) . - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - N a m e o f C o n c e n t r a t i o n A e r o m o n a s h y d r o p h i l a t h e h e r b ( 1 0 6 c f u / m l ) - Z o n e o f i n h i b i t i o n i n m m - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - A z a d i r a c h t a i n d i c a 1 0 p p m 0 2 0 p p m 5 ± 0 . 8 3 0 p p m 1 0 ± 1 . 1 4 0 p p m 1 3 ± 0 . 9 5 0 p p m 1 8 ± 1 . 2 S o l a n u m t o r v u m 1 0 p p m 0 2 0 p p m 0 3 0 p p m 4 ± 0 . 6 4 0 p p m 7 ± 0 . 8 5 0 p p m 1 1 ± 0 . 9 C u r c u m a l o n g a 1 0 p p m 0 2 0 p p m 0 3 0 p p m 0 4 0 p p m 3 ± 0 . 6 5 0 p p m 8 ± 1 . 2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a a n d r e p o r t e d t h a t a l l t h e s e e x t r a c t s h a d s h o w n p r o m i s i n g a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y o n a l l i s o l a t e s . F r o m t h i s s t u d y , i t w a s p r o v e d t h a t a m o n g t h e t h r e e h e r b s , e x t r a c t o f A . i n d i c a w a s v e r y e f f e c t i v e a g a i n s t A . h y d r o p h i l a . H e a v y a n t i b i o t i c s u s e d i n a q u a c u l t u r e n e e d t o b e r e d u c e d a n d r e p l a c e d w i t h a l t e r n a t i v e p r o c e s s e s f o r t r e a t i n g f i s h d i s e a s e s t o a v o i d t h e e m e r g e n c e o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e i n p a t h o g e n i c a n d e n v i r o n m e n t a l b a c t e r i a ( S o r u m a n d L A b e e - L u n d , 2 0 0 2 ; C a b e l l o , 2 0 0 6 ) . T h e h e r b a l p l a n t s m a y b e u s e d a s p o t e n t i a l a n d p r o m i s i n g s o u r c e o f p h a r m a c e u t i c a l a g e n t s a g a i n s t f i s h p a t h o g e n s i n t h e o r g a n i c a q u a c u l t u r e . T h e s c r e e n i n g r e s u l t s o f o u r s t u d y c o n f i r m t h e p o s s i b l e u s e o f m e d i c i n a l h e r b s a s a s o u r c e o f a n t i m i c r o b i a l a g e n t . A C K N O W L E D G E M E N T T h e a u t h o r s t h a n k t o R e v . D r . A l p h o n s e M a n i k a m S . J . , P r i n c i p a l S t . X a v i e r s C o l l e g e , P a l a y a m k o t t a i , T a m i l n a d u , I n d i a f o r p r o v i d i n g n e c e s s a r y f a c i l i t i e s . R E F E R E N C E S A b u t b u l S , G o l a n - G o l d h i r s h A , B a r a z a n i O , O f i r R a n d Z i l b e r g D . 2 0 0 5 . S c r e e n i n g o f d e s e r t p l a n t s f o r u s e a g a i n s t b a c t e r i a l p a t h o g e n s i n f i s h . I s r . J . A q u a c u l t . - B a m i d . , 5 7 ( 2 ) : 7 1 - 8 0 . A l c a i d e E , B l a s c o M D a n d E s t e v e C . 2 0 0 5 . O c c u r r e n c e o f d r u g - r e s i s t a n t b a c t e r i a i n t w o E u r o p e a n e e l f a r m s . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , 7 1 : 3 3 4 8 3 3 5 0 . A m a l G , A l - B a k r i a n d F a t m a U . A f i f i ( 2 0 0 7 ) . E v a l u a t i o n o f a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y o f s e l e c t e d p l a n t e x t r a c t s b y r a p i d X T T c o l o r i m e t r y a n d b a c t e r i a l e n u m e r a t i o n . J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g i c a l M e t h o d s , V o l u m e 6 8 , I s s u e 1 , J a n u a r y 2 0 0 7 , P a g e s 1 9 - 2 5 . B a n s e m i r A , B l u m e M , S c h r ö d e r S a n d L i n d e q u i s t U . 2 0 0 6 . S c r e e n i n g o f c u l t i v a t e d s e a w e e d s f o r a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a g a i n s t f i s h p a t h o g e n i c b a c t e r i a . A q u a c u l t u r e , 2 5 2 : 7 9 8 4 . C a b e l l o F C . 2 0 0 6 . H e a v y u s e o f p r o p h y l a c t i c a n t i b i o t i c s i n a q u a c u l t u r e : A g r o w i n g p r o b l e m f o r h u m a n a n d a n i m a l h e a l t h a n d f o r t h e e n v i r o n m e n t . E n v i r o n . M i c r o b i o l . , 8 ( 7 ) : 1 1 3 7 - 1 1 4 4 . D h a y a n i t h i N B , A j i t h K u m a r T T a n d K a t h i r e s a n K . E f f e c t o f n e e m e x t r a c t a g a i n s t t h e b a c t e r i a i s o l a t e d f r o m m a r i n e f i s h J o u r n a l o f E n v i r o n m e n t a l B i o l o g y J u l y 2 0 1 0 , 3 1 , 4 0 9 - 4 1 2 ( 2 0 1 0 ) . D i r e k b u s a r a k o m S . 2 0 0 4 . A p p l i c a t i o n o f m e d i c i n a l h e r b s t o a q u a c u l t u r e i n A s i a . W a l a i l a k J o u r n a l o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y , 1 ( 1 ) : 7 1 4 . D u b b e r D a n d H a r d e r T . 2 0 0 8 . E x t r a c t s o f C e r a m i u m r u b r u m , M a s t o c a r p u s s t e l l a t u s a n d L a m i n a r i a d i g i t a t a i n h i b i t g r o w t h o f m a r i n e a n d f i s h p a t h o g e n i c b a c t e r i a a t e c o l o g i c a l l y r e a l i s t i c c o n c e n t r a t i o n s . A q u a c u l t u r e , 2 7 4 : 1 9 6 2 0 0 . H a r i k r i s h n a n R , N i s h a R a n i M a n d B a l a s u n d a r a m C . 2 0 0 3 . H e m a t o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l p a r a m e t e r s i n c o m m o n c a r p , C y p r i n u s c a r p i o , f o l l o w i n g h e r b a l t r e a t m e n t f o r A e r o m o n a s h y d r o p h i l a i n f e c t i o n . A q u a c u l t u r e , v o l . 2 2 1 , n o . 1 - 4 , p . 4 1 - 5 0 . H o b b s C . E c h i n a c e a : A l i t e r a t u r e r e v i e w . S p e c i a l S u p p l e m e n t t t o H e r b a l G r a m 1 9 9 4 , 3 0 , 3 3 - 4 8 . J i n L Z , H O Y M a n d J a l a l u d i n S . 1 9 9 6 . A n t a g o n i s t i c e f f e c t s o f i n t e s t i n a l L a c t o b a c i l l u s i s o l a t e s o n p a t h o g e n s o f c h i c k e n . L e t t . i n A p p l . M i c r o b i o l . 2 3 , 6 3 7 1 . J u n a i d S A A O O l a b o d e , F C O n w u l i r i , A E J O k w o r i , S E A g i n a . ( 2 0 0 6 ) T h e a n t i m i c r o b i a l p r o p e r t i e s o f O c i m u m g r a t i s s i m u m e x t r a c t s o n s o m e s e l e c t e d b a c t e r i a l g a s t r o i n t e s t i n a l i s o l a t e s . A f r i c a n J o u r n a l o f B i o t e c h n o l o g y . V o l 5 , N o 2 2 I S S N : 1 6 8 4 - 5 3 1 5 . L e n e t t e E H , B a l o w s A , J r . H a u s l e r W A a n d S h a d o m y H . J . M a n u a l o f c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y ( E d s . ) 4 t h E d n . A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y , W a s h i n g t o n ( 1 9 8 5 ) . L i l l e y J H , P h i l l i p s M J a n d T o n g u t h a i K . 1 9 9 7 . A r e v i e w o f e p i z o o t i c u l c e r a t i v e s y n d r o m e ( E U S ) i n A s i a . A q u a t i c A n i m a l H e a l t h R e s e a r c h I n s t i t u t e a n d N e t w o r k o f A q u a c u l t u r e C e n t r e s i n A s i a - P a c i f i c , B a n g k o k . M u n i r u z z a m a n M a n d C h o w d h u r y M B R . 2 0 0 4 . S e n s i t i v i t y o f f i s h p a t h o g e n i c b a c t e r i a t o v a r i o u s m e d i c i n a l h e r b s . B a n g l a d e s h J o u r n a l o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e , 2 ( 1 ) : 7 5 - 8 2 . N a y l o r R a n d B u r k e M . 2 0 0 5 . A q u a c u l t u r e a n d o c e a n r e s o u r c e s : r a i s i n g t i g e r s o f t h e s e a . A n n u a l R e v i e w o f E n v i r o n m e n t a l R e s o u r c e s , 3 0 : 1 8 5 2 1 8 . 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 1 - 5 M y d e e n e t a l . , 2 0 1 1

J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 1 : 1 - 5 5 P r e s c o t t L M , H a r l e y J P a n d K l e i n D A . 1 9 9 0 . M i c r o b i o l o g y , W m . C . B r o w n P u b l i s h e r s , D u b u q u e , I A , U S A . P u n i t h a S M J , B a b u M M , S i v a r a m V , S h a n k a r V S , D h a s S A , M a h e s h T C , I m m a n u e l G . a n d C i t a r a s u T . 2 0 0 8 . I m m u n o s t i m u l a t i n g i n f l u e n c e o f h e r b a l b i o m e d i c i n e s o n n o n s p e c i f i c i m m u n i t y i n G r o u p e r E p i n e p h e l u s t a u v i n a j u v e n i l e a g a i n s t V i b r i o h a r v e y i i n f e c t i o n . A q u a c u l t . I n t . , 1 6 : 5 1 1 5 2 3 . R i o s J L a n d R e c i o M C . 2 0 0 5 . M e d i c i n a l p l a n t s a n d a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y . J . E t h n o p h a r m a c o l . , 1 0 0 : 8 0 - 8 4 . R o b e r t s R J , F r e r i c h s G N , M i l l e r S D . E p i z o o t i c u l c e r a t i v e s y n d r o m e , t h e c u r r e n t p o s i t i o n . I n : D i s e a s e s i n A s i a n A q u a c u l t u r e . I . F i s h H e a l t h S e c t i o n . E d i t e d b y S h a r i f f M . , S u b a s i n g h e R . P . , a n d A r t h u r J . R . , A s i a n F i s h e r i e s S o c i e t y , M a n i l a , 1 9 9 2 , p p . 4 3 1 - 4 3 6 . S e y y e d n e j a d M , E b r a h i m z a d e h H a n d T a l a i e A . 2 0 0 1 . C a r b o h y d r a t e c o n t e n t i n o l i v e z a r d c . v . a n d a l t e r n a t e b e a r i n g p a t t e r n . J . i n t . s u g a r , 1 0 3 ( 1 2 2 6 ) : 8 4 - 8 7 . S i v a p r i y a M , D i n e s h a R , H a r s h a R , G o w d a S S T a n d S r i n i v a s L . A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y o f d i f f e r e n t e x t r a c t s o f S u n d a k a i ( S o l a n u m t o r v u m ) f r u i t c o a t , I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l C h e m i s t r y 5 ( 1 ) : 6 5 - 6 7 , 2 0 1 0 . S ø r u m H a n d L A b é e - L u n d T M . 2 0 0 2 . A n t i b i o t i c r e s i s t a n c e i n f o o d - r e l a t e d b a c t e r i a a r e s u l t o f i n t e r f e r i n g w i t h t h e g l o b a l w e b o f b a c t e r i a l g e n e t i c s . I n t . J . F o o d . M i c r o b i o l . , 7 8 : 4 3 5 6 . V a n D e r N a t M G , V a n D e r S l u i s K T D a n d L a b a d i e R P . 1 9 9 1 . E t h n o p h o r m o - c o g n o s t i c a l s u r v e y o f A . i n d i c a J u s s ( M a l i a c e a e ) . J E t h n o p h a r m a c o l . , 3 5 : 1 2 4 . V i s h w a n a t h T S , M o h a n C V , S h a n k a r K M . M y c o t i c g r a n u l o m a t o s i s a n d s e a s o n a l i t y a r e t h e c o n s i s t e n t f e a t u r e s o f e p i z o o t i c u l c e r a t i v e s y n d r o m e ( E U S ) i n f r e s h a n d b r a c k i s h w a t e r f i s h o f K a r n a t a k a , I n d i a . A s i a n F i s h S c i 1 9 9 7 , 1 0 , 1 4 9 - 1 5 4 . W a f a a A , H e l m y , H a s s a n A m e r M A , N e f i s a a n d E L - S h a y e b . B i o l o g i c a l a n d a n t i - m i c r o b i a l a c t i v i t i e s o f a q u e o u s e x t r a c t s f r o m n e e m t r e e ( A z a d i r a c h t a i n d i c a A . J u s s . , M e l i a c e a e ) . J . A p p . S c i . R e s . , 3 , 1 0 5 0 - 1 0 5 5 ( 2 0 0 7 ) . M y d e e n e t a l . , 2 0 1 1